Axotomía nervio facial en ratones: un modelo para estudiar las motoneuronas respuesta a la lesión

Resumen

Presentamos un protocolo quirúrgico que detalla cómo realizar una axotomía cortada o aplastada en el nervio facial en el ratón. La axotomía del nervio facial se puede emplear para estudiar la respuesta fisiológica a la lesión nerviosa y probar técnicas terapéuticas.

Resumen

El objetivo de este protocolo quirúrgico es exponer el nervio facial, que inerva la musculatura facial, a su salida del foramen estilomastoideo y cortado o aplastarlo para inducir la lesión del nervio periférico. Ventajas de esta cirugía son su simplicidad, alta reproducibilidad, y la falta de efecto en las funciones vitales o la movilidad de la parálisis facial posterior, lo que resulta en un resultado quirúrgico relativamente leve en comparación con otros modelos de lesión del nervio. Una ventaja importante de utilizar un modelo de lesión del nervio craneal es que las motoneuronas residen en una población relativamente homogénea en el núcleo motor facial en la protuberancia, simplificando el estudio de los cuerpos celulares de las motoneuronas. Debido a la naturaleza simétrica de la inervación del nervio facial y la falta de diafonía entre los núcleos motores faciales, la operación se puede realizar de manera unilateral con el lado unaxotomized que sirve como un control interno emparejado. Una variedad de análisis se puede realizar después de la operación de asnoss la respuesta fisiológica, los detalles de los cuales están más allá del alcance de este artículo. Por ejemplo, la recuperación de la función muscular puede servir como un marcador de comportamiento para la reinervación, o las motoneuronas puede ser cuantificado para medir la supervivencia celular. Además, las neuronas motoras se pueden capturar con precisión utilizando microdisección por láser para el análisis molecular. Debido a que la axotomía del nervio facial es mínimamente invasiva y bien tolerada, puede ser utilizado en una amplia variedad de ratones modificados genéticamente. Además, este modelo de la cirugía puede ser utilizado para analizar la eficacia de los tratamientos de lesión del nervio periférico. Lesión del nervio facial proporciona un medio para investigar no sólo las motoneuronas, sino también las respuestas del microambiente central y periférico glial, el sistema inmunológico, y la musculatura de destino. El modelo de lesión del nervio facial es un modelo de lesión de nervio periférico ampliamente aceptado que sirve como una poderosa herramienta para el estudio de la lesión del nervio y la regeneración.

Introducción

Existen muchos modelos de lesión del nervio periférico, pero uno que se destaca por el estudio de las motoneuronas es el modelo de axotomía del nervio facial. El nervio facial, también conocido como nervio craneal VII, se origina en la protuberancia y inerva los músculos de la expresión facial ^1,2. En este protocolo quirúrgico, el nervio facial está expuesto en su salida del foramen estilomastoideo y ya sea corta o se tritura. La gravedad de la lesión del nervio puede clasificarse siguiendo las Sunderland ³ clasificaciones, que diferencia el daño basada en la integridad de los axones, endoneuro, perineuro y epineurio, que son capas de tejido con....

Protocolo

Todos los procedimientos ejecutados son aprobados por la Escuela de Medicina Institucional Cuidado de Animales y el empleo Comisión de la Universidad de Indiana y siguen Instituto Nacional de Salud directrices.

1. Técnica quirúrgica

1. Mantenga una técnica aséptica durante este procedimiento mediante el uso de guantes estériles, instrumentos, y un campo quirúrgico estéril de acuerdo con las directrices del NIH ^25. Esterilizar las herramientas antes de comenzar la cirugía mediante autoclave (véase la Tabla de específico Reactivos / Equipo para la lista completa). Utilice un esterilizador de perlas de vid....

Resultados

Después de que se realiza el axotomía del nervio facial, pérdida de las neuronas motoras se produce como resultado de la lesión. La supervivencia de las neuronas motoras después de la lesión depende de muchas variables, como el género, la edad del animal en el momento de la cirugía, y el punto de tiempo en el cual se realizan los recuentos de neuronas motoras, y el Moran y Graeber opinión ^{el 24} y Jinno y Yamada opinión ²² tanto resumir los datos de supervivencia de las neuronas motoras. Por lo gene.......

Discusión

El paso crítico para este protocolo es colocar el ratón correctamente antes de comenzar la cirugía. Si el ratón no está acostado de lado, la oreja no está vendada en el ángulo correcto o la incisión se realiza en un lugar incorrecto, entonces encontrar el nervio facial se vuelve mucho más difícil. Cuando se domina esta técnica, las cirugías tomarán solo unos minutos por ratón.

Se pueden usar suturas, pegamento o clips para heridas para cerrar la herida. Se prefieren los clips para heridas deb.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Microscopio estereoscópico	Leica	M60
Cinta de etiquetado	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tü Tijeras de muelle Bingen - rectas/afiladas/8,5 cm/5 mm Fine	Science Tools	15003-08	Esterilizar antes de usar
Pinzas Dumont #5/45 - puntas estándar/acodado 45&°/Dumoxel/11 cm	Fine Science Tools	11251-35	Esterilizar antes de usar
Pinzas de sutura Michel - 7,5 mm x 1,75 mm	Fine Science Tools	12040-01	Descrito como "clip de herida" en el protocolo, esterilizar antes de usar
Hagenbarth aplicador de clip de herida de acción cruzada 5 "	George Tiemann & Co	160-910	Se utiliza para aplicar pinzas para heridas, esterilizar antes de usar
Aplicador y removedor de pinzas de sutura Michel - Para pinzas de 7,5 mm	Fine Science Tools	12029-12	Se utiliza para quitar la pinza
para heridas Inyección de cloruro de sodio al 0,9%, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 oz, con dispensador	Fisher Scientific	19-027132
70% Etanol
			de perlas de vidrio

Esterilizador