Evaluación no invasiva de la cardiaca Anomalías en la miocarditis autoinmune experimental por Resonancia Magnética de imágenes de microscopía en el ratón

Resumen

Este estudio demuestra el establecimiento exitoso de la imagen de microscopía de resonancia magnética como una herramienta no invasiva para evaluar las anomalías cardíacas en ratones afectados con miocarditis autoinmune. Los datos indican que la técnica se puede utilizar para controlar la progresión de la enfermedad en animales vivos.

Resumen

La miocarditis es una inflamación del miocardio, pero sólo ~ 10% de los afectados muestran manifestaciones clínicas de la enfermedad. Para estudiar los eventos inmunes de lesiones de miocardio, diversos modelos de ratón de la miocarditis se han utilizado ampliamente. Este estudio implicó la miocarditis autoinmune experimental (EAM) inducida con miosina cardíaca de la cadena pesada (MyHC)-α 334-352 en ratones A / J; los animales afectados desarrollan miocarditis linfocítica pero sin signos clínicos aparentes. En este modelo, la utilidad de la microscopía de resonancia magnética (MRM) como una modalidad no invasiva para determinar los cardíacas cambios estructurales y funcionales en los animales inmunizados con MyHC-α 334-352 se muestra. EAM y ratones sanos fueron imágenes utilizando un 9.4 T (400 MHz) 89 mm escáner orificio central vertical equipado con una sonda de imagen radiofrecuencia 4 cm milpiés y 100 g cm gradientes ejes / triples. Imágenes cardíacas fueron compradas a los animales anestesiados utilizando una secuencia de pulsos de cine basado gradiente-eco, y el ánimaLS fueron controlados por la respiración y la oximetría de pulso. El análisis reveló un aumento en el espesor de la pared ventricular en ratones EAM, con la correspondiente disminución en el diámetro interior de los ventrículos, cuando se compara con los ratones sanos. Los datos sugieren que los cambios morfológicos y funcionales en los corazones inflamados pueden ser de forma no invasiva monitoreado por MRM en animales vivos. En conclusión, MRM ofrece una ventaja de la evaluación de la progresión y regresión de las lesiones del miocardio en enfermedades causadas por agentes infecciosos, así como la respuesta a las terapias.

Introducción

La insuficiencia cardíaca es la principal causa de las muertes, y miocarditis es una causa predominante de la insuficiencia cardíaca en los jóvenes adolescentes ^1. La mayoría de los pacientes afectos de miocarditis permanecen asintomáticos y la enfermedad se resuelve espontáneamente ^2. Sin embargo, el 10-20% de las personas afectadas pueden desarrollar enfermedades crónicas, lo que lleva a la miocardiopatía dilatada (DCM) ^3. Se han desarrollado diversos modelos animales para estudiar la patogénesis inmune de la miocarditis. La enfermedad puede ser inducida en-miocarditis susceptibles de A / J y ratones Balb / c mediante la inmunizació....

Protocolo

ÉTICA DE MOTIVOS:

Todos los procedimientos con animales se realizaron de conformidad con las directrices para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y aprobados por la Universidad de Nebraska-Lincoln, Lincoln, NE.

1. La inducción de miocarditis autoinmune experimental

1. Preparar la solución de péptido disolviendo MyHC-α 334-352 en 1x solución salina tamponada con fosfato a una concentración final de 2 ml mg/1.5.
2. Preparar la toxina de pertussis (PT) mediante la adición de 1 ml de 1x PBS estéril a un vial que contiene 50 g de PT se liofilizó para obtener una concentración....

Resultados

En este informe, se muestra la utilidad de la técnica de MRM como una modalidad no invasiva para determinar los cambios estructurales y funcionales en el corazón de los animales afectados con EAM. La miocarditis se indujo en ratones A / J mediante la inmunización de los animales con MyHC-α 334-352 en CFA ^7, y los animales se sometieron a experimentos de GRM en el día 21 después de la inmunización. La proyección de imagen de MRM se realizó en animales vivos bajo anestesia con isoflurano al 9,4 T (400 MHz para .......

Discusión

Este estudio describe el procedimiento de MRM y su utilidad como una herramienta no invasiva para determinar anomalías cardíacas en ratones afectados con miocarditis autoinmune. Dado que las características histológicas de EAM se asemejan a la miocarditis postinfeccioso de los seres humanos, los modelos de ratón se emplean comúnmente para delinear los mecanismos inmunes de las lesiones del miocardio ^23-25. Sin embargo, los animales afectados con miocarditis parecen clínicamente normales, y el diagnóstico se h.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Myhc-a 334-352 (DSAFDVLSFTAEEKAGVYK)	Neopéptido, Cambridge, MA		Tienda en 4 ° C
CFA	Sigma Aldrich, St Louis, MO	5881	Tienda en 4 ° C
MTB H37Rv extracto	Difco Laboratories, Detroit, MI	231141	Store en 4 ° C
PT	Lista de Laboratorios Biológicos, Campbell, CA	181	Tienda en 4 ° C
1x PBS	Corning, Manassas, VA	21-040-CV	Tienda en 4 ° C
Isoflurano	Piramal Healthcare, Mumbai, India	NDC66794-013-25
Ratones hembra A/J	Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME	646
Luer-lok estéril 1 ml jeringa	BD, Franklin Lakes, NJ	309628
Luer-lok estéril 3 ml jeringa	BD, Franklin Lakes, NJ	309657
Aguja estéril, 18 G	BD, Franklin Lakes, NJ
Aguja estéril, 27 1/2 G	BD, Franklin Lakes, NJ	305109
llave de paso de 3 vías	Smiths Medical ASD, Inc. Dublín, OH	MX5311L
Rollos de venda de gasa Kerlix	Covidien, Mansfield, MA	6720
Toallitas	Kimberly-Clark Profesional, Roswell, GA	34155
Protouch Jersey	Medline Industrias, Mundelein, IL	30-1001
Tijeras y pinzas quirúrgicas estériles	Herramienta INOX Corporación
Micro horno	GE Healthcare,
Sistema de terapia de frío y calor ThermiPAQ	Theramics Corporation, Springfield, IL
Lámpara de calefacción para reptiles	Energy Savers Unlimited, Inc. Carson, CA
Cintas Transpore de	3M Target Corporation, MN
Arriba y arriba Pomada antibiótica de sulfato de polimixina B / Bacitracina / sulfato de neomicina	Target Corporation, MN
Seguridad del norte DeciDamp-2Tapones para los oídos de espuma de PVC	Seguridad del Norte Productos, Smithfield, RI
Aplicador con punta de algodón, 6' ’ tallo de madera	Jorgensen Laboratories, Inc. Loveland, CO
Cámara de inducción de anestesia	Summit Anesthesia Solutions, Ann Harbor, MI
Sistema de soporte de anestesia Summit para regular el flujo de anestesia	Summit Anesthesia Solutions, Ann Harbor, MI
Soporte para animales especialmente diseñado	Agilent Technologies, Santa Clara, CA
Bickford  Omnicon F/Aire  unidad de filtro de gas de anestesia	A.M. Bickford, Inc. Wales Center, NY
Módulo de oxímetro de pulso, sistema de monitoreo y compuerta de animales pequeños compatible con resonancia magnética	Instrumentos para animales pequeños, Inc. Stony Brook, NY
Cilindro de oxígeno	Matheson-Tri Gas, Zona Norte-Central, Lincoln, NE
Regulador de gas	Western Medica, West Lake, OH
Módulo de ruptura de señal, compatible con resonancia magnética Sistema de monitoreo y compuerta de animales pequeños	Small Animal Instruments, Inc. Stony Brook, NY
9.4 T (400 MHz) 89 mm de diámetro vertical de núcleo escáner	Agilent Technologies, Santa Clara, CA
Bobina de RF de microimagen de milpiés de 4 cm	Agilent Technologies, Santa Clara, CA
Monitor de PC SAM	Small Animal Instruments, Inc. Stony Brook, NY
Software de análisis de imágenes médicas cuantitativas	http://segment.heiberg.se;   Segmento v1.8 R1430,  Medviso, región de Oresunds, Suecia
Software Matlab	The Mathworks, Inc.  Natick, MA
Sistema operativo

305195 Computer-Unix