Para aplicaciones futuras como un parche para reparar desgarros parciales del ligamento cruzado anterior (ACL), las células derivadas de ACL humana fueron aisladas de tejido obtenido durante los procedimientos reconstructivos, expandidas in vitro y cultivados en los andamios de ingeniería tisular. A continuación, se realizó la adhesión celular y la morfología para confirmar la biocompatibilidad de la superficie del andamio.
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Artículo de método
Recuperación Quirúrgica, aislamiento y
En este artículo
Resumen
Resumen
La lesión del ligamento cruzado anterior es un problema comúnmente encontrado en los individuos activos. Incluso los desgarros parciales de este intra-articular del ligamento de la rodilla conducir a deficiencias biomecánicas que la función y la estabilidad deterioran. Las opciones actuales para el tratamiento de los desgarros del LCA parciales van desde no quirúrgico, el tratamiento conservador con múltiples opciones quirúrgicas, tales como: la modificación térmica, la reparación de un solo paquete, la reconstrucción completa, y la reconstrucción de la parte dañada del ligamento nativo. Pocos estudios, si los hay, han demostrado un método único para la gestión de ser siempre superior, y en muchos casos los pacientes seguir demostrando la inestabilidad persistente y otras comorbilidades.
El objetivo de este estudio es identificar una fuente de células para la utilización potencial en el desarrollo de un parche de ingeniería tisular que podría implementarse en la reparación de un LCA desgarrado parcialmente. Un nuevo protocolo fue desarrollado para la expansión de las células derivadas de patients sometidos a la reconstrucción del LCA. Para aislar las células, tejido HACL picada obtenida durante la reconstrucción del ACL se digirió en una solución de colagenasa. La expansión se realizó usando medio DMEM/F12 suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) y 1% de penicilina / estreptomicina (P / S). Las células entonces se almacenaron a -80 º C o en nitrógeno líquido en un medio de congelación que consiste de DMSO, de FBS y el medio de expansión. Después de la descongelación, las células HACL derivados fueron luego sembradas en un andamio de ingeniería tisular, de PLAGA (ácido láctico-co-glicólico Poli) y el control de cultivo de tejidos de poliestireno (TCPS). Después de 7 días, SEM se realizó para comparar la adhesión celular a la PLAGA contra el TCPS de control. La morfología celular se evaluó mediante tinción de inmunofluorescencia. SEM (microscopio electrónico de barrido) micrografías demostraron que las células crecieron y se adhirieron sobre ambas superficies de PLAGA y TCPS y fueron confluentes sobre las superficies enteras por día 7. La tinción de inmunofluorescencia mostró morfológica normal, no estresadoAL patrones en ambas superficies. Esta técnica es prometedor para aplicaciones en la regeneración y la reconstrucción de ACL.
Introducción
El ligamento cruzado anterior (LCA) es un ligamento intraarticular comúnmente lesionado de la rodilla. Aproximadamente 200.000 (LCA) se reportan anualmente en los Estados Unidos. Más del 75% de los pacientes que sufren una lesión del LCA opt para la cirugía reconstructiva ortopédica 1,2,3,4. La intervención quirúrgica está indicada a menudo debido a un inherentemente pobre potencial curativo 3. La reconstrucción del ACL se realiza típicamente por medio de un autoinjerto o aloinjerto de tendón. Autoinjerto y aloinjerto representan el estándar de oro para la reconstrucción, ya que cuentan con altas tasas de éxito, y la reparación con sutura primar....
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Protocolo
1. Recuperación Quirúrgica
Nota: La aprobación IRB se obtuvo para recoger el muñón ACL durante la cirugía de reconstrucción del LCA. Exención IRB fue dado como el muñón ACL utilizados han sido generalmente descartada como desecho quirúrgico. 20 pacientes se utilizaron para recoger el muñón ACL.
- Administrar anestesia general y antibióticos preoperatorios según el protocolo de la institución para el paciente.
- Aplicar el torniquete e inflar 100 mg por encima de la presión arterial sistólica.
- Situar el paciente en posición supina. Haga una incisión anterolateral horizontal con la rodilla en flexión de 30 a 45 ° ....
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Resultados
El modelo de trabajo para la recuperación quirúrgica, la digestión del tejido y aislamiento de la humana ligamento cruzado anterior (HACL) células derivadas se muestra en la Figura 1. Las células que migraron a partir de los explantes y se adhirieron a los matraces T-25. Estas células se cultivaron durante 3 días y luego se visualizaron bajo un microscopio de luz (Figura 2). Una monocapa confluente se obtuvo por día 7. La presencia de células sanas, viables indica la recuperación exitos.......
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Discusión
El objetivo principal de este estudio andamio hACL/2D era utilizar las células obtenidas en un parche para aumentar la reparación primaria del LCA se desgarra parciales. El tratamiento no quirúrgico de las rupturas del LCA parciales puede incluir un breve período de inmovilización, refuerzos, un programa de rehabilitación progresiva, y las evaluaciones de seguimiento regulares 13,16,17. Sin embargo, muchos estudios demuestran que el tratamiento conservador en los atletas se ha asociado con malos resultados y .......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer el fondo inicial y el departamento de cirugía de la beca de investigación de la Universidad del Sur de Illinois, Facultad de Medicina; y la beca de la Fundación Memorial Medical.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Placa de Petri | Fisher Scientific | 08-757-103C | |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Fisher Scientific | BP3994 | |
| Colagenasa | Gibco | 17018-029 | Tienda en 4 ° C |
| DMEM/F-12 | Cellgro | 10-092-CV | Tienda en 4 °C. Cálido en 37 ° C Baño de agua antes de usar. |
| Suero fetal bovino (FBS) | Gibco | 10082 | Tienda en -80 ° C |
| Penicilina/Estreptomicina | Lonza | 17-602E Tienda | en 4 ° |
| C Tubos de centrífuga- 15 ml | Corning | 430790 | |
| T-25 frascos | BD Falcon | 3013 | |
| Mezcla de tripsina-Versene | Lonza | 17-161E | Almacenar en 4 °C. Calentar en 37 ° C Baño de agua antes de usar. |
| DMSO | Fisher Scientific | BP231-100 | Líquido combustible. Puede causar irritación de la piel, los ojos y las vías respiratorias. |
| Viales criogénicos | Corning | 430489 | |
| PLAGA | Purac Biomaterials Purasorb | PLG8523 | Tienda en -80 ° C |
| Discos TCPS | Fisher Scientific | 12-545-82 | |
| Diclorometano | Fisher Scientific | AC36423-0010 | Posible riesgo de cáncer. Almacenar en un lugar seco y fresco. |
| Papel Bytac | Saint gobin Performance Plastics | 1420652 | |
| Frasco de centelleo | Fisher Scientific | 03-339-21G | |
| Albúmina sérica bovina (BSA) | Sigma Aldrich | A7906 | Tienda en 4 ° C |
| Tween | Fisher Scientific | BP337-500 | |
| anticuerpo anti-β-actina para ratones (1° Ab) | Tienda Sigma Aldrich | A5441 | en -20 ° Anticuerpo C |
| cabra-anti-ratón (2° Ab) | Cell Signaling | 4408 | Store en -20 ° C |
| Tinte Hoechst | Sigma Aldrich | 14530 | Tienda en -20 ° C |
| Glicerol | Fisher Scientific | BP229-1 | |
| Glutaraldehído | Fisher Scientific | BP2547-1 | Tóxico por inhalación y si se ingiere. Provoca quemaduras por todas las vías de exposición. |
| Hexametildisilazano | Fisher Scientific | AC43085-1000 | Líquido y vapor inflamables. Provoca quemaduras por todas las vías de exposición. |
| Tijeras estériles | McKesson | 25-716 | |
| Centrífuga | Eppendorf | 5804R | |
| Microscopio | óptico Olympus | CK40 | |
| Baño de agua | Thermo scientific | 2845 | |
| Vortex | Labnet | VX-200 | |
| Placas de Petri de vidrio | fisher Scientific | S31473 | |
| Acu-Punch | Acuderm Inc. | P1225 | Acu-Punch se utilizó para cortar discos de 12 mm Tampón de |
| cacodilato | Sigma Aldrich | 97068 | Líquido inflamable, cancerígeno e irritante. |
| Tetraóxido de osmio | Sigma Aldrich | 201030 | Altamente tóxico |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 | Nocivo si se ingiere |
| Etanol | Decon Labs | 2705 | Mantener alejado del calor, chispas, llamas y otras formas de ignición. |
| Anestesia general/regional | Amphastar farmacéuticos | 1% Lidocaína, 0,25% Bupivacaína,Agentes anestésicos para inducción y mantenimiento | |
| Antibióticos | Hospira | 0409-0805-01 | Ancef 1 g i.v. |
| Trocar de artroscopia | Smith and Nephew | ||
| Cámara de artroscopia | Smith and Nephew | ||
| Pinza artroscópica y bitter Afeitadora | Arthrex | ||
| de 4,5 mm | Arthrex | ||
| Tornillos de acero inoxidable | Arthrex | ||
| por pulverización catódica | Polaron | E5400 |
Referencias
- Johnson, R. J. The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine. Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).
- Owings, M. F., Kozak, L. F. Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996. Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).
- ....
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Reimpresiones y permisos
