Artículo de método

Reconstrucción de 3-Dimensional Volumen Histología y su aplicación al estudio del ratón glándulas mamarias

14.1K vistas

DOI:

10.3791/51325

26 de julio de 2014

En este artículo

Resumen

Presentamos un enfoque de registro de imágenes para la reconstrucción del volumen histológico en 3 dimensiones (3D), que facilita el estudio de los cambios de un órgano a nivel de macroestructuras formadas por células. Utilizando este enfoque, estudiamos los cambios en 3D entre las glándulas mamarias de tipo salvaje y las glándulas mamarias nulas de Igfbp7.

Resumen

Reconstrucción volumen Histología facilita el estudio de la forma 3D y el cambio de volumen de un órgano a nivel de macro-estructuras formadas por células. También se puede utilizar para investigar y validar nuevas técnicas y algoritmos en imágenes médicas volumétrica y terapias. La creación de los atlas 3D de alta resolución de los diferentes órganos 1,2,3 es otra aplicación de la reconstrucción del volumen histología. Esto proporciona un recurso para la investigación de las estructuras de tejido y la relación espacial entre diferentes características celulares. Presentamos un método de registro de imágenes para la reconstrucción del volumen histología, que utiliza un conjunto de imágenes blockface ópticos. El volumen histología reconstruida representa una forma fiable de la muestra procesada sin error de registro post-procesamiento propagado. Los hematoxilina y eosina (H & E) manchadas secciones de dos glándulas mamarias de ratón se registraron a sus imágenes blockface correspondientes utilizando puntos de los límites extraídos del edbios de la muestra en la histología y blockface imágenes. La precisión del registro se evaluó visualmente. La alineación de las macroestructuras de las glándulas mamarias también se evaluó visualmente en alta resolución.

Este estudio delinea las diferentes etapas de esta tubería de registro de imágenes, que van desde la escisión de la glándula mamaria a través de volumen histología reconstrucción 3D. Mientras que las imágenes de histología 2D revelan las diferencias estructurales entre pares de secciones, el volumen de la histología en 3D proporciona la capacidad de visualizar las diferencias en la forma y el volumen de las glándulas mamarias.

Introducción

IGFBP7 (la insulina como factor de crecimiento de la proteína de unión a 7) es un miembro de la familia de proteínas de unión de IGF-, y se ha demostrado que se unen al receptor de IGF1 4. Down-regulación de IGFBP7 se sabe que se correlaciona con mal pronóstico en cáncer de mama 5, mientras que la reintroducción de IGFBP7 en modelos de tumores de xenoinjertos inhibe en gran medida los tumores de crecimiento 6 a través de la inducción de la apoptosis y senescencia celular 7. Con el fin de estudiar los efectos de IGFPB7, un ratón-IGFBP7 nula fue creado 5 (datos no publicados). Mientras que estos ratones no desarrol....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

1. Espécimen

  1. Impuestos especiales de las glándulas mamarias quirúrgicamente de tipo salvaje CDH1 así como los ratones IGFBP7 nulo tres días publican inicio de la lactancia.
  2. Separe las glándulas en portaobjetos de vidrio para ayudar a recuperar la morfología de la glándula mamaria nativo.

2. La fijación y procesamiento de tejidos

  1. Fijar las glándulas mamarias en neutro tamponado al 4% PFA O / N a 4 ° C.
  2. Guarde las glándulas en etanol al 70% antes de la elaboración de tejidos.
  3. Transferir las glándulas para pequeños casetes de procesamiento de tejidos.
  4. Procesar los....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

Una trampa de técnicas de microscopía tradicionales es que la comprensión de un órgano a nivel microscópico se limita a un campo de visión a la vez. Incluso diapositivas "en total conformidad", que ofrecen secciones enteras de diapositivas, no proporcionan información tridimensional. Con el desarrollo de la diapositiva entera, tecnologías de análisis dinámicos, nuestra capacidad de ver una sección en su totalidad se ha incrementado, sin embargo la extrapolación de las estructuras requiere volumen histología re.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

En este estudio, hemos desarrollado un flujo de trabajo de registro de imágenes para reconstruir un volumen histología en 3D a partir de imágenes de histología en 2D de serie, que no requieren puntos de referencia internos seleccionados al azar o marcadores fiduciales implantados dentro del tejido, que puedan distorsionar el tejido. Mediante el método descrito, imágenes blockface ópticos mismos se utilizan como imágenes de referencia antes de seccionar. Utilizamos orificios externos perforados en el bloque de parafina p.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar

Agradecimientos

Los autores desean agradecer al Laboratorio de Investigación de Imágenes de Biomarcadores (BIRL) del Instituto de Investigación Sunnybrook por sus servicios de histología. El apoyo para este trabajo fue proporcionado por la Fundación Terry Fox, la Fundación Canadiense de Cáncer de Mama-Prairie-NWT, así como una subvención del CIHR, #MOP-97996.

....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
16% PFAVWR International1571016% Solución de paraformaldehído
Casetes de procesamiento de tejidos pequeñosVWR InternationalCA95029-956
Leica ASP300 procesador de tejidos automatizadoLeica14047643515
100% etanolFisher Scientific
XilenoVWR International CA95057-822
Parafina Thermo Fisher39501006Paraplast medio de inclusión de tejido
Leica EG 1160 centro de inclusiónLeica Leica
micrótomo rotativo LeicaFresadora Leica
Argo
Portaobjetos de microscopioVWR International CA48312-015
H& E stainVWR International
Automatic stainer
Coverslips VWR Internacional 48404-452
MEDITE RCM 7000 cubreobjetos de cristalMEDITE
Escáner de diapositivas Leica SCN400Leica
MATLABMathWorks IncMATLAB 2007bSoftware
MeVisLabMeVis Medical Solutions AGMeVisLab 2.1Software de visualización 3D
S25307B de desarrollo

Referencias

  1. Sunkin, S. M., et al. Brain Atlas: An integrated spatiotemporal port for exploring the central nervous system. Nucleic Acids Research. 41, 996-1008 (2012).
  2. Shen, E. H., Overly, C. C., Jones, A. R. The Allen Huma....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE

Solicitar permiso

Etiquetas

Reconstrucci n volum trica de histolog a 3Denfoque de registro de im genesim genes de superficie de bloque pticastinci n de hematoxilina y eosinaalineaci n mediante software personalizadoalgoritmo de descriptores de Fourierpuntos m s cercanos iterativossoftware de visualizaci n 3Dim genes m dicas volum tricas

Artículos relacionados