Plasticidad neuronal es una característica de la (GI) tracto gastrointestinal cada vez más reconocido, pero insuficientemente entendida. Aquí, en el ejemplo de trastornos pancreáticos humanos, se presenta un ensayo de neuroplasticidad in vitro para el estudio de la plasticidad neuronal en el tracto GI, tanto a nivel morfológico y funcional.
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Artículo de método
Simulación de páncreas Neuroplasticidad:
En este artículo
Resumen
Resumen
La neuroplasticidad es una característica inherente del sistema y gastrointestinal (GI) inervación nervioso entérico en condiciones patológicas. Sin embargo, el papel fisiopatológico de la neuroplasticidad en trastornos GI sigue siendo desconocido. Modelos experimentales novedosas que permiten la simulación y la modulación de la neuroplasticidad GI pueden permitir una mayor apreciación de la contribución de la neuroplasticidad en particular las enfermedades gastrointestinales, como el cáncer de páncreas (CP) y la pancreatitis crónica (PC). Aquí, se presenta un protocolo para la simulación de la neuroplasticidad de páncreas en condiciones in vitro utilizando recién nacido ganglios dorsales de rata raíz (DRG) y el plexo mientérico (MP) neuronas. Este enfoque de doble neurona no sólo permite la monitorización de tanto la neuroplasticidad-órgano intrínseca y extrínseca-, pero también representa una herramienta valiosa para evaluar la morfología neuronal y glial y electrofisiología. Además, permite la modulación funcional de contenidos microambientales suministrados por el estudio de su impact en la neuroplasticidad. Una vez establecido, el presente ensayo neuroplasticidad tiene el potencial de ser aplicable al estudio de la neuroplasticidad en cualquier órgano GI.
Introducción
Las alteraciones en la gastrointestinal (GI) morfología del nervio y la densidad han llamado la atención de los gastroenterólogos y patólogos durante mucho tiempo, pero su relevancia para la fisiopatología de las enfermedades gastrointestinales se desconoce 1-3. De hecho, varios trastornos GI altamente comunes tales como la gastritis, la esofagitis de reflujo, la colitis, diverticulitis y apendicitis se asocian con el aumento de la densidad de inervación en áreas tejido inflamado 1. Sin embargo, hasta ahora no se ha prestado atención real a los mecanismos y significado de la neuroplasticidad en el tracto GI. ¿Los nervios GI morfológicamente alte....
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Protocolo
Todos los procedimientos experimentales con animales en el protocolo siguen las pautas de cuidado de animales de Technische Universität München, Alemania.
1. Medios / Extracto de Preparación
- Homogeneización de tejidos
La calidad de la homogeneización del tejido es fundamental para la posterior detección de alteraciones de plasticidad en las neuronas cultivadas. Aquí, se recomienda un homogeneizador que permite la disociación de tejido sin gran aumento en la temperatura del tejido.- Transferencia de 5 mm x 5 mm x 5 mm cubos de tejido pancreático directamente desde -80 º C en nitrógeno líquido y coloque en una fase....
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Resultados
Neuroplasticidad morfológica
En el rango de edad indicado de ratas recién nacidas (P2-12) y las densidades de siembra, MP y DRG neuronas ya construir densas redes neuronales después de 48 horas (Figura 2A). Comparación de la densidad de axones entre las neuronas cultivadas en el CP, CP y sus extractos NP revela una mayor densidad de axones de las neuronas DRG en el CP o extractos del PP que en los extractos NP (Figura 2A) 5. Particularmen.......
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Discusión
El presente protocolo tiene por objeto ilustrar la metodología detrás del ensayo de la neuroplasticidad pancreática in vitro que fue desarrollado recientemente por nuestro grupo para estudiar los mecanismos de neuroplasticidad en el CP y CP 5. El protocolo consiste en un procedimiento de tres días que se pueden aplicar fácilmente una vez que el artista intérprete o ejecutante ha adquirido suficiente experiencia en el aislamiento y cultivo de neuronas de DRG y MP. Además, representa una herramienta va.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses en conflicto y no divulgación de información financiera.
Agradecimientos
Todos los autores contribuyeron a la creación y validación de la prueba presentada y el proyecto del manuscrito.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Hidrobromuro de poli-D-lisina | Sigma-Aldrich | P1149 | |
| Ornitina/laminina | Sigma-Aldrich | P2533/L4544 | |
| 13 mm Cubreobjetos | Merck | Para uso en placas de 24 pocillos | |
| Desmembranador S | Sartorius | ||
| Anticuerpo anti-beta-III-tubulina | Millipore | MAB1637 | concentración 1:200 |
| Anti-GFAP-anticuerpo | DAKO | M0761 | concentración 1:400 |
| Tampón RIPA + inhibidor | Cualquier proveedor | ||
| Medio neurobasal | Gibco/Ciencias de la Vida | 21103-049 | |
| B-27 Suplemento | Gibco/Ciencias de la Vida | 17504044 | Se sabe que la calidad del B-27 depende del número de lote |
| Gentamicina/Metronidazol | Cualquiera proveedor | ||
| Medio esencial mínimo | Gibco/Ciencias de la Vida | 31095-029 | |
| Hank' s Solución salina equilibrada (HBSS) | Gibco/Ciencias de la Vida | 24020133 | Mejora la actividad de la colagenasa cuando contiene Ca/Mg |
| Colagenasa tipo II | Worthington Biochemical | CLS-2 | Obtenga lotes con una actividad de al menos 200 U/mg |
| Tripsina-EDTA 0,25% | Gibco/Ciencias de la Vida | 25200056 | |
| 4% Paraformaldehído | Cualquier proveedor | ||
| analySIS docu software | Olympus |
Referencias
- Demir, I. E., Schafer, K. H., Tieftrunk, E., Friess, H., Ceyhan, G. O. Neural plasticity in the gastrointestinal tract: chronic inflammation, neurotrophic signals, and hypersensitivity. Acta Neuropathol. 125, 491-509 (2013).
- Vasina, V., et al.
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Reimpresiones y permisos
