Evaluación de las propiedades de células madre en células de carcinoma de ovario humano utilizando multi e individuales basados ​​en células Esferas ensayos

Hui Wang; Anna Paczulla; Claudia Lengerke

doi:10.3791/52259

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Artículo de método

Evaluación de las propiedades de células madre en células de carcinoma de ovario humano utilizando multi e individuales basados en células Esferas ensayos

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DOI:

10.3791/52259

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3 de enero de 2015

Hui Wang¹^,² , Anna Paczulla¹ , Claudia Lengerke¹^,²

¹Department of Biomedicine, University Hospital Basel, ²Department of Internal Medicine II, University Hospital Tübingen

En este artículo

Resumen

Los ensayos de esferas in vitro se utilizan comúnmente para identificar células madre cancerosas. Aquí comparamos ensayos de esferas individuales con ensayos basados en múltiples células. Los ensayos más laboriosos basados en células individuales o la suplementación con metilcelulosa dan resultados más precisos, mientras que los ensayos basados en células múltiples realizados en medio líquido pueden verse muy influenciados por la densidad celular.

Resumen

Años de investigación indican que los cánceres de ovario albergan una mezcla heterogénea de células, incluyendo una subpoblación de las llamadas "células madre cancerosas" (CSCs) responsables de la iniciación, mantenimiento y recaída del tumor después de las quimioterapias convencionales. Por lo tanto, la identificación de las CSC ováricas es un objetivo importante. Un método comúnmente utilizado para evaluar el potencial de CSC in vitro es el ensayo de esferas, en el que las células se siembran en condiciones de cultivo no adherentes en un medio libre de suero suplementado con factores de crecimiento y la formación de esferas se puntúa después de unos días. Aquí, revisamos los protocolos actualmente disponibles para los ensayos de esferas de cáncer de ovario humano y realizamos un análisis lado a lado entre los ensayos basados en múltiples células de uso común y un sistema más preciso basado en la siembra de una sola célula. Nuestros resultados indican que tanto los ensayos de esferas multicelulares como los basados en células individuales se pueden utilizar para investigar la formación de esferas in vitro. Los ensayos basados en células individuales, más laboriosos y costosos, son más adecuados para la evaluación funcional de células individuales y conducen a resultados generales más precisos, mientras que los ensayos basados en células múltiples pueden verse fuertemente influenciados por la densidad de las células en placa y requieren experimentos de valoración por adelantado. La suplementación con metilcelulosa en ensayos basados en múltiples células se puede utilizar eficazmente para reducir los artefactos mecánicos.

Introducción

Cada vez hay más evidencia de que los carcinomas de ovario están formados por mezclas heterogéneas de células y albergan las llamadas "células madre cancerosas" (CSCs) responsables del inicio, mantenimiento y recaída de la enfermedad después de las terapias citotóxicas convencionales^1-3. Por lo tanto, el desarrollo de estrategias moleculares dirigidas a las CSC de ovario es un objetivo importante y promete mejorar la terapia de las pacientes con cáncer de ovario.

Un requisito previo para la comprensión de las características moleculares de las CSCs es su aislamiento fiable de las no CSCs. Sin embargo, la identificación de las CSC....