Hemos desarrollado un nuevo modelo ex vivo para estudiar la acción de la hormona en el pecho humano. Se basa en microestructuras de tejido aisladas a partir de muestras de tejido de mama quirúrgicos que conservan la arquitectura del tejido, las interacciones intercelulares, y la señalización paracrina.
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Resumen
Resumen
El estudio de la acción de la hormona en el pecho humano se ha visto obstaculizada por la falta de sistemas de modelos adecuados. Tras el cultivo in vitro, las células epiteliales mamarias primarias tienden a perder la expresión del receptor de la hormona. Ampliamente receptor de la hormona líneas celulares de cáncer de mama positivo utilizados son de limitada relevancia para la situación in vivo. A continuación, describimos un modelo ex vivo para estudiar la acción de la hormona en el pecho humano. Muestras de tejido de mama humanos frescos a partir de material de descarte quirúrgica como mammoplasties reducción o mammectomies están mecánica y enzimáticamente digeridos para obtener fragmentos de tejidos que contienen conductos y los lobulillos y los múltiples tipos de células del estroma. Estas microestructuras de tejido mantenidas en medio basal sin factores de crecimiento conservan sus contactos intercelulares, la arquitectura de los tejidos, y siguen siendo sensible a hormonas durante varios días. Se procesan fácilmente para ARN y la extracción de proteínas, el análisis histológico o almacenadas en medio de congelación. Fluorescenciaclasificación de células activadas (FACS) puede usarse para enriquecer poblaciones de células específicas. Este protocolo proporciona un enfoque sencillo, estándar para estudios traslacionales con, variados especímenes humanos altamente complejos.
Introducción
Información sobre el paisaje mutacional en el cáncer de mama está aumentando a ritmo rápido. Se ha prestado menos atención a los factores sistémicos que influyen en el desarrollo del cáncer de mama. La exposición a las hormonas reproductivas tiene un impacto importante en la progresión de la enfermedad 1-3. Sin embargo, los mecanismos por los cuales las hormonas reproductivas inciden en el pecho humano, son poco conocidos. Trabajar con modelos de ratones genéticamente modificados ha revelado que implican células de señalización intrínseca y paracrina través de varios efectores 4.
El conocimiento limitado acerca de la....
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Protocolo
Consideraciones generales: Antes de tiempo, establecer un protocolo de ética, preparar cuestionarios para los pacientes, y ver a la capacitación del personal clínico. Antes de utilizar el material de cirugía mamoplastia de reducción, adquirir las autorizaciones, y asegurar el consentimiento del paciente. El tejido puede ser contagiosa y debe ser manejada en consecuencia. Este protocolo fue aprobado por el comité ético de ISREC - Instituto Suizo de Investigación Experimental del Cáncer.
1. Recuperación de tejidos, producción y Bio-banking
Para garantizar la calidad de la muestra óptima para bio-banking, una serie....
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Resultados
Para estudiar el papel de los estrógenos y la progesterona y para comprender mejor sus funciones moleculares en el pecho humano, recogemos frescas muestras de tejido de mama humanos de los pacientes sometidos a reducción mammoplasties (Figura 1) después de obtener su consentimiento informado. También obtenemos la historia médica y reproductiva de los pacientes, así como una muestra de sangre para determinar los niveles séricos de progesterona en el momento de la cirugía. El tejido de reducción mammoplas.......
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Discusión
El cultivo ex vivo descrito aquí proporciona microestructuras de tejido de mama que contienen conductos y lóbulos intactos, junto con otros tipos de células que se encuentran normalmente en el pecho femenino humano. En el procesamiento del tejido de mama humano generalmente obtenido a partir de mammoplasties de reducción, la eliminación de tejido adiposo, la digestión mecánica y enzimática de la matriz estromal, y la lisis de las células rojas de la sangre enriquece para los fragmentos conducto de leche y unida.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores agradecen a M. Ficha del Hospital Universitario de Lausana para proporcionar la fotografía mamoplastia, M. Wirth y A. Ayyanan del Instituto Suizo de Investigación Experimental del Cáncer, Centro Nacional de Competencia en Investigación de Oncología Molecular, Facultad de Ciencias de la Vida, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausana para la asistencia técnica y R. Clarke, de la Universidad de Manchester para comentarios críticos. La investigación que lleva a estos resultados ha recibido el apoyo de SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531.817, y la Iniciativa sobre Medicamentos Innovadores empresa común en virtud del acuerdo de subvención no. 115.188, los recursos ....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Centrífuga de microlitros | Heraeus Biofuge Fresco | 75005521 | |
| centrífuga 5810R | Eppendorf | 5810 000.327 | |
| Cryobox | Nalgene | 5100-0001 | |
| Congelador de tasa controlada EF600 Grant | Asymptote | EF600 | |
| Incubadora de CO2 | Hera Cell Heraeus | 51022391 de | |
| rodillos SRT9D | Sturt | SRT9D | |
| Histology Cassettes | Medizintechnik | 81-0021-00 | |
| Cell Strainer | Falcon | 352340 | |
| Strile Surgical Blade | Aesculap | BB536 | |
| Bisturí | Aesculap | BB084R | |
| Pinzas | Aesculap | BD047R | |
| Tijeras | Aesculap | BC374R | |
| Molde base de parafina | SAKURA | 4166 | |
| Temperatura óptima de corte (OCT) Cryomatrix | Thermoscientific | 6769006 | |
| Penicilina/Estreptomicina | Life Technologies | 15070-063 | |
| Antibiótico/Antimicótico | Life Technologies | 15240-062 | |
| DMEM F/12 | Life Technologies | 11039-021 | Precalentamiento (37 ° C) |
| Colagenasa | Roche | 11 088 793 001 | Prewarm (37 ° C) |
| Suero fetal bovino | Life Technologies | 10270 | Puede ser reemplazado con suero de ternera fetal |
| Tampón de lisis sanguínea | de células Sigma | R7757 | |
| Dimetilsulfóxido (DMSO) | Sigma | D2650 | |
| Tripsina-EDTA | Life Technologies | 15400-054 | |
| Agarosa | Invitrogen | 16500-500 | |
| Formaldehído | Sigma | F1635 | |
| Paraformaldehído | Roth | 335 | |
| Isopentano | Sigma | M32631 | |
| Etanol | Merck | 1009831000 | |
| Viales criogénicos (5,0 ml) | VWR, International | 479-0820 | |
| Placa de cultivo de fijación ultra baja | Corning, NY 14831 | 3471 |
Referencias
- Beral, V. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study. Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).
- MacMahon, B., et al. Age at first birth and breast cancer risk. Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).
- Pike, M. C., Krail....
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Reimpresiones y permisos
Erratum
Formal Correction: Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast
Posted by JoVE Editors on 2/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast. There was an error with the author, Marie Shamsheddin's, name. The author's name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin
