Artículo de método

Análisis cuantitativo y caracterización de lesiones ateroscleróticas en el seno aórtico murino

DOI:

10.3791/50933

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7 de diciembre de 2013

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1Department of Biochemistry and Biomedical Sciences, McMaster University, 2Thrombosis and Atherosclerosis Research Institute, McMaster University

En este artículo

Resumen

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Describimos procedimientos para cuantificar y caracterizar lesiones ateroscleróticas en modelos de ratón utilizando el corte de precisión del seno aórtico y la aorta ascendente combinado con análisis histoquímico e inmunohistoquímico.

Resumen

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La aterosclerosis es una enfermedad de las grandes arterias y una de las principales causas subyacentes de infarto de miocardio y accidente cerebrovascular. Se han desarrollado varios modelos murinos diferentes para facilitar el estudio de la fisiopatología molecular y celular de esta enfermedad. En este manuscrito describimos técnicas específicas para la cuantificación y caracterización de lesiones ateroscleróticas en el seno aórtico murino y la aorta ascendente. La ventaja de este procedimiento es que proporciona una medición precisa del área de la sección transversal y el volumen total de la lesión, que se puede utilizar para comparar la progresión aterosclerótica en diferentes grupos de tratamiento. Esto es posible mediante el uso de las valvas de la válvula como punto de referencia anatómico, junto con un ajuste cuidadoso del ángulo de sección. También describimos los métodos básicos de tinción que se pueden utilizar para comenzar a caracterizar la progresión aterosclerótica. Estos pueden modificarse aún más para investigar antígenos de interés específico para el investigador. Las técnicas descritas son generalmente aplicables a una amplia variedad de modelos dietéticos y genéticamente inducidos de aterogénesis existentes y de nueva creación.

Introducción

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En las últimas dos décadas, el desarrollo y el uso de modelos de ratón propensos a la aterosclerosis a través de la manipulación dietética y/o genética han aumentado significativamente nuestra comprensión de los mecanismos moleculares y celulares implicados en el desarrollo de lesiones ateroscleróticas1-3. Gran parte de nuestro conocimiento y comprensión de la aterogénesis proviene de estudios realizados en ratones con deficiencia de apolipoproteína (Apo)-E4 ratones, en los que se desarrollan espontáneamente lesiones ateroscleróticas y deficientes en re....

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Protocolo

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La Junta de Ética de Investigación Animal de la Universidad McMaster ha aprobado previamente todos los procedimientos descritos en este documento.

1. Cosechando corazón y aorta

  1. Anestesia al ratón y abre cuidadosamente la cavidad torácica para revelar el corazón y la aorta proximal.
    1. Extraiga la sangre del ratón mediante punción directa del ventrículo derecho del corazón.
      Nota: La sangre puede almacenarse y utilizarse para el análisis de lípidos plasmáticos y otros factores transmitidos por la sangre.
  2. Eutanasia del ratón por luxación cervical.
  3. Enjuague la vasculatura con 5 ml d....

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Resultados

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Los ratones LDLR-/- de cinco semanas de edad fueron alimentados con una dieta estándar o una dieta alta en grasas durante diez semanas. Los ratones fueron sacrificados y perfundidos con formol como se describió anteriormente. Se prepararon cortes transversales del seno aórtico y se tiñeron con hematoxilina y eosina para determinar el área y el volumen de la lesión (Figura 4). Cuando los ratones se alimentan con una dieta estándar de comida, el desarrollo aterosclerótico es muy limitado y puede no ser de.......

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Discusión

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La aterosclerosis es una enfermedad crónica compleja de las arterias musculares grandes que es una de las principales causas subyacentes de infarto de miocardio y accidente cerebrovascular. La progresión de la enfermedad implica la interacción de muchos tipos de células diferentes dentro de la pared arterial, con células sanguíneas circulantes, partículas de lipoproteínas y otros factores transmitidos por la sangre que recién estamos comenzando a comprender. Gran parte de nuestro conocimiento actual sobre el desarrollo y.......

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Divulgaciones

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Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

Agradecimientos

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Esta investigación fue financiada por una subvención operativa de los Institutos Canadienses de Ciencias de la Salud y la Asociación Canadiense de Diabetes. DEV cuenta con una beca de la Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica (CONICYT, Chile).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Ratones deficientes en LDLR ( D2.129S7(B6)-Ldlrtm1Her/J)laboratorio Jackson#002207
FormalinaSigma-AldrichHT5011
Moldes de histologíaTed Pella Inc27195
ParafinaParamat19286-10
Portaobjetos recubiertosFisher12-550-15
Recipientes de disolventesTissue Tek II4457
MicrotomoLeicaRM22S5
Baño de aguaVWR80086-982
MicroscopioOlympusBX41TF
CámaraOlympusDP72
ImageJNIHwww.rsbweb.nih.gov/ij/
ProcesadorSakura FinetekVIP6-A1
Casetes de procesamientoVWR18000-134
Cocina de presiónNordic Ware
CoverslipFisher12-545-M
PBSSigma-AldrichP3813
Hoja de micrótomoThermo Scientific30-518-35
Medio de montaje antidecoloraciónSigma-AldrichF-4680
Montaje de xileno medio Sigma-Aldrich44581
Medio de montaje AquousSigma-AldrichI1161
Mac-3 anbodyBD Pharmingen553322
DAPISigma-AldrichD9542
F4/80anticuerpo AbcamAb6640
Anticuerpo alfa actinaSanta Cruz BiotechnologySC-32251
Mayer’ s HematoxilinaSigma-AldrichE4382
Eosina YSigma-AldrichMHS16
DAB (3,3'-Diaminobenzidina)DakoK3468
El stock de

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zadelaar, S., Kleemann, R., et al. Mouse models for atherosclerosis and pharmaceutical modifiers. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27 (8), 1706-1721 (2007).
  2. Daugherty, A., Rateri, D. L. Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.

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Etiquetas

Corte histol gicoinclusi n en parafinatinci n de hematoxilina y eosinaan lisis inmunohistoqu micocuantificaci n de lesionesmodelo de rat n LDLRdieta alta en grasas

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