Summary
प्राथमिक आक्रामक orthotopic मूत्राशय कैंसर xenografts टीका लगाना स्थापित तकनीक laparotomy और मूत्राशय की जुटाने की आवश्यकता है. यह प्रक्रिया, चूहों पर महत्वपूर्ण रुग्णता inflicts तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण और समय लेने वाली है. इसलिए हम percutaneous दृष्टिकोण अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन के उपयोग, एक उच्च परिशुद्धता विकसित की है.
Abstract
Orthotopic मूत्राशय कैंसर xenografts vivo में आणविक सेलुलर जोड़तोड़ और नए चिकित्सीय एजेंट का अध्ययन करने के लिए सोने के मानक हैं. उपयुक्त सेल लाइनों intravesical टपकाना (nonmuscle आक्रामक विकास के मॉडल) या मूत्राशय की दीवार में अंदर का इंजेक्शन (आक्रामक विकास के मॉडल) द्वारा या तो inoculated हैं. दोनों प्रक्रियाओं जटिल और अत्यधिक समय लेने वाली हैं. इसके अतिरिक्त, सतही मॉडल tumorigenic निम्नलिखित टपकाना हैं कि सेल लाइनों की कमी के कारण अपनी कमियों है. अंदर का इंजेक्शन, दूसरी ओर, प्रक्रिया के invasiveness और मेजबान माउस के लिए जुड़े रुग्णता से हुईं है.
मन में इन कमियों के साथ, हम orthotopic मूत्राशय कैंसर xenografts बनाने के लिए एक न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण विकसित करने के लिए पिछले विधियों संशोधित. अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन का प्रयोग हम सफलतापूर्वक मूत्राशय कैंसर कोशिका लाइनों उम uc1, उम UC3 और उम के percutaneous टीका प्रदर्शन किया50 athymic नग्न में UC13. हम इस दृष्टिकोण, कुशल, सटीक और सुरक्षित समय है कि प्रदर्शन कर रहे हैं. इस तकनीक के साथ, शुरू में एक अंतरिक्ष पीबीएस के साथ मूत्राशय म्यूकोसा के तहत बनाई गई है, और ट्यूमर कोशिकाओं को फिर एक दूसरे चरण में इस अंतरिक्ष में इंजेक्ट कर रहे हैं. ट्यूमर के विकास bioluminescence इमेजिंग और अल्ट्रासाउंड के साथ नियमित अंतराल पर निगरानी रखी जाती है. औसत ट्यूमर मात्रा में अध्ययन की अवधि में हमारे 50 चूहों में से एक है, लेकिन सभी में में तेजी से वृद्धि हुई.
हमारी संस्था में, एक, न्यूनतम इनवेसिव तेजी से और बहुत ही सटीक तरीके से मूत्राशय कैंसर xenograft टीका अनुमति देता है जो इस उपन्यास दृष्टिकोण, पारंपरिक मॉडल बदल दिया गया है.
Introduction
कैंसर अनुसंधान ट्यूमर जीव विज्ञान के बारे में हमारी समझ को गहरा करने के क्रम में मरीज के ट्यूमर से निकाली गई कोशिका लाइनों का उपयोग मानव कैंसर के पशु मॉडल पर निर्भर है. विभिन्न उपचार रणनीति के तहत vivo में विकास के विश्लेषण के लिए murine orthotopic मूत्राशय के कैंसर मॉडल संदर्भ मानक 1,2 रहते हैं. immunocompromised चूहों (xenograft मॉडल) में मानव मूत्राशय कैंसर कोशिकाओं का टीका intravesical टपकाना पर मूत्राशय दीवार में ("intravesical मॉडल") 3,4,5 या डायरेक्ट इंजेक्शन ("अंदर का मॉडल") 6,7 निर्भर करता है. दोनों तकनीकों भी चूहों 8,9 में किया जा सकता है.
Intravesical टपकाना तो उपन्यास उपचार एजेंटों के बाद intravesical टपकाना करने के लिए उत्तरदायी हैं जो मूत्राशय की urothelial सतह पर ट्यूमर के गठन को प्रेरित करता है. हालांकि, इस पद्धति के माध्यम से दिया जब मज़बूती tumorigenic हैं जो सेल लाइनों की संख्या एक सीमित हैडी उन सेल लाइनों, KU7 में से एक, हाल ही में हेला 4,10 होना प्रदर्शित किया गया है. Intravesical टपकाना भी समय की वजह से आवश्यक ध्यान केन्द्रित करना टाइम्स को लगता है, और यह अक्सर मूत्रमार्ग, मूत्रवाहिनी, और गुर्दे श्रोणि 11 सहित मूत्र पथ के आसन्न तत्वों, में ट्यूमर के विकास को प्रेरित करता है. इसके अलावा, intravesical टपकाना अक्सर मूत्रवाहिनी मूत्राशय में प्रवेश जहां मूत्राशय की मंजिल पर ट्यूमर के विकास की ओर जाता है, और इस ऊपरी पथ बाधा और सहवर्ती गुर्दे की विफलता का कारण बन सकता है.
प्रणालीगत उपचार के लिए उपयुक्त हैं जो प्राथमिक आक्रामक मूत्राशय कैंसर xenografts मूत्राशय दीवार 12 में ट्यूमर कोशिकाओं के प्रत्यक्ष इंजेक्शन द्वारा बनाई गई हैं. कई सेल लाइनों इस मॉडल में पर्याप्त रूप से बढ़ने हालांकि, इसकी सीमा एक पेट चीरा 13 के लिए जरूरत से संबंधित मॉडल के invasiveness है. मॉडल भी कारण ठीक पेशी दीवार में कोशिकाओं को इंजेक्शन लगाने की तकनीकी कठिनाई को जानने के लिए चुनौती दे रहा हैमूत्राशय की.
चूहों में orthotopic प्राथमिक आक्रामक मूत्राशय कैंसर xenografts की स्थापना के लिए एक उपन्यास दृष्टिकोण "अंदर का मॉडल" की मौजूदा कमियों को संबोधित करने के क्रम में हमारे विभाग में विकसित किया गया है. हम सफलतापूर्वक स्थापित आक्रामक मॉडल को बदलने के लिए इस उपन्यास तकनीक में जिसके परिणामस्वरूप पूर्वकाल मूत्राशय दीवार में मूत्राशय कैंसर कोशिकाओं के percutaneous, अल्ट्रासाउंड निर्देशित इंजेक्शन का अनुकूलन करने में सक्षम थे. इसके अलावा हम संभावित "अंदर का मॉडल" की सटीकता और reproducibility में वृद्धि की है.
Protocol
सभी पशु प्रक्रियाओं पशु की देखभाल पर कनाडा परिषद (CCAC) के दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया. प्रोटोकॉल ब्रिटिश कोलंबिया विश्वविद्यालय के पशु देखभाल समिति (: A10-0192 प्रोटोकॉल संख्या) द्वारा अनुमोदित किया गया था.
1. सेल लाइनों की तैयारी
- डीएनए फिंगरप्रिंटिंग 7 से संबंधित मानव मूत्राशय कैंसर कोशिका लाइनों की पहचान की पुष्टि.
- Bioluminescence द्वारा xenograft ट्यूमर के विकास को विश्लेषण के लिए, जुगनू luciferase जीन 3 ले जाने के एक lentiviral निर्माण के साथ सेल लाइनों transfect.
- पिघलना और एक humidified 5% सीओ 2 के वातावरण में 37 डिग्री सेल्सियस पर 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) के साथ Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम में मौजूदा सेल लाइनों (DMEM) का विस्तार. बीतने कोशिकाओं में कम से कम 3x लेकिन 3 महीने से अधिक संस्कृति टाइम्स से बचें.
2. सेल निलंबन की तैयारी
- Matrigel पिघलना. नीचे तापमान रखेंजेल की वृद्धि की चिपचिपाहट से बचने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस.
- 70% की एक संगम पर कोशिकाओं Trypsinize और सामान्य विकास मीडिया में निलंबित.
- एक hemocytometer या स्वचालित सेल काउंटर के साथ सेल संख्या की गणना.
- 200 x जी पर 5 मिनट के लिए सेल निलंबन स्पिन. सतह पर तैरनेवाला निकालें.
- (8-15 x 10 6 / एमएल) का उपयोग सेल लाइन पर निर्भर है और वांछित विकास कैनेटीक्स है जो वांछित सेल एकाग्रता तक पहुँचने के क्रम में DMEM (10% FBS) और Matrigel (1:1 अनुपात) की उचित मात्रा में जोड़ें. ट्यूमर सेल निलंबन के इंजेक्शन मात्रा 40 μl हो जाएगा.
- ऊपर और नीचे pipetting (P1000) द्वारा अच्छी तरह मिक्स, निलंबन में हवाई बुलबुले बनाने से बचें.
3. पशु की तैयारी
नोट: नियत कदम 4.7 में transurethral कैथीटेराइजेशन के लिए क्षमता की जरूरत है, मादा चूहों इस पशु मॉडल में वरीय लिंग हैं.
- हाउस चूहों संस्थागत और राष्ट्रीय पशु की देखभाल गुजरात के अनुसारidelines. चूहों को शामिल सभी प्रयोगों के लिए आचार समिति अनुमोदन प्राप्त करते हैं.
- 3 isoflurane% / ऑक्सीजन के मिश्रण के साथ चूहों anesthetize. पशुओं के उचित anesthetization (पैर की अंगुली चुटकी करने जैसे unresponsiveness) की पुष्टि करें.
4. प्रयोगात्मक सेटअप
- फ्लैट कठोर प्लास्टिक सामग्री [चित्रा 2 मैं] की किसी भी तरह से मूत्राशय स्थिरीकरण काटें. ध्यान से पट्टा का निरीक्षण किया और चूहों के लिए आवेदन करने से पहले किसी भी तेज किनारों को हटा दें.
- महत्वपूर्ण संकेत की सतत निगरानी के साथ छोटे पशु इमेजिंग मंच की [चित्रा 1 मैं] गर्म इमेजिंग मेज पर पशु माउंट. [चित्रा 1 तृतीय] एक रबर बैंड के साथ निचले अंगों को ठीक करें.
- 2% chlorhexidine gluconate साथ पेट शुद्ध करना और एक बाँझ कपास टिप के साथ त्वचा साफ कर लें.
- मूत्राशय स्थिरीकरण पट्टा के साथ मूत्राशय [चित्रा 2 द्वितीय] स्थिर. इस प्रकार, एक चोरीकदम 5.6 में अंदर का इंजेक्शन दौरान मूत्राशय का परहेज किया जाएगा.
- पेट के निचले हिस्से को बाँझ अल्ट्रासाउंड जेल लागू करें.
- धीरे धीरे अल्ट्रासाउंड scanhead (आवृत्ति 40 मेगाहर्ट्ज) त्वचा के लिए [चित्रा 1 चतुर्थ] (45-70 डिग्री के कपाल कोण के साथ अनुदैर्ध्य) दृष्टिकोण और अल्ट्रासाउंड स्क्रीन पर मूत्राशय [चित्रा 3 मैं] कल्पना.
- मूत्राशय खाली है, तो एक transurethral 24 जी angiocatheter के माध्यम से 50 μl बाँझ, गर्म फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ भरें.
5. मूत्राशय दीवार परतों के पृथक्करण
- पीबीएस से भरा है और एक 30 ग्राम से जुड़े एक 1.0 मिलीलीटर सिरिंज संलग्न, ¾ सुई में सिरिंज दबाना करने के लिए (पूर्व से निर्देशित बेवल).
- एक 30-45 डिग्री कोण में सिर्फ जघन हड्डी से ऊपर त्वचा की दिशा में सुई (अल्ट्रासाउंड scanhead के अनुदैर्ध्य अक्ष के सापेक्ष 80-90 ° [चित्रा 1]) की स्थिति.
- सुई का पता लगानेअल्ट्रासाउंड स्क्रीन पर.
- धीरे धीरे त्वचा और पेट की दीवार की मांसपेशियों [3 चित्र द्वितीय] छेदना.
- (अब पीछे निर्देशित) सुई 180 डिग्री का उठाव मुड़ें.
- म्यूकोसा मर्मज्ञ बिना मूत्राशय दीवार में सुई की नोक डालें [चित्रा 3 तृतीय]
- धीरे धीरे एक कृत्रिम अंतरिक्ष [चित्रा 3 चतुर्थ] बनाने के क्रम में पेशी परत और म्यूकोसा के बीच पीबीएस के 50 μl इंजेक्षन.
नोट: म्यूकोसा accidently कदम 5.6 दौरान छेदा जाता है, तो धीरे धीरे सुई वापस खींच और mucosal परत सुई नोक पर वापस फ़्लिप किया गया है के बाद पीबीएस के 50 μl इंजेक्षन. - सुई वापस ले लें.
6. मूत्राशय कैंसर कोशिकाओं के अंदर का टीका
- एक 30 जी के साथ (Matrigel में निलंबित कैंसर कोशिकाओं से भरा) एक दूसरे 1.0 मिलीलीटर सिरिंज संलग्न, ¾ सिरिंज दबाना करने के लिए सुई में.
- एक ही सुई की नोक गाइडकदम 5.7 में बनाया गया था जो पीबीएस भरा अंतरिक्ष.
- इस अंतरिक्ष में सेल निलंबन के 40 μl इंजेक्षन [3 वी और छठी आंकड़े].
- सुई वापस ले लें.
7. बाद के हस्तक्षेप सहायक देखभाल
- इमेजिंग मंच से माउस उतरना.
- संवेदनाहारी से उबरने जबकि सतत निगरानी के तहत एक गर्म और आरामदायक वातावरण में पशु रखें.
- चेतना और सामान्य ambulation शुरू करने के बाद, अपने घर पिंजरे में वापस जानवरों की जगह.
Representative Results
तीन अलग ट्यूमर सेल लाइनों (उम uc1 ल्यूक, उम UC3 ल्यूक और उम UC13 ल्यूक) के अंदर का इंजेक्शन लगातार तीन दिनों पर अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन में 50 पशुओं में प्रदर्शन किया गया था. टीका कुशलता से प्रदर्शन किया गया था (समय 5.7 मिनट / पशु मतलब है) और किसी भी अंतर या बाद के हस्तक्षेप जटिलताओं के साथ नहीं जुड़े थे.
ट्यूमर के विकास की निगरानी अल्ट्रासाउंड इमेजिंग और bioluminescence द्वारा किया गया था. दिन # 3 पर एक ट्यूमर सभी 50 जानवरों की पूर्वकाल मूत्राशय [चित्रा 4 मैं] में अल्ट्रासाउंड से पता लगाया जा सकता है. चूहों के 98% अनुवर्ती अवधि के दौरान लगातार ट्यूमर के विकास को दिखाया [आंकड़े 4 और 5]. उम UC3 ल्यूक का टीका के बाद, एक माउस intraperitoneal ट्यूमर प्रसार और एक दूसरे जानवर [तालिका 1] में दिन # 7 के बाद involuted ट्यूमर विकसित की है. यह इस नई तकनीक के साथ inoculated चूहों के पहले समूह था.
NT "> चूहों दिन # 24, # 28 पर बलिदान किया गया, और # 37 क्रमशः उम UC3 ल्यूक, उम uc1 ल्यूक और उम UC13 ल्यूक, का टीका के बाद. xenograft ट्यूमर hematoxylin और eosin पर काटा और जांच की गई (एच ई ) वर्गों. सभी ट्यूमर मांसपेशी आक्रामक थे और कुछ perivesical वसा में घुसपैठ की है, लेकिन आसन्न अंगों में कोई आक्रमण [6 चित्रा मैं]. उम UC13 ल्यूक ट्यूमर असर चूहों के 60% और उम UC3 ल्यूक असर चूहों के 20% मनाया गया ट्यूमर धुंधला [6 चित्रा द्वितीय] एच ई द्वारा की पुष्टि की थी जो retroperitoneal लिम्फ नोड मेटास्टेसिस विकसित की है.
चित्रा 1. छवि और प्रयोगात्मक स्थापना के योजनाबद्ध चित्रण. माउस गर्म आपरेशन टेबल (मैं) पर मुहिम शुरू की है और <(संज्ञाहरण के तहत आयोजितमजबूत> द्वितीय) 3% isoflurane / ऑक्सीजन के मिश्रण के साथ. निचले अंगों एक रबर बैंड (तृतीय) के साथ तय कर रहे हैं. त्वचा (45-70 डिग्री के कपाल कोण के साथ अनुदैर्ध्य संरेखण) के लिए अल्ट्रासाउंड scanhead (चतुर्थ) के करीब पहुंच जाने के बाद मूत्राशय (वी) अल्ट्रासाउंड स्क्रीन पर कल्पना है. एक 30 जी सुई (छठे) के साथ एक सिरिंज 30-45 डिग्री के कोण (अल्ट्रासाउंड scanhead के अनुदैर्ध्य अक्ष के लिए 80-90 डिग्री रिश्तेदार) में त्वचा के लिए निर्देशित है.
चित्रा 2. मूत्राशय का स्थिरीकरण. आयाम और मूत्राशय स्थिरीकरण पट्टा (आई) का निर्माण करने के चित्रण का पट्टा पेट के निचले हिस्से से जुड़ी है और मूत्राशय (द्वितीय) immobilizes है. इस प्रकार एक चोरी अंदर का इंजेक्शन दौरान मूत्राशय बचा है.
चित्रा 3. अल्ट्रासाउंड स्क्रीन (मैं) पर मूत्राशय के ट्यूमर कोशिकाओं के अंदर का टीका. विज़ुअलाइज़ेशन. त्वचा और पेट की दीवार की मांसपेशियों का छिद्र (द्वितीय). म्यूकोसा की पैठ बिना मूत्राशय दीवार में सुई प्रविष्टि (तृतीय). पेशी परत और धीमी इंजेक्शन के बाद म्यूकोसा के बीच पीबीएस (50 μl) (चतुर्थ). अंदर का कृत्रिम रूप से बनाया अंतरिक्ष (वी, vi) में Matrigel में निलंबित ट्यूमर कोशिकाओं.
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चित्रा 4. . अल्ट्रासाउंड द्वारा अनुवर्ती अल्ट्रासाउंड द्वारा सतत अनुवर्ती ट्यूमर मात्रा में उल्लेखनीय वृद्धि से पता चला है (मैं: दिन # 3, द्वितीय: दिन # 7, तृतीय: दिन # 13).
चित्रा 5. Bioluminescence द्वारा अनुवर्ती bioluminescence द्वारा. सतत अनुवर्ती अध्ययन की अवधि में luminescence में लगातार वृद्धि देखी गई.
चित्रा 6. Xenograft ट्यूमर और लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के प्रोटोकॉल. एक प्रतिनिधि xenograft टू की पूर्ण एच ई अनुभाग में mor आसन्न अंगों (मैं) में आक्रमण के बिना मांसपेशी में आक्रामक विकास का प्रदर्शन है. उम UC13 ल्यूक ट्यूमर असर चूहों के 60% और उम UC3 ल्यूक ट्यूमर प्रस्तुत retroperitoneal लिम्फ नोड मेटास्टेसिस (द्वितीय) असर चूहों के 20%.
| टीका सेल लाइन | उम uc1 ल्यूक | उम UC3 ल्यूक | उम UC13 ल्यूक | |
| चूहों की संख्या | 20 | 15 | 15 | |
| वॉल्यूम इंजेक्शन, μL | idth: 64px; ">40 | 50 | 50 | |
| कोशिका गिनती, निरपेक्ष | 3.6 x 10 5 | 6 x 10 5 | 5.5 x 10 5 | |
| पशु प्रति समय, मिनट | 3.4 (1.6 ±) | 7.7 (3.7 ±) | 6.8 (2.9 ±) | |
| ट्यूमर घटना | 49 (98%) | |||
| 20 (100%) | 14 (93%) | 15 (100%) | ||
| लसीका नोड मेटास्टेसिस | 0 | 3 (20%) | 9 (60%) | |
| का पालन करें अप (दिन) | 28 | 22 [इलाज से पहले] | 28 [इलाज से पहले] | |
| ट्यूमर मात्रा (μL) | सुबह 4 | 11.6 (1.3 ±) | 12.5 (1.7 ±) | 14.4 (1.3 ±) |
| अंत में | 394.6 (72.4 ±) | 288.7 (66.1 ±) | 78.3 (13.4 ±) | |
| अनुवर्तन | ||||
| ट्यूमर luminescence (फोटॉनों / सेक) | सुबह 4 | 4.6 x 10 8 | 2.0 x 10 8 | 5.8 x 10 8 |
| (9.4 x 10 7 ±) | (3.7 x 10 7 ±) | (1.3 x 10 8 ±) | ||
| अंत में | 1.9 x 10 10 | 1.4 x 10 10 | 1.5 x 10 10 | |
| अनुवर्तन | (4.0 x 10 9 ±) | (2.3 x 10 9 ±) | (1.9 x 10 9 ±) | |
तालिका 1. अल्ट्रासाउंड निर्देशित ट्यूमर सेल इंजेक्शन - प्रक्रिया और परिणाम.
Discussion
कैंसर के उपचार में लगभग सभी प्रमुख अग्रिमों नैदानिक परीक्षण की शुरुआत से पहले पशु मॉडल में परीक्षण की आवश्यकता होगी. कैंसर के पशु मॉडल vivo में ट्यूमर जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए सक्षम शोधकर्ताओं कि आवश्यक उपकरण हैं. Orthotopic xenograft मॉडल 1,2 सोने के मानक बना रहेगा और (सेल लाइनों के चयन के मामले में) सबसे अधिक लचीलापन प्रदान करते हैं और सबसे अधिक व्यावहारिक उपयोगिता जारी है.
सचित्र प्रक्रिया हम 100% की एक तकनीकी सफलता दर के साथ तीन अलग सेल लाइनों का अल्ट्रासाउंड निर्देशित percutaneous इंजेक्शन द्वारा xenograft ट्यूमर की स्थापना की पहले से Dinney एट अल. 12 से वर्णित orthotopic मॉडल की एक न्यूनतम इनवेसिव संशोधन है. निरंतर अनुवर्ती के दौरान, चूहों के 98% ट्यूमर मात्रा में निरंतर वृद्धि का प्रदर्शन किया.
एक न्यूनतम इनवेसिव तकनीक प्रदर्शन करके हम अंदर का मॉडल की मौजूदा सीमाओं को संबोधित कर रहे थे. Respe इसके अलावापशु कल्याण cting, इस प्रक्रिया के कम invasiveness भी शल्य जटिलताओं की संख्या कम से vivo में प्रयोगों के reproducibility के लिए योगदान देता है. यह अत्यधिक एक उदर laparotomy और घाव बंद करने के लिए जुड़े जरूरत से बचने के लिए प्रभावी समय है. हम (1.6 ±) 3.4 मिनट के लिए काफी पशु प्रति प्रक्रिया समय कम करने में सक्षम थे. हालांकि, हमारे उपन्यास दृष्टिकोण का मुख्य लाभ यह है कि अपनी सटीकता है. उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड हमें मूत्राशय दीवार की म्यूकोसा तहत खारा इंजेक्शन के द्वारा बनाई गई अंतरिक्ष कल्पना करने के लिए अनुमति देता है. यह पहला कदम इंजेक्शन एक दूसरे चरण में ट्यूमर सेल इंजेक्शन की सुविधा और ट्यूमर सेल spillage के जोखिम को कम करता है. यह यह सुई प्लेसमेंट कल्पना करना असंभव है और इंजेक्शन की सही गहराई के बारे में अनिश्चितता का एक तत्व हमेशा वहाँ है जहाँ laparotomy के बाद अंदर का इंजेक्शन की तकनीक, को विरोधाभासों. इसके अलावा, हम कड़ाई से पूर्वकाल मूत्राशय दीवार में ट्यूमर कोशिकाओं inoculating कर रहे हैं, के रूप में ट्यूमर growtपीछे मूत्राशय दीवार पर घंटे बचा है. इसके बाद ureteral orifices की निकटता में ट्यूमर के विकास की वजह से प्रतिरोधी जटिलताओं की दर अत्यंत दुर्लभ है. यह साथ प्रभाव लंबे समय तक विकास और उपचार की अवधि के लिए अनुमति देता है.
अल्ट्रासाउंड निर्देशित ट्यूमर टीका की मुख्य सीमा पर्याप्त तकनीकी उपकरणों की जरूरत है. इसलिए इस प्रक्रिया के प्रदर्शन की संभावना मानव कैंसर के पशु मॉडल में विशेष कर रहे हैं, जो केन्द्रों के लिए प्रतिबंधित कर दिया जाएगा. इस तरह के उपन्यास पशु मॉडलिंग में विशेषज्ञता के साथ इन संस्थाओं और समूहों के बाहर अनुसंधान समूहों के बीच सहयोग को प्रोत्साहित करना चाहिए.
अल्ट्रासाउंड इमेजिंग और कुछ मैनुअल निपुणता के साथ परिचित पर निर्भर है, इस मॉडल सक्षम निर्देश के तहत सीखना आसान है. प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदम नमक के साथ मूत्राशय की दीवार में एक कृत्रिम अंतरिक्ष submucosally की रचना है. इस अंतरिक्ष वेध ओ बिना निर्माण के बादmucosal परत च, यह कई मिनट के लिए स्थिर बनी हुई है. ट्यूमर कोशिकाओं को टीका लगाना करने के क्रम में इस अंतरिक्ष में दूसरी सुई का मार्गदर्शन अपेक्षाकृत सरल है. submucosal स्थान के निर्माण के दौरान मुख्य जटिलता मूत्राशय लुमेन में सुई के छिद्र है. एक submucosal स्थान के निर्माण, हालांकि, संभव बनी हुई है. सुई मूत्राशय दीवार में धीरे धीरे वापस लिया जाए और खारा mucosal परत सुई की नोक पर flips बस जब इंजेक्शन. इस पैंतरेबाज़ी के बाद submucosal अंतरिक्ष कम स्थिर है (खारा 30-60 सेकंड के भीतर मूत्राशय लुमेन करने से बच जाएगा) और ट्यूमर कोशिकाओं के इंजेक्शन जल्दी से प्रदर्शन किया जाना है. मूत्राशय लुमेन में ट्यूमर कोशिकाओं की spillage म्यूकोसा की वेध के साथ इन मामलों में हो सकता है. अंदर का अंतरिक्ष से ट्यूमर कोशिकाओं के नुकसान अनुवर्ती के दौरान एक कम मात्रा ट्यूमर का कारण बन सकता है, हम किसी भी intravesical ट्यूमर तेज कभी नहीं देखा है.
एक अन्य संभावित गomplication इंजेक्शन चैनल के माध्यम से peritoneal गुहा को ट्यूमर कोशिकाओं के spillage है. हम 50 पशुओं में केवल एक intraperitoneal ट्यूमर सेल प्रसार मनाया, और यह हमारे पहले प्रयास में से एक में हुई. हम भी बड़े एक ट्यूमर सेल निलंबन मात्रा के इंजेक्शन के इस गुण. यह 50-40 μl से मात्रा को कम करने के लिए आगे नहीं intraperitoneal spillage के परिणामस्वरूप तथ्य यह है कि द्वारा समर्थित किया गया.
Murine orthotopic मूत्राशय कैंसर xenograft का यह न्यूनतम इनवेसिव टीका उतना ही अन्वेषक और पशु दोनों को लाभ, "मौजूदा अंदर का मॉडल" के लिए एक नवीन संशोधन का प्रतिनिधित्व करता है. इस मॉडल के फायदे इस तरह के एक न्यूनतम इनवेसिव फैशन में orthotopic xenograft ट्यूमर की स्थापना के लिए गुर्दे, प्रोस्टेट और यकृत जैसे अन्य अंगों को अपने अनुकूलन प्रोत्साहित करते हैं.
Disclosures
इस वीडियो लेख के लिए ओपन एक्सेस FUJIFILM Visualsonics, इंक द्वारा प्रायोजित है
Acknowledgments
लेखकों छोटे जानवर अल्ट्रासाउंड इमेजिंग मंच के उपयोग पर उसकी शिक्षा के लिए ट्यूमर सेल लाइनों और बेन डीले का वायरल पारगमन के प्रदर्शन के लिए Eliana Beraldi स्वीकार करना चाहते हैं.
इस परियोजना जर्मन फाउंडेशन सिस्टम के द्वारा समर्थित किया गया था (DFG, जावेद 2117/1-1: 1), कनाडा के कैंसर सोसायटी अनुसंधान संस्थान और वैंकूवर कोस्टल स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान से एक Mentored चिकित्सकों की वैज्ञानिक पुरस्कार. अल्ट्रासाउंड इमेजिंग मंच अभिनव के लिए कनाडा फाउंडेशन द्वारा वित्त पोषित किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chlorhexidine gluconate (2%) | Aplicare | 82-319 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) | Thermo Scientific | SH3008101 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Thermo Scientific | SH3007103 | |
| Isoflurane | Baxter Corporation | 402-069-02 | |
| Trypsin (0.25%) | Thermo Scientific | SH3004202 | |
| Syringe (1 ml) | BD Bioscience | 309659 | |
| Hypodermic needle (30 G; ¾ in) | Kendall | 830340 | |
| Angiocatheter (24 G) | BD Bioscience | 381112 | |
| Vevo 770 small animal imaging platform | VisualSonics | ||
| RMV 706 ultrasound scanhead | VisualSonics | ||
| IVIS Lumina III | Caliper Life Science |
References
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