El uso de un modelo que imita el estado de las enfermedades pulmonares en los seres humanos es crítico para el estudio de la fisiopatología y / o la etiología de una enfermedad en particular y para el desarrollo de la intervención terapéutica. Aquí un método intubación endotraqueal no invasivo que puede entregar directamente materiales exógenos a los pulmones del ratón se presenta.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
No Invasiva Intratraqueal Intubación para Estudiar la Patología y Fisiología de pulmón de ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
El uso de un modelo que imita el estado de las enfermedades pulmonares en los seres humanos es crítico para el estudio de la fisiopatología y / o la etiología de una enfermedad en particular y para el desarrollo de la intervención terapéutica. Con la creciente disponibilidad de knockout y transgénicos derivados, junto con una gran cantidad de información genética, los ratones proporcionan una de las mejores modelos para estudiar los mecanismos moleculares que subyacen a la patología y la fisiología de las enfermedades pulmonares. Inhalación, instilación intranasal, la instilación intratraqueal, y la intubación endotraqueal son las técnicas más utilizadas por varios investigadores para administrar los materiales de interés para los pulmones del ratón. Hay pros y los contras de cada técnica en función de los objetivos de un estudio. Aquí un método intubación endotraqueal no invasivo que puede entregar directamente materiales exógenos a los pulmones del ratón se presenta. Esta técnica se aplica para administrar bleomicina a los pulmones del ratón como un modelo para estudiar la fibrosis pulmonar. </ P>
Introducción
Pulmón es un órgano donde muchas enfermedades devastadoras son comúnmente diagnosticados. Entre ellos, el cáncer de pulmón es el segundo cáncer más diagnosticado en hombres y mujeres, y la causa más común de muerte por cáncer. Enfermedad pulmonar obstructiva crónica, también conocida como el enfisema y la bronquitis crónica, es una enfermedad muy grave y la tercera causa principal de muerte en los Estados Unidos. En 2011, se estimó que 25,9 millones de estadounidenses tenían asma, incluyendo 7,1 millones de niños menores de 18 años. El asma es la tercera causa de hospitalización entre los niños menores de 15 años (American Lung Association,
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
El siguiente protocolo describe un método no invasivo, simple y rápida para entregar materiales de interés para los pulmones del ratón. Este procedimiento fue aprobado por el Comité de Cuidado de Animales y el empleo del Instituto Nacional del Cáncer.
1. Anestesia
- En primer lugar, anestesiar el ratón utilizando una mezcla de ketamina y xilazina (100 mg / kg de peso corporal y 10 mg / kg de peso corporal, respectivamente). Este es el ACUC recomienda la anestesia y la dosis. Con esta cantidad, los ratones son inconscientes por lo menos durante ~ 20 min.
- Aplique un ungüento veterinario para los ojos del ratón con el fin ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Inicialmente, la solución de color verde teñido se utiliza para intubar ratones durante la práctica. El pulmón fue resecado inmediatamente después de la intubación para examinar cómo de manera uniforme el color se distribuye en el pulmón (Figura 2). Esta técnica se ha aplicado para estudiar la fibrosis pulmonar inducida por bleomicina utilizando ratones C57BL / 6. Cuando los ratones fueron intubados por vía intratraqueal con 1,2 U / kg de bleomicina o solución salina como control y la necropsia 3 semana.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Intubación intratraqueal aquí descrito es un método no invasivo simple, pero excelente para entregar de manera uniforme los materiales de interés para los pulmones del ratón. Este método permite el estudio del efecto y / o función del material administrado en la fisiología y / o patología de pulmón. Los materiales administrados pueden ser moléculas endógenas, tales como citocinas, o materiales exógenos tales como productos químicos xenobióticos / fármacos, carcinógenos, contaminantes, alérgenos, o virus que resultan en .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Programa de Investigación Intramural del Instituto Nacional del Cáncer, el Centro para la Investigación del Cáncer.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| KetaVed | Vedco | Ketamina | |
| AnaSed Inyección 20 mg | LLOYD | Xilacina | |
| BioLite | Soporte Braintree Scientific | RIS100 | Para ratones |
| BioLite Sistema de iluminación de intubación | Braintree Scientific | BIO MI-KIT | Para ratones |
| 22 G, catéter intravenoso de 1 pulgada | Terumo | SR-OX2225CA | Para ratones por debajo 30 g. El catéter se utiliza solo para el caso en el que no se utiliza el sistema de iluminación de intubación. |
| Catéter intravenoso de 20 g y 1 pulgada | Terumo | SR-OX2025CA | Para ratones sobre 30 g. El catéter se utiliza solo para el caso en el que no se utiliza el sistema de iluminación de intubación. |
Referencias
- Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. A simple method of mouse lung intubation. J. Vis. Exp. (73), e50318(2013).
- Miller, M. A., et al. Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
