Vejiga contractilidad del músculo liso de Gaza como un método para evaluar tracto urinario inferior Farmacología

Resumen

Este manuscrito presenta una simple, pero potente, método in vitro para evaluar la contractilidad del músculo liso en respuesta a agentes farmacológicos o la estimulación nerviosa. Las principales aplicaciones son la detección de drogas y la comprensión fisiología del tejido, la farmacología y la patología.

Resumen

Se describe un método in vitro para medir la contractilidad del músculo liso de la vejiga, y su uso para la investigación de las propiedades fisiológicas y farmacológicas de músculo liso, así como los cambios inducidos por la patología. Este método proporciona información crítica para la comprensión de la función de la vejiga, mientras que la superación de las principales dificultades metodológicas encontradas en los experimentos in vivo, tales como manipulaciones quirúrgicas y farmacológicas que afectan la estabilidad y la supervivencia de las preparaciones, el uso de tejido humano, y / o el uso de productos químicos caros. También proporciona una manera de investigar las propiedades de cada componente de la vejiga (es decir, músculo liso, la mucosa, los nervios) en condiciones saludables y patológicos.

La vejiga urinaria se retira de un animal anestesiado, se colocó en solución de Krebs y cortar en tiras. Las tiras se colocan en una cámara llena con solución caliente de Krebs. Un extremo está unido a un tensio isométrican transductor para medir la fuerza de contracción, el otro extremo está unido a una varilla fija. El tejido se estimuló mediante la adición de compuestos directamente al baño o electrodos de estimulación de campo eléctrico que activan los nervios, similar a la activación contracciones de la vejiga in vivo. Se demuestra el uso de este método para evaluar la contractilidad del músculo liso espontánea durante el desarrollo y después de una lesión de la médula espinal experimental, la naturaleza de la neurotransmisión (transmisores y receptores implicados), factores implicados en la modulación de la actividad del músculo liso, el papel de los componentes individuales de la vejiga, y las especies y las diferencias de órganos en respuesta a los agentes farmacológicos. Además, podría ser utilizado para la investigación de las vías intracelulares implicadas en la contracción y / o la relajación del músculo liso, relaciones estructura-actividad de la droga y la evaluación de la liberación del transmisor.

El método de la contractilidad del músculo liso in vitro se ha utilizado ampliamente for más de 50 años, y ha proporcionado datos que han contribuido significativamente a nuestra comprensión de la función de la vejiga, así como para el desarrollo farmacéutico de los compuestos que se utilizan actualmente para el manejo clínico de la vejiga.

Introducción

El músculo liso de la vejiga se relaja para permitir el almacenamiento de la orina, y contratos para provocar la eliminación de orina. Relajación es mediado por las propiedades intrínsecas del músculo liso y por la liberación tónica de norepinefrina (NE) de los nervios simpáticos, que activa los receptores adrenérgicos beta (β ₃ AR en humanos) en el detrusor. La micción se logra mediante la inhibición de la entrada simpática y la activación de los nervios parasimpáticos que la liberación de ACh / ATP se contraiga el músculo liso de la vejiga ^1. Numerosos estados patológicos, incluyendo el cerebro y / o lesión de la médu....

Protocolo

Todos los procedimientos descritos aquí son aprobados por el comité de IACUC en la Universidad de Pittsburgh.

1. Soluciones

1. Preparar la solución de Krebs de acuerdo a la receta. Composición en mM: NaCl 118, KCl 4,7, _CaCl2 1,9, _MgSO4 1,2, _NaHCO3 24.9, KH ₂ PO ₄ 1.2, dextrosa 11.7.
2. Airear Krebs con un 95% de O _2, 5% de CO ₂ y colocarlo en un baño de 37 º C el agua que se utilizará durante todo el experimento. Coloque de lado ~ 200 ml de solución de Krebs aireado a temperatura ambiente que se utilizarán para la disección de tejidos.
3. Me....

Resultados

Actividad Myogenic espontánea

Actividad miogénica espontánea es una característica importante del músculo liso que sufre cambios con el desarrollo postnatal ^6-9 y patología (por ejemplo, SCI, BOO) ^3-5. Como se cree que esta actividad para contribuir a los síntomas de la vejiga hiperactiva (OAB) ^2, una evaluación de los receptores, vías intracelulares y agentes farmacológicos que modulan ella, es de gran interés para el desarrollo de .......

Discusión

En este trabajo se describe un método simple en la contractilidad del músculo liso in vitro que se puede utilizar para hacer frente a una serie de importantes cuestiones científicas relacionadas con la fisiología y la patología de la vejiga, así como ayudar al descubrimiento de nuevos fármacos para el tratamiento de disfunciones de la vejiga. Hemos ilustrado el uso de este método para la evaluación de las propiedades de desarrollo, patológicas y farmacológicas de la contractilidad del músculo liso de l.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Equipment
Sistema de baño de tejido con depósito	Radnoti, LLC	159920	baños de tejido aislados
Bomba recirculadora de agua caliente	Kent Scientific Corporation	TPZ-749	para mantener los baños de tejidos a 37 ° C
Sistema de
	DataQ Instruments	DI-710-UH	Para ver, registrar y analizar datos
Transbridge Transductor Amplifier	World Precision Instruments	SYS-TBM4M	Amplificador de transductor
Estimulador de césped	Grass Technologies	Modelo S88	Estimulador
de anestesia	Kent Corporación Científica	ACV-1205S	Para anestesiar al animal
Caja de anestesia	Harvard Apparatus 500116		Para anestesiar al animal
Máscaras de anestesia	Kent Scientific Corporation	AC-09508	Para anestesiar al animal
Materiales e Instrumentos Quirúrgicos
Sylgard	Dow Corning Corp	184 SIL ELAST KIT	Para alfiler, diseccionar y cortar tejido
Placa de Petri	Corning	3160-152	Para diseccionar/cortar tejido
Alfileres de insectos	ENTOMORAVIA Austerlitz Alfileres de insectos	tamaño 5	Para sujetar tejido
Almohadilla de banco	VWR International	56617-014	Almohadillas de banco absorbentes
Kit quirúrgico para ratas Kent	Scientific Corporation	INSRATKIT	Para extraer y diseccionar tejido
2 Pinzas Dumont #3 Kent	Scientific Corporation	INS500064	Para extraer y diseccionar tejido
Pinzas de tejido	Kent Scientific Corporation	INS500092	Para extraer y diseccionar tejido
Bisturí	Kent Scientific Corporation	INS500236	Para extraer y diseccionar tejido
Hoja de bisturí Kent	Scientific Corporation	INS500239	Para extraer y diseccionar tejido
Professional Clipper	Braintree Scientific, Inc.	CLP-223  45	Para quitar el pelo
Hilo de sutura	Fine Science Tools	18020-50	Tejido de amarre
Clips de tejido	Radnoti, LLC	158802	Fije el tejido a la varilla/transductor
1 g de peso	Mettler Toledo	11119525	Para la calibración de transductores
Chemicals
Krebs Solución: Cloruro de sodio Cloruro de potasio Fosfato de potasio monobásico Sulfato de magnesio Dextrosa Bicarbonato de sodio Cloruro de calcio Cloruro de	magnesio  Sigma Fisher Fisher Fisher Fisher Sigma EMD Baker	S7653 P. 217-500 P285-3 M65-500 D16-500 S5761 CX0130-2 2444	Para preparar la solución de Krebs
Isoflurano	Henry Schein	029405	A anestesiar al animal
Tanque de oxígeno	Matheson Tri Gas	ox251	Para usar con el sistema de anestesia
Tanque de carbógeno (95% de oxígeno; 5% de dióxido de carbono)	Matheson Tri Gas	Moxn00hn36D	Para airear las soluciones Krebs

adquisición de datos por computadora Sistema