En este artículo, demostramos un método estándar para producir una oclusión embólica de la arteria cerebral media con coágulos sanguíneos homólogos (ricos en fibrina) en ratas adultas. Este modelo imita de cerca el accidente cerebrovascular isquémico humano y es adecuado para el estudio preclínico de la terapia trombolítica para el accidente cerebrovascular isquémico.
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Artículo de método
Arteria embólico cerebral media oclusión (MCAO) para el ictus isquémico con homólogas coágulos de sangre en las ratas
En este artículo
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Resumen
Resumen
Terapia Clínicamente, trombolítico con el uso del activador del plasminógeno tisular recombinante (tPA) sigue siendo el tratamiento más eficaz para el accidente cerebrovascular isquémico agudo. Sin embargo, el uso de tPA está limitada por su estrecha ventana terapéutica y por el aumento de riesgo de transformación hemorrágica. Hay una necesidad urgente de desarrollar modelos de carrera adecuados para estudiar nuevos agentes trombolíticos y estrategias para el tratamiento del accidente cerebrovascular isquémico. En la actualidad, hay dos tipos principales de modelos de accidente cerebrovascular isquémico se han desarrollado en ratas y ratones: MCAO sutura intraluminal y embólico MCAO. Aunque los modelos MCAO a través de la técnica de sutura intraluminal han sido ampliamente utilizados en mecanismo impulsado investigación del accidente cerebrovascular, estos modelos de sutura no imitan la situación clínica y no son adecuados para estudios trombolíticos. Entre estos modelos, el modelo de MCAO embólico imita estrechamente accidente cerebrovascular isquémico humano y es adecuado para la investigación preclínica de la terapia trombolítica. Este modelo embólico fue desarrollado por primera vez en ratas por Overgaard et al. 1 en 1992 y caracterizado además por Zhang et al. en 1997 2. Aunque embólico MCAO ha ganado cada vez más atención, hay problemas técnicos que enfrentan muchos laboratorios. Para satisfacer las crecientes necesidades de investigación trombolítico, se presenta un modelo altamente reproducible de embólico MCAO en ratas, lo que puede desarrollar un volumen de infarto predecible dentro del territorio de la ACM. En resumen, un PE-50 tubo modificado se avanza suavemente desde la arteria carótida externa (ACE) en el lumen de la arteria carótida interna (ACI) hasta que la punta del catéter alcanza el origen de la MCA. A través del catéter, un solo coágulo de sangre homóloga se coloca en el origen de la MCA. Para identificar el éxito de oclusión de la ACM, el flujo sanguíneo cerebral regional se controló, se midieron los déficits neurológicos y los volúmenes de infarto. Las técnicas que se presentan en este documento deben ayudar a los investigadores a superar los problemas técnicos para el establecimiento de este modelo para la investigación de un accidente cerebrovascular. </ P>
Introducción
El accidente cerebrovascular es la tercera causa principal de muerte en los Estados Unidos, pero las opciones de tratamiento para el accidente cerebrovascular agudo permanece limitada. En la actualidad, la infusión intravenosa de activador de plasminógeno tisular recombinante (tPA) para disolver los coágulos de sangre es la terapia más eficaz para el accidente cerebrovascular isquémico agudo. Sin embargo, el uso de tPA está limitada por su estrecha ventana terapéutica y por el aumento de riesgo de hemorragia intracerebral. Por lo tanto, se necesita urgentemente un modelo de accidente cerebrovascular adecuado para la investigación trombolítico.
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Protocolo
Declaración de Ética: ratas macho adultas Sprague-Dawley (330-380 g de pesaje) se utilizaron en este protocolo. Este protocolo fue aprobado por el Cuidado de Animales y el empleo Comisión Institucional (IACUC) en la LSU Health Science Center-Shreveport y está en conformidad con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio "(octava edición, la Academia Nacional de Ciencias, 2011 ).
1 Preparación de modificación Tubo PE-50
- Mantenga un largo tubo PE-50 de 30 cm por encima de una estufa de gas con las manos, suavizar gradualmente el tubo. Estire suavemente el tubo.
- Seleccionar un punto en el tubo estirado usan....
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Resultados
Flujometría láser Doppler (LDF) se utilizó para controlar rCBF durante la inducción de la isquemia cerebral 6,7. Muchos laboratorios incluyendo nuestro laboratorio han estado utilizando rCBF para identificar animales con éxito la oclusión MCA, pero los umbrales de la línea de base variaron entre los laboratorios que están relacionados con el sitio de medición. La sonda de la LDF se coloca en 2 mm posterior y 5 mm lateral a la bregma como se ha descrito previamente 6. rCBF se monitorizó a 0, 5, 15, .......
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Discusión
En este estudio, hemos demostrado un método estándar para la realización de un modelo de accidente cerebrovascular embólico MCAO en la rata, en el que el origen de la MCA se ocluye por un coágulo rico en fibrina. La principal ventaja de este modelo es: la oclusión del tronco de MCA con un rico en fibrina del coágulo de sangre es similar al ictus tromboembólico en los seres humanos, el modelo de accidente cerebrovascular embólico es adecuada para realizar investigación preclínica de la terapia fibrinolítica, y que este m.......
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Divulgaciones
No tenemos ningún conflicto potencial de intereses que divulgar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por las subvenciones de los Institutos Nacionales de Salud HL087990 (G.L.).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| rh-tPA | Chemical | Genentech | |
| 2,3,5-cloruro de trifeniltetrazolio | Químico | Sigma | T8877 |
| Vaporizador de anestesia | Equipo | Tecnología Soma | Drager Vapor 19.1 |
| Microtaladro recargable de alta velocidad | Equipo | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Tijeras curvas | Equipo | Fine Science Tools | 14117-14 |
| Pinzas Dumont (Médico #7) | Equipo | Fine Science Tools | 11270-20 |
| Pinzas Dumont (Médico #5) | Equipo | Fine Science Tools | 11251-35 |
| Tijeras de resorte estilo | VannasEquipo | Fine Science Tools | 15000-03 |
| Cámara de recuperación veterinaria | Equipamiento | Servicios de Peco | V1200 |
| Equipo de la bomba de jeringa Genie plus | Kent | Scientific Corporation | |
| Equipo | matriz de cerebro de rata | Kent Scientific Corporation | RBMA-310C |
| Calibrador digital | Equipo | World Precision Instruments | 501601 |
| Equipo de microscopio de disección | World | Precision Instruments | PZMTIII-BS-LWD |
| Equipo de jeringa Hamilton | Hamilton | modelo 710 | |
| Unidad de control de manta homeotérmica | Equipo | Harvard Aparato | |
| cortadora eléctrica | Braintree | Scientific | CLP-9931 |
| Unidad electroquirúrgica veterinaria | Equipo | MACAN Manufacturing Company | MV-9 |
| Equipo de caudalímetro sanguíneo | Equipo Adinstruments | ||
| PowerLab 4/30 | Software | Adinstruments | |
| LabChart 7.2 | Jeringa Adinstruments | ||
| 1 ml | Consumible | Becton, Dickinson and Company | Aguja |
| 309659 23 G | Consumible | Becton, Dickinson and Company | 305143 |
| Aguja de 30 G | Consumible | Becton, Dickinson and Company | 305106 |
| Tubo de PE-50 | Consumible | Becton, Dickinson and Company | 427517 |
| Tubo de PE-10 | Consumible | Becton, Dickinson and Company | 427400 |
| 6-0 Sutura de seda | Consumible | Aparato de Harvard | |
| 723287 5-0 Sutura de seda | Consumible | Aparato de Harvard 517607 |
Referencias
- Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli. J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).
- Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. A ra....
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Reimpresiones y permisos
Erratum
Formal Correction: Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats
Posted by JoVE Editors on 11/01/2014. Citeable Link.
A correction was made to Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".
