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Artículo de método

Estimulación Optogenética del nervio auditivo

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DOI:

10.3791/52069

8 de octubre de 2014

En este artículo

Resumen

Los implantes cocleares (IC) permitir la audición por la estimulación eléctrica directa del nervio auditivo. Sin embargo, la mala frecuencia y la intensidad de la resolución limita la calidad de la audición con entidades de crédito. Aquí se describe la estimulación optogenética del nervio auditivo en ratones como estrategia alternativa para la investigación auditiva y el desarrollo de las futuras entidades de crédito.

Resumen

La estimulación eléctrica directa de las neuronas del ganglio espiral (NEG) por implantes cocleares (IC) permite la comprensión del habla abierto en la mayoría de los sujetos sordos implantados 1-6. No obstante, la codificación de sonido con IC actuales tiene mala frecuencia y la resolución de intensidad debido a la amplia difusión actual de cada contacto de electrodo activación de un gran número de NEG lo largo del eje tonotópica de la cóclea 7 9. Estimulación óptico se propone como una alternativa a la estimulación eléctrica que promete más espacialmente confinada activación de NEG y, por tanto, una mayor resolución de frecuencia de la codificación. En los últimos años, la iluminación de infrarrojos directa de la cóclea se ha utilizado para evocar respuestas en el nervio auditivo 10. Sin embargo se requiere de altas energías que la estimulación eléctrica 10,11 y la incertidumbre se mantiene en cuanto al mecanismo subyacente 12. Aquí se describe un método basado en la optogenética para estimular NEGcon la luz azul de baja intensidad, el uso de ratones transgénicos con expresión neuronal de canalrodopsina 2 (ChR2) 13 o la expresión mediada por virus de la ChR2 variante Catch 14. Utilizamos micro-diodos emisores de luz (μLEDs) y láseres de fibra acoplada para estimular NEG ChR2 expresan a través de una pequeña abertura artificial (cocleostomía) o la ventana redonda. Analizamos las respuestas por las grabaciones del cuero cabelludo de los potenciales evocados (luz optogenética de respuesta auditiva del tronco cerebral: oABR) o mediante grabaciones de microelectrodos de la vía auditiva y los comparamos con la estimulación acústica y eléctrica.

Introducción

Según la Organización Mundial de la Salud, 360 millones de personas en todo el mundo sufren de pérdida de la audición. En los sujetos sordos, la estimulación eléctrica directa de NEG por IC, permite la comprensión del habla abierta en la mayoría de ellos 1,2,4,5. A pesar de que las entidades de crédito han sido implantadas en más de 200.000 personas, siendo así la neuroprótesis más exitoso, codificación de sonido conducido por los actuales implantes cocleares es limitado. IC se basan en la estimulación eléctrica por un cierto número de electrodos donde cada uno se activa una región tonotópico del nervio auditivo evitando así el órgano sensorial disfunciona....

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Protocolo

Todos los experimentos presentados en este trabajo se llevaron a cabo con los estándares éticos definidos por la ley alemana de protección de los animales de experimentación. La junta de la Universidad de Goettingen para el bienestar animal y la oficina de bienestar animal del estado de Baja Sajonia aprobaron los experimentos.

1 Preparación de μLED-estimulador

  1. Para μLEDs, primero preparar el estimulador μLED. Utilizar LEDs azules con 200 por 200 m de superficie activa (μLED, consulte la Tabla de Materiales).
  2. Cables de soldadura a la μLED. Entonces, encapsular el μLED y las conexiones con pegamento epóxico. Deje el dis....

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Resultados

Un cocleostomía óptima es crítica y aumenta la probabilidad de un experimento exitoso. Esto significa que la ventana es regular, pequeña, y no hay ninguna lesión de las estructuras internas cocleares. Por ejemplo, sangrado indica daño de la estría vascular. Un buen ejemplo se presenta en la Figura 1B.

Utilizando ratones transgénicos ChR2, ChR2 se expresa en las NEG dentro de la cóclea (Figura 1C). Azul de luz de iluminación, ya sea por μLED .......

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Discusión

Los experimentos descritos demuestran la estimulación optogenética de las NEG, y pueden, en principio, también pueden utilizarse para estimular las células ciliadas internas y / o externas, siempre que la expresión de opsinas. Estos experimentos requieren mucha paciencia y cuidado. Como se ha mencionado antes, los pasos más críticos son una buena cocleostomía inserción / ventana redonda, así como una posición adecuada y la orientación de la fuente de luz.

Existen limitaciones con estimulació.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por el Ministerio Federal Alemán de Educación e Investigación (Bernstein Focus para Neurotechnology conceder 01GQ0810, a T. Moser, y MED-EL Alemania); la Fundación Alemana de Investigación a través del Centro de Nanotecnología Microscopía y Fisiología Molecular del Cerebro (FZT 103, T. Moser) ya través de la SFB889, a N. Strenzke y T. Moser).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
UretanoSigma AldrichU2500-100GAnestésico
Xilacina HClRXVSedante y analgésico
BuprenorfinaReckitt BenckiserAnalgésico
Dumont #5 PinzasFine Science Tools11251-10Se utiliza para sujetar tejidos duros, por ejemplo, huesos o materiales. Nunca los use para sujetar pañuelos suaves y delicados 
Dumont #5 - Pinzas finasFine Science Tools11254-20Solo para ser utilizado para sujetar tejidos blandos
Tijeras finas - SharpFine Science Tools14060-09Para abrir la piel y ayudar con la disección muscular
Lempert Rongeurs Herramientas de ciencia fina16004-16Son muy útiles para eliminar fácilmente el hueso de la bulla láser de
473 nm Changchun New IndustriesMLL-III473100 mW estado sólido 473 nm
láser Controlador láser Changchun New IndustriesDPSSL MLL 100 mWTTL operado por láser
driver 250 y micro; m fibra ópticaCualquier comercial; por ejemplo, ThorlabsM42L05
Modulador acústico-ópticoCrystal Technology, Inc.PCAOM VISControla la cantidad de luz acoplada a la fibra desde el
láser Controlador para modulador acústico-ópticoCrystal Technology, Inc.160T1-8SAR-24-0.8Controle el modulador acústico-óptico
Solo2 medidor de potencia y energía láserGentec-EOSe utiliza para medir la intensidad de la luz del LED y el láser acoplado a la fibra
Azul y micro; LEDCreeC470UT200Es necesario construir varios μ Dispositivos LED porque se dañan fácilmente o el aislamiento no es lo suficientemente bueno
Sistema TDT Tucker-Davis TechnologiesRZ6-A-P1Se puede utilizar cualquier sistema para la generación de estímulos  presentación y adquisición
de datos Sonda de silicio de 16 canales de un solo vástagoNeuronexusa1x16-5mm-100-177-CM16LP Estos son dispositivos frágiles, deben manipularse con cuidado y limpiarse después de su uso
OmnidrillWorld Precision Instruments503598Realizar craneotomías para grabaciones de circuitos integrados e implantación de tornillos de referencia
Micro Drill Steel Burrscualquier comercial; p. ej. Fine Science Tools19007-07
Tornillo óseo autorroscantecualquier comercial; p. ej. Fine Science Tools19010-10Micromanipulador
de tornillo de referenciacualquier comercial; p. ej. Luigs+NeumannInVivo Unit Junior 4 ejesPosicionamiento de la sonda de registro

Referencias

  1. Rubinstein, J. T. Paediatric cochlear implantation: prosthetic hearing and language development. Lancet. 360 (9331), 483-485 (2002).
  2. Middlebrooks, J. C., Bierer, J. A., Snyder, R. L. Cochlear implants: the view from the brain. Current opinion in neurobiology. ....

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