La encefalopatía hipóxico-isquémica después de la asfixia perinatal se puede estudiar utilizando modelos animales. Demostramos los procedimientos necesarios para establecer un modelo de lechón de encefalopatía hipóxico-isquémica neonatal.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Un modelo del cochinillo de Neonatología encefalopatía hipóxico-isquémica
En este artículo
Resumen
Resumen
Asfixia en el nacimiento, lo que causa la encefalopatía hipóxico-isquémica (EHI), representa 0.660.000 muertes en el mundo cada año, alrededor de un cuarto de 2,9 millones de muertes neonatales en el mundo. Los modelos animales de HIE han contribuido a la comprensión de la fisiopatología en HIE, y han puesto de relieve el proceso dinámico que se producen en la lesión cerebral debido a la asfixia perinatal. Por lo tanto, los estudios en animales han sugerido una ventana de tiempo para las estrategias de tratamiento post-injuria. La hipotermia ha sido probado como un tratamiento para HIE en modelos pdiglet y posteriormente demostrado ser eficaz en ensayos clínicos. Variaciones del modelo se han aplicado en el estudio de los métodos neuroprotectores complementarios y estudios de lechones de xenón y la melatonina han llevado a fase clínica I y II de los ensayos 1,2. El modelo de HIE lechones se utiliza más para los estudios resuscitation- y hemodinámicos neonatales, así como en las investigaciones de la hipoxia cerebral a nivel celular. Sin embargo, es un desafío técnicomodelo y las variaciones en el protocolo pueden conllevar lesiones cerebrales demasiado suave o demasiado severa. En este artículo, nos demuestran los procedimientos técnicos necesarios para el establecimiento de un modelo estable de lechones EHI neonatal. En primer lugar, el lechón recién nacido (<24 horas de edad, la mediana de peso 1500 g) es anestesiado, intubado, y monitoreado en una configuración similar a la encontrada en una unidad de cuidados intensivos neonatales. Global hipoxia-isquemia es inducida mediante la reducción de la fracción inspiratoria de oxígeno para lograr la hipoxia global, isquemia a través de la hipotensión y un EEG de amplitud traza plana integrado (aEEG) indicativo de la hipoxia cerebral. La supervivencia se promueve mediante el ajuste de la oxigenación de acuerdo con la respuesta aEEG y la presión arterial. La lesión cerebral se cuantifica por histopatología y la resonancia magnética después de 72 horas.
Introducción
La asfixia perinatal es una condición aguda y con frecuencia impredecible asociado con encefalopatía hipóxico-isquémica (EHI). El objetivo general de este protocolo es demostrar un modelo de supervivencia de los lechones de perinatal encefalopatía hipóxico-isquémica. Este modelo se puede utilizar para investigar el efecto de varios grados de hipoxia-isquemia en el cerebro neonatal y de los tratamientos experimentales sobre la neuropatología, la resonancia magnética y la espectroscopia (MRI y MRS) y biomarcadores en fluidos corporales tales como sangre, líquido cefalorraquídeo y orina . El modelo también ha demostrado ser útil para investigar el sistema cardiovascular....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
El presente protocolo fue aprobado por el danés Experimentos con Animales Inspección. Todos los animales de prueba fueron anestesiados lo largo de los procedimientos. La reproducción de este protocolo debe llevarse a cabo de acuerdo con la ética nacionales y directrices de bienestar animal, y aprobado por los comités de ética locales.
1. Los animales
- Lechones Landrace danés <24 horas de edad con un peso aproximado de 1.500 - 2.000 g.
2. Anestesia y mantenimiento Fluidos
- Preparar el equipo necesario para la anestesia (Figura 1): Una máscara para la administración de ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Los efectos de la hipoxia-isquemia en el cerebro que ocurren durante el insulto inducida se documentan mediante el registro de la huella aEEG. Un representante aEEG traza se muestra en la Figura 6.
Figura 6. Representante aEEG rastro. Baja amplitud debido a la hipoxia-isquemia.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Debido a su complejidad, el modelo descrito sólo puede implementarse en instalaciones acreditadas y con experiencia en la investigación con animales. La aprobación por los comités de ética locales debe obtenerse antes de la iniciación de los experimentos, y el bienestar óptimo de los animales debe garantizarse en todo momento. A medida que el modelo se basa en la supervivencia de los animales de ensayo, es importante que un ambiente estéril se mantiene durante procedimientos invasivos para prevenir las infecciones.
.......Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a John Kristensen y Søren Braad Andersen del Departamento de Comunicación del Hospital Universitario de Aarhus, Dinamarca, por su excepcional ayuda con la filmación y edición. La técnica de animales Diana Gyldenløve y la veterinaria Birgitte Kousgaard, del Instituto de Medicina Clínica del Hospital Universitario de Aarhus, Dinamarca, por ayudar con el cuidado de los animales. Este estudio contó con el apoyo de la Fundación Lundbeck, la Fundación Laerdal para Medicina Aguda, la Fundación de Investigación de la Región de Dinamarca Central, la Fundación Augustinus, la Fundación Aase y Ejnar Danielsens, el Instituto de Medicina Clínica del Hos....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Manta pediátrica de tacto | cálido Covidien | 5030840 | |
| Adhesivo Apertrue Drapa | Barrera | 915447 | |
| Utilitaria Cortina (estéril) 75x80 cm | Barrera | 800530 | |
| Neoflon | BD - Luer | 391350 | |
| Laringoscopio | Miller | 85-0045 | |
| Tubo endotraqueal 2,5 mm | Covidien | 111-25 | |
| Tubo endotraqueal de 3,0 mm con manguito | Unomedical | MM61110030 | |
| Tubo endotraqueal de 3,5 mm con manguito | Unomedical | MM61110035 | |
| Máquina de anestesia | GE Healthcare | 1009-9002-000 | |
| EEG - electrodos/electrodo de aguja subdérmica desechable | Céfalo | ACCE120550 | |
| ECG - electrodos | medtronic | 3010107-003 | |
| Electrodos de ECG para RM | philips | ACCE120550 | |
| Muestreador de sangre arterial - aspirador | Radiómetro médico ApS | 956552 | |
| Poliuretano Catéter de vena umbilical (5 Fr/Ch) | Covidien | 8888160341 | |
| Poliuretano Catéter para venas umbilicales (3,5 Fr/ch) | Covidien | 8888160333 | |
| Juego de suturas (tamaño 3-0) | Covidien | 8886 623341 | |
| BD Aguja espinal 0.7x38mm | Agujas BD | 405254 | |
| Gas con 96% de nitrógeno / 4% de oxígeno | Air Liquide | hecho por encargo | |
| Sistema NeuroMonitor (CFM) | Natus Medical Incorporated | OBM70002 |
Referencias
- Chakkarapani, E., et al. Xenon enhances hypothermic neuroprotection in asphyxiated newborn pigs. Annals of. 68, 330-341 (2010).
- Robertson, N. J., et al. Melatonin augments hypothermic neuroprotection in a perinatal asphyxia model. <....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
