Los trastornos metabólicos se encuentran entre una de las enfermedades más comunes en los seres humanos. El modelo de organismo genéticamente manejable D. melanogaster se puede utilizar para identificar nuevos genes que regulan el metabolismo. Este artículo describe un método relativamente sencillo que permite el estudio de la tasa metabólica en las moscas de la medición de su producción de CO 2.
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Artículo de método
La medición de la tasa metabólica en
En este artículo
Resumen
Resumen
Trastornos metabólicos son un problema frecuente que afecta a la salud humana. Por lo tanto, la comprensión de los mecanismos que regulan el metabolismo es una tarea científica fundamental. Muchos de los genes que causan enfermedades en los seres humanos tienen un homólogo mosca, haciendo Drosophila un buen modelo para estudiar las vías de señalización implicadas en el desarrollo de diferentes trastornos. Además, la maleabilidad de Drosophila simplifica pantallas genéticos para ayudar en la identificación de nuevas dianas terapéuticas que puedan regular el metabolismo. Con el fin de realizar una pantalla de este tipo es necesario un método sencillo y rápido para identificar los cambios en el estado metabólico de las moscas. En general, la producción de dióxido de carbono es un buen indicador de los gastos de oxidación del sustrato y la energía que proporciona información sobre el estado metabólico. En este protocolo se introduce un método simple para medir el CO 2 de salida de las moscas. Esta técnica potencialmente puede ayudar en la identificación de las perturbaciones genéticos que afectan la tasa metabólica.
Introducción
El ciclo bioquímico de Krebs genera ATP a través de la oxidación de acetato derivado de los carbohidratos, las grasas y las proteínas que producen CO 2. En Drosophila, O 2 de entrada está directamente relacionada con la producción de CO 2 y refleja el nivel de metabolismo 1. Por lo tanto, la medición de CO 2 de salida ha utilizado con éxito en los estudios relacionados con el envejecimiento y el metabolismo de 2-5. Aquí nuestro laboratorio ha modificado montajes experimentales previamente diseñados, lo que permite la medición de la producción de CO 2 en un máximo de dieciocho muestr....
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Protocolo
1. Preparación de respirómetros
- Corte la punta de la pipeta 1.000 l con una hoja de afeitar para permitir la inserción de los capilares de la micropipeta 50 l, tratar de conseguir la punta de la pipeta lo más recto posible.
- Coloque un pedazo de espuma en la pipeta y presione hacia abajo en la punta de la pipeta.
- Agregue una pequeña cantidad de absorbente de CO 2 y de contenerlo por una segunda pieza de espuma.
- Aplicar el pegamento en el lugar donde se inserta la micropipeta en la punta de la pipeta.
- Deje el respirómetro durante la noche para permitir que el pegamento se seque.
Un diagrama esquemátic....
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Resultados
Con el fin de demostrar que el método es sensible que mide la producción de CO 2 de tipo salvaje (Oregon R) macho vuela a 18, 25 y 29 ° C y las moscas mutantes para Dg. Las moscas se elevaron a 25 ° C y luego se desplazan a la temperatura experimental durante 5 días antes de la medición. Como era de esperar para esta especie ectotérmico, la cantidad de CO 2 producido aumentó con la temperatura (Figura 2). Hemos en el pasado muestran que una dieta libre de azúcar r.......
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Discusión
En este protocolo, se describe un método de bajo costo y confiable para medir la producción de CO 2 en las moscas. Hemos encontrado que este experimento es fácil, rápido de realizar y genera datos reproducible que está de acuerdo con otros estudios 1, 6, 9. El protocolo descrito aquí se puede modificar fácilmente para adaptarse a presupuesto y materiales disponibles de cualquier laboratorio. La construcción de cada respirómetro individuo puede adaptarse, siempre y cuando la cámara permanece herméti.......
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Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a la Sociedad Max-Planck para la financiación de nuestra investigación.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| BlauBrand IntraMark 50 y micro; l micropipetas | VWR | 612-1413 | |
| Soda Lima | Wako CDN6847 | ||
| Eosina | Sigma | 031M4359 | Se puede utilizar cualquier tinte que pueda crear una coloración visible del líquido Cámara de |
| revelado de cromatografía en capa fina (TLC) | VWR | 21432-761 | Cualquier cámara de vidrio transparente que se pueda cerrar con la tapa |
| Anestesiante, Lull-A-Fly Kit | Flinn | FB1438 | |
| Power Gel Glue | Pritt | ||
| 1 ml puntas de pipeta | Cualquiera | ||
| Espuma | cualquier | ||
| plaesticina masilla | cualquier | ||
| bisturí | cualquier | ||
Referencias
- Van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. Testing the "rate of living" model: further evidence that longevity and metabolic rate are not inversely correlated in Drosophila melanogaster. J Appl Physiol. 97, 1915-1922 (2004).
- Ross, R. E.
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Reimpresiones y permisos
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