Un<em&gt; In vivo</em&gt; Ensayo de prueba de permeabilidad Vasos Sanguíneos

Resumen

Estamos presentando un In vivo Ensayo para probar la permeabilidad de los vasos sanguíneos. Este ensayo se basa en la inyección intravenosa de un colorante y la posterior visualización de su difusión en espacios intersticiales.

Resumen

Este método se basa en la inyección intravenosa de azul de Evans en ratones como modelo animal de ensayo. El azul de Evans es un colorante que se une a la albúmina. En condiciones fisiológicas el endotelio es impermeable a la albúmina, por lo azul de Evans albúmina permanece unido restringidos dentro de los vasos sanguíneos. En condiciones patológicas que promueven el aumento de la permeabilidad células endoteliales vasculares pierden parcialmente sus contactos estrechos y el endotelio se vuelve permeable a pequeñas proteínas tales como albúmina. Esta condición permite la extravasación de azul de Evans en los tejidos. Un endotelio sano previene la extravasación del colorante en los tejidos vascularizados vecinos. Los órganos con aumento de la permeabilidad mostrará coloración azul aumentó significativamente en comparación con los órganos con endotelio intacto. El nivel de permeabilidad vascular se puede evaluar por simple visualización o por medición cuantitativa del colorante incorporado por miligramo de tejido de control versus animal experimental / tejido. Dos Powerful aspectos de este ensayo son su simplicidad y características cuantitativas. Colorante azul de Evans se puede extraer de los tejidos mediante la incubación de una cantidad específica de tejido en formamida. Evans Blue es el máximo de absorción a 620 nm y la absorbancia es mínimo a 740 nm. Mediante el uso de una curva estándar para el azul de Evans, medidas de densidad óptica se puede convertir en colorante capturado miligramo por miligramo de tejido. El análisis estadístico se debe utilizar para evaluar las diferencias significativas en la permeabilidad vascular.

Introducción

Formación y mantenimiento de barreras permeables selectivas son esenciales para el desarrollo adecuado de los órganos y ^1,2 rendimiento. Las células endoteliales recubren el lumen del vaso sanguíneo y forman una barrera semi-permeable que es esencial en el transporte selectivo entre la sangre y el espacio intersticial de todos los órganos. Una barrera de permeabilidad adecuada se mantiene a través de estrechos célula a célula uniones que están estrictamente controladas por factores de crecimiento, citoquinas y otras moléculas relacionadas con el estrés ^3. La interrupción de la barrera de células endoteliales puede resultar en aumento de la perme....

Protocolo

1. La inyección intravenosa de azul de Evans en la vena lateral de la cola de ratones

1. Preparar una solución de 0,5% estéril de azul de Evans en PBS. Si es necesario, filtro-esterilizar la solución para eliminar cualquier material particulado que no se ha disuelto.
2. Aspirar 200 l Evans solución azul en una jeringa. Evitar todas las burbujas de aire que podrían haber escapado a la jeringa.
3. Coloque los ratones que son 8-12 semanas de edad en un dispositivo de retención para que el animal no es libremente móvil, pero la cola puede ser manejado.
4. Coloque el dispositivo de sujeción del ratón sobre su lado para que la vena lateral de l....

Resultados

Hemos utilizado un ensayo de permeabilidad in vivo para probar las fugas buque en ratones 8-12 semanas de edad. Esta prueba es útil para comparar la permeabilidad relativa vascular entre los animales del fondo genético diferente o en una sola cepa de ratones sometidos a tratamientos que afectan a la vasculatura. Nuestros resultados muestran que una cepa de ratones genéticamente modificados que hemos creado en nuestro laboratorio cuenta con un endotelio más permeable en comparación con ratones de tipo s.......

Discusión

La permeabilidad vascular es un marcador crítico para el estado de los vasos sanguíneos. Aumento de la permeabilidad vascular se ha demostrado que está presente en varias enfermedades sistémicas, incluyendo la diabetes, la hipertensión y las enfermedades autoinmunes ^6,7,8. Aumento de la permeabilidad vascular ha demostrado ser mediada por esfuerzo cortante, factores de crecimiento tales como el factor de crecimiento endotelial vascular y el factor de crecimiento de fibroblastos, mediadores de la inflamación c.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
			REACTIVO
EVANS BLUE	SIGMA	E2129
FORMAMIDA	INVITROGEN	15515-026
PBS			Fosfato 0,2 M 1,5 M NaCl pH 7,4
			EQUIPO
ESPECTROFOTÓMETRO	EPPENDORF	952000006
RATÓN dispositivo de sujeción	Harvard Apparatus	340012
JERINGA	BD	309659
AGUJAS	BD	305106	El calibre de la aguja depende del tamaño del animal.
BALANCE	DENVER INSTRUMENT	TP-64