La mayoría de los estudios de la enfermedad corneal herpética utilizar un modelo de infección primaria. Sin embargo, la infección primaria con el virus HSV-1 no suele conducir a la enfermedad humana. Aquí se describe un modelo de la enfermedad herpética recurrente corneal, que más estrechamente imita la enfermedad humana.
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Artículo de método
Queratitis herpética estromal recurrente en ratones, un modelo para el estudio HSK Humanos
En este artículo
Resumen
Resumen
Enfermedad herpética ocular, denominada queratitis herpética estromal (HSK), es una infección potencialmente cegamiento de la córnea que causa más de 300.000 visitas clínicas cada año para su tratamiento. Entre 1 y 2 por ciento de los pacientes con enfermedad clínica experimentará la pérdida de la visión de la córnea infectada. La gran mayoría de estos casos son el resultado de la reactivación de una infección latente por el herpes simplex virus tipo I y no debido a la enfermedad aguda. Curiosamente, la infección aguda es el modelo más utilizado para estudiar esta enfermedad. Sin embargo, se consideró que un modelo recurrente de HSK sería más un reflejo de lo que ocurre durante la enfermedad clínica. Los modelos animales recurrentes para HSK han empleado tanto en conejos y ratones. La ventaja de los conejos es que experimentan reactivación de la latencia en ausencia de cualquier estímulo conocido. Dicho esto, es difícil de explorar el papel que juegan muchos factores inmunológicos en HSK recurrente debido a que el modelo de conejo no tiene la inmunidadrecursos metodológicos y genéticos que tiene el mouse. Hemos elegido utilizar el modelo de ratón para el HSK recurrente, ya que tiene la ventaja de que hay muchos recursos disponibles y también sabemos que cuando la reactivación se produce debido a la reactivación es inducida por la exposición a la luz UV-B. Hasta el momento, este modelo ha permitido a los laboratorios de usarlo para definir varios factores inmunológicos que son importantes para esta enfermedad. También ha permitido poner a prueba tanto terapéutico y eficacia de la vacuna.
Protocolo
Nota Animal Care: Analgésicos no se utilizan en este modelo ya que son anti-inflamatoria y por lo tanto invalidaría el modelo.
1. Preparación de Virus
- Grow HSV-1 en células Vero (80% confluentes) utilizando una dilución inicial de 0,01 multiplicidad de infección (en matraz T-150, a unos 5 x 10 5 unidades formadoras de placa) durante 3-4 días hasta que todas las células han redondea y son desalojados fácilmente pulsando el matraz.
- Retire el medio a tubos de centrífuga estériles y se centrifuga en Sorvall Legend RT a 4 ° C y 3.500 rpm durante 15 min. Después de eliminar el sobrenadante (ver 1,3), se resuspende e....
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Discusión
El modelo recurrente de la queratitis estromal herpética (HSK) aquí descrito permite al investigador para estudiar HSK humano en un modelo que sea más coherente con la que se observa durante la enfermedad humana. Por lo tanto, los puntos fuertes del modelo son que la enfermedad se produce en el contexto de un sistema inmune que ya tiene por estimulada durante la enfermedad primaria. Dado que estos ratones tienen ya una respuesta inmune a HSV-1, los factores que reactivan que la respuesta inmune son probablemente diferen.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer al Dr. Jay Pepose para ayudar a enseñar el modelo para nosotros. Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud subvenciones EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) y una subvención sin restricciones de Investigación para Prevención de la Ceguera en el Departamento de Oftalmología.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| DMEM | Sigma | D5796 | |
| Suero bovino fetal | Atlanta Biologicals | S11150 | |
| Suero humano | Sigma | S7023 | |
| L-Glutamina | Cellgro | 25-005-C1 | |
| Penicilina/Estreptomicina | Sigma | P4333 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290018 | |
| Centrífuga | Sorvall | Legend RT | |
| Centrífuga | Beckman | 52-21 | |
| Transiluminador | UVP | 95-0452-02 | |
| Sonicador | Branson | Sonifier 450 | |
| Tubos Oak Ridge | Nalgene | Z 720410 | |
| Matraces- 7150 | Corning | 430823 | |
| Placas- 12 pocillos | Corning | CLS 3513 | |
| Placas- 48 pocillos | Corning | CLS 3548 | |
| Tubos cónicos estériles- 30 ml | Corning | CLS 430828 | |
| Aplicadores estériles con punta de algodón | Fisher | 23-400-125 | |
| Agujas de 30G | Becton-Dickinson | 305106 | |
| Agujas de 25G | BD | 305122 | |
| Jeringa de 10 ml | BD | 309602 | |
| Jeringa de 10 ml | BD | 309604 |
Referencias
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic ey....
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Reimpresiones y permisos
