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Artículo de método

Murino Endoscopia para En Vivo Healing Multimodal Imaging de Carcinogénesis y Evaluación de la herida y la inflamación intestinal

18.8K vistas

DOI:

10.3791/51875

26 de agosto de 2014

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Pequeños técnicas de imagen permiten animales exámenes de diagnóstico de serie y las intervenciones terapéuticas en vivo. Recientemente, el alcance de las aplicaciones se ha ampliado significativamente y actualmente incluye la evaluación del desarrollo de tumores del colon, la cicatrización de heridas y el seguimiento de la inflamación. Este protocolo se ilustran estas diversas aplicaciones potenciales de la endoscopia murino.

Resumen

Los modelos de ratón se utilizan ampliamente para estudiar la patogénesis de las enfermedades humanas y para evaluar los procedimientos de diagnóstico, así como las intervenciones terapéuticas preclínica. Sin embargo, la evaluación válida de alteraciones patológicas a menudo requiere el análisis histológico, y cuando se realiza ex vivo, requiere la muerte del animal. Por lo tanto en entornos experimentales convencionales, los exámenes de seguimiento intra-individuales son raramente posible. Así, el desarrollo de la endoscopia murino en ratones vivo permite a los investigadores por primera vez tanto a visualizar directamente la mucosa gastrointestinal y también repetir el procedimiento de supervisión para las alteraciones. Existen numerosas aplicaciones para la endoscopia murino in vivo, incluyendo el estudio de la inflamación intestinal o la cicatrización de heridas, la obtención de biopsias de la mucosa en varias ocasiones, y para administrar localmente agentes de diagnóstico o terapéuticos que utilizan catéteres de inyección en miniatura. Más recientemente, la imagen molecular se ha extendido mo de diagnóstico por imágenesdalidades que permiten la detección específica de moléculas diana diferentes utilizando fotosondas específicos. En conclusión, la endoscopia murino se ha convertido en una novedosa tecnología de vanguardia para el diagnóstico experimental de imágenes in vivo y puede tener un impacto significativo en la investigación preclínica en diversos campos.

Introducción

Los modelos animales han enriquecido enormemente nuestra comprensión de numerosas patologías intestinales. El ratón de laboratorio (Mus musculus) se ha convertido en un modelo animal de primera en la investigación biomédica, debido a su abundante información genética y genómica y es fácilmente disponible en cepas transgénicas y knockout. Además de mejorar la comprensión patogénesis de la enfermedad, los modelos animales se utilizan también importante para probar los fármacos candidatos, así como las intervenciones diagnósticas o terapéuticas preclínicos. Sin embargo, a pesar de la variedad de modelos de ratones que imitan las enfermedades humanas, muchas opc....

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Protocolo

Todos los experimentos con animales fueron aprobadas por el Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) de acuerdo con la Ley de Protección Animal alemán.

1. Materiales y Configuración Experimental

  1. Cuidado de los animales
    1. Utilice femenino o ratones machos de cualquier cepa que pesa de 20 a 25 g y alojarlos según la legislación local de cuidado de animales.
    2. Alimente ratones con Chow especial para roedores y aplicar chow-alfalfa libre de por lo menos tres días antes de la fluorescencia exámenes para minimizar endoluminal autofluorescencia.
    3. Proporcionar autoclave beber agua ad libitum....

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Resultados

En la vigilancia in vivo de cicatrización de la herida intestinal
Durante la endoscopia de rutina, heridas de la mucosa fueron inducidas mecánicamente por fórceps de biopsia en miniatura con un diámetro de 3 Francés (igual a 1 mm; Figura 1A). Posteriormente, la cicatrización de heridas se monitorizó mediante exámenes endoscópicos diarias y cuantificado por medición de la zona de la herida residual utilizando software de edición de imagen, por ejemplo, Ima.......

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Discusión

Cicatrización de la herida epitelial es un proceso continuo. Exfoliación fisiológica continua de células de la superficie dentro de la mucosa gastrointestinal se produce requiere la regeneración frecuente de las células epiteliales 16. En consecuencia, con problemas de curación de heridas tiene un inmenso impacto en varias enfermedades incluyendo las úlceras gastrointestinales y fuga anastomótica 17 18. Evaluación del fondo molecular, así como potenciales candidatos a fármacos para estimular la cic.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Damos las gracias a Sonja Dufentester y Elke Weber para la asistencia técnica de expertos. Agradecemos Faekah Gohar para la corrección del manuscrito y Stefan Brückner apoyo informática médica. Este trabajo fue apoyado por una beca interdisciplinaria del Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2012_A94). D. Bettenworth fue apoyado por una beca de investigación de la Facultad de Medicina de la Westfälische Wilhelms-Universität Münster. M. Brückner fue apoyado por una posición de giro "Gerok" de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SFB1009B8). Agradecemos Heike Blum para la ilus....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Reactivos
Dieta sin alfalfaHarlan Laboritories, Madison, Estados Unidos2014
Azoximetano (AOM)Sigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemaniaA5486
Bepanthen ungüento oftálmicoBayer, Leverkusen, Alemania80469764
Sulfato de dextrano sódico (DSS)TdB Consulatancy, Uppsala, SueciaDB001
EosinaSigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemaniaE 4382
Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)Sigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemaniaE 9884
Falcon Tube 50 mlBD Biosciences, Erembodegem, Bélgica352070
Florene 100 V/VAbbott, Wiesbaden, AlemaniaB506
HematoxilinaSigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemaniaHHS32-1L
Isopentano (2-metilbutano)Sigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemaniaM32631-1L
Azul de metilenoMerck, Darmstadt, Alemania1159430025
O.C.T. Compuesto Tissue Tek                                                                 Sakura, Zoeterwonde, Países Bajos4583
Omnican F - cánulaBraun, Melsungen, Alemania9161502
Solución salina tamponada con fosfato, PBSLonza, Verviers, Bélgica4629
Cloruro de sodio 0,9%Braun, Melsungen, Alemania5/12211095/0411
Dieta estándarAltromin, Lage, Alemania1320
Tissue-Tek CryomoldSakura, Leiden, Países Bajos4566
Vitro – Clud                                                                                                                             R. Langenbrinck, Teningen, Alemania04-0002 
Equipo
AIDA ControlKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20 096020
Filtro de paso de bandaSemrock, Rochester, Estados UnidosHC 716/40
Filtro de pasode banda Semrock, Rochester, Estados UnidosHC 809/81
Pinza de biopsia, 3 Fr., 28 cmKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania61071ZJ
Dell MonitorDell, Fráncfort del Meno, AlemaniaU2412Mb
Funda de examen, 9 Fr.KarlStorz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania61029D
Funda de examen, 9 Fr.KarlStorz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania61029C
Cable de luz de fibra óptica, 3,5 mmKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania69495NL
Azul fluoresceína Sistema de filtradoKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20100032
Filtro de barrera de fluoresceínaKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20100033
Interruptor de pedalKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20010430
Telescopio HOPKINS, 1,9 mm, longitud 10 cmKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania1830231
SCB D-luz P Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20 133720
SCB tricam SL IIKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20 2230 20
Instrumentos de juego de tubos VETPUMP IIKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania69811
Tricam PDD PALKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania20221037
UniVet PortaGroppler Medizintechnik, Deggendorf, AlemaniaBKGM 0451
Vetpump 2Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemania69321620

Referencias

  1. Bettenworth, D., et al. Translational 18F-FDG PET/CT imaging to monitor lesion activity in intestinal inflammation. Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 54, 748-755 (2013).
  2. Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

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