La reparación de un modelo de defecto crítico del tamaño de calota Uso adiposo derivados de las células del estroma cosechadas desde lipoaspirado

Resumen

Este protocolo describe el aislamiento de tejido adiposo derivado de células estromales de lipoaspirado y la creación de un 4 mm de tamaño crítico defecto craneal para evaluar la regeneración esquelética.

Resumen

Reparación y regeneración del esqueleto craneofacial ofrece la promesa de la formación de tejido de novo a través de un enfoque basado en células utilizando células madre. Derivadas de tejido adiposo células del estroma (ASCs) han demostrado ser una fuente abundante de células madre multipotentes capaces de experimentar diferenciación osteogénica, condrogénicos, adipogénicos, y miogénica. Muchos estudios han explorado el potencial osteogénico de estas células in vivo con el uso de biomateriales andamios diferentes para la entrega celular. Se ha demostrado que mediante la utilización de un osteoconductivos, con recubrimiento de hidroxiapatita poli (láctico-co-glicólico) (PLGA-HA) andamio se sembró con ASC, un defecto de la bóveda craneal de tamaño crítico, un defecto que se define por su incapacidad de someterse espontánea cicatrización durante la vida del animal, se puede mostrar efectivamente la regeneración ósea robusta. Este modelo in vivo demuestra la base de enfoques translacional destinada a regenerar el tejido óseo - el celularcomponente y la matriz biológica. Este método sirve como un modelo para la aplicación clínica final de una célula progenitora hacia la reparación de un defecto específico de tejido.

Protocolo

1. Celda de aislamiento y Expansión

1. Todo el consentimiento del paciente y de los protocolos experimentales fueron revisados ​​y aprobados por la Universidad de Stanford Institutional Review Board (Protocolo # 2188 y # 9999).
2. Obtención de tejido adiposo subcutáneo humano de los procedimientos electivos bajo lipoaspiración local / anestesia general.
3. Habrá dos capas en el lipoaspirado (Figura 1A). El sobrenadante contiene la gran mayoría del material celular procesada. La capa inferior se inyecta solución salina en su mayoría. Adiposo derivado de células estromales se pueden cosechar a partir de cualquiera de las c....

Discusión

Desde el aislamiento de tejido adiposo derivado de células estromales ² de lipoaspirado, estas células se han diferenciado en una amplia variedad de linajes celulares. El tejido adiposo es de origen mesodérmico y por lo tanto, multipotentes derivadas de tejido adiposo células estromales será probablemente más eficaz con aplicación hacia un linaje mesodérmico. La capacidad de generar tejido óseo es especialmente importante dada la escasez de zonas donantes para un autoinjerto y las limitaciones inherentes de l.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo:	Empresa	Número de catálogo	Comentarios (opcional)
			Lipoaspirado Harvest
PBS	Gibco	10010-023
Solución salina equilibrada de Hank	Cellgro	21-023 CV-
La colagenasa	Sigma	C6885-500MG
Filtro de células 100 micras	BD Falcon	352360
Steri-top 500 ml 0,22 micras filtro	Millipore	SCGPT05RE
			Defecto del calvario
Z500 Brushless MicromotorsUM50C	NSK	NSKZ500
Circular Knife 4,0 mm	Xemax quirúrgica	CK40