La isquemia reperfusión renal: un modelo de ratón de la lesión y regeneración

Resumen

El modelo de ratón de lesión por reperfusión por isquemia renal descrito aquí comprende una nefrectomía derecha que proporciona tejido de control y pinzamiento del pedículo renal izquierdo para inducir isquemia que resulta en una lesión renal aguda. Este modelo utiliza un enfoque de laparotomía de línea media en el que todos los pasos se realizan a través de una incisión.

Resumen

Renal lesión por isquemia de reperfusión (IRI) es una causa frecuente de lesión renal aguda (LRA) en pacientes y oclusión del flujo sanguíneo renal es inevitable durante el trasplante renal. Los modelos experimentales que precisa y reproducible recapitulan IRI renal son cruciales en la disección de la fisiopatología de la lesión renal aguda y el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos. Se presenta aquí un modelo de ratón de IRI renal que resulta en reproducible AKI. Esto se consigue mediante un enfoque de la laparotomía de la línea media para la cirugía con una incisión que permite tanto una nefrectomía derecha que proporciona tejido de control y de sujeción del pedículo renal izquierda para inducir isquemia del riñón izquierdo. Por un control cuidadoso de la posición de sujeción y la temperatura corporal durante el período de isquemia este modelo alcanza una lesión funcional y estructural reproducible. Ratones sacrificados 24 horas después de la cirugía demostrar la pérdida de la función renal con la elevación del nivel de creatinina en suero o plasma, así como estructurasdaño renal estructural con necrosis tubular aguda evidente. La función renal mejora y la lesión tisular aguda se resuelve en el transcurso de 7 días después de IRI renales tales que este modelo puede ser usado para estudiar la regeneración renal. Este modelo de IRI renal se ha utilizado para estudiar la fisiopatología molecular y celular de AKI así como el análisis de la regeneración renal posterior.

Introducción

La isquemia lesión por reperfusión (IRI) es un modo común de lesión para múltiples órganos, incluyendo el riñón, corazón y cerebro. Renal IRI puede conducir a una lesión renal aguda (LRA) en pacientes y no hay tratamiento específico disponible. AKI como resultado de IRI tiene una patogénesis complicado que implica tanto la respuesta inmune innata y adaptativa ^1. Un modelo experimental de IRI renal ofrece el potencial para diseccionar las células clave y mediadores implicados en la patogénesis de la lesión renal aguda, así como la regeneración renal posterior que se produce en los días subsecuentes. Además, los efectos de los agentes terapéuticos novedosos ....

Protocolo

NOTA:. Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con los lineamientos y regulaciones impuestas por la Ley de 1986 Animales (Procedimientos Científicos) Los procedimientos se llevaron a cabo utilizando (en autoclave) instrumentos y consumibles quirúrgicos estériles. Mientras que el modelo murino de IRI renal presenta aquí se realizó en un ratón Balb / c que puede aplicarse de forma reproducible en una variedad de cepas murinas de cualquier género típicamente entre 7 8 semanas de edad, macho - 15 semanas, siendo el óptimo edad 8 semanas. Los datos presentados en la sección de resultados representativos se obtuvo de tanto ratones Balb / c y ratones FVB. La ....

Resultados

Lesión tubular y la recuperación pueden ser evaluados por H & E o tinción PAS de las secciones de tejidos siguientes IRI renal. Túbulos situados dentro de la OSOM se clasifican como sano, lesionado, necrótico o recuperación de acuerdo con la morfología celular, la integridad y el número de núcleos (Figura 1). La lesión estructural y funcional en este modelo depende de la duración de la isquemia. Un aumento progresivo de la gravedad de la disfunción renal, evaluada por la creatinina plasmática y BUN,.......

Discusión

Renal IRI es una causa importante de lesión renal aguda con tratamiento específico disponible. El estudio experimental de IRI renal ha sido muy informativo con trabajos anteriores que demuestran el papel de los macrófagos, células dendríticas, linfocitos, células T reguladoras, así como otras células y mediadores en la inducción tanto de la lesión aguda y fase de curación ^{5,8 - 16.} Además, el IRI renal experimental se ha utilizado para evaluar el efecto de diversos agentes terapéuticos ^4,17-19.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tijeras de tejido	Fine Science Tools	14072 - 10
Pinzas Micro-Adson (dientes de rata)	Fine Science Tools	11019 - 12
S& T JFA-5bTC Pinzas - SuperGrip Angled	Fine Science Tools	00649-11
Retractor Colibri	Fine Science Tools	17000 - 04
Aplicador de micro clips	Fine Science Tools	18057-14
Micro serrafines	Fine Science Tools	18055-04
Portaagujas Olsen-Hegar	Fine Science Tools	12002 - 12
Hemoclip Plus Clips de Ligadura Weck		533837
Autoclip Sistema de Clip para Heridas, 9mm	Aparato Harvard	PY2 52-3748
Sutura trenzada negra de seda, tamaño 6-0	Aparato Harvard	723288
Calor estándar Matt
Manta Homeotérmica & Unidad de control	Harvard Apparatus
Lacri-Lube	Allergan
Vetasept Chlorhexidine	AnimalCare
Vetalar : Clorhidrato de ketamina	solución 100 mg/ml
medetomidina			1 mg/ml
Vetergesic : Clorhidrato de buprenorfina			0,3 mg/ml
Antisedán : Hidrocarida			5 mg/ml

Domitor : clorhidrato de de atipamezol