Un modelo murino de restenosis arterial: Aspectos Técnicos del femoral Lesiones alambre

Resumen

El modelo de lesión de alambre arteria femoral de ratón de la reestenosis es técnicamente difícil. En este protocolo se muestran los detalles técnicos clave esencial para llevar a cabo con éxito la lesión de alambre para inducir neointima consistente para estudios de reestenosis.

Resumen

La enfermedad cardiovascular causada por la aterosclerosis es la causa principal de muerte en el mundo desarrollado. El estrechamiento de la luz del vaso, debido al desarrollo de la placa aterosclerótica o la ruptura de placas establecidos, interrumpe el flujo normal de la sangre que conduce a diversas morbilidades, tales como infarto de miocardio y accidente cerebrovascular. En los procedimientos endovasculares clínicas como la angioplastia se realizan comúnmente para reabrir el lumen. Sin embargo, estos tratamientos dañan inevitablemente la pared del vaso, así como el endotelio vascular, la activación de una respuesta de cicatrización excesiva y el desarrollo de una placa neointimal que se extiende en el lumen del vaso que causan la reestenosis (re-estrechamiento). La restenosis sigue siendo una causa importante de fracaso de los tratamientos endovasculares para la aterosclerosis. Por lo tanto, los modelos animales preclínicos de reestenosis son de vital importancia para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos, así como de la traducción se acerca a las intervenciones vasculares. Entre varios EXPERIME murinomodelos NTAL, lesiones alambre arteria femoral es ampliamente aceptado como el más adecuado para estudios de reestenosis post-angioplastia porque se parece mucho al procedimiento de angioplastia que daña tanto el endotelio y la pared del vaso. Sin embargo, muchos investigadores tienen dificultades para la utilización de este modelo debido a su alto grado de dificultad técnica. Esto es principalmente porque un alambre de metal tiene que ser insertado en la arteria femoral, que es aproximadamente tres veces más delgado que el alambre, para generar suficiente para inducir la lesión neoíntima prominente. A continuación, describimos los detalles quirúrgicos esenciales para superar de manera efectiva las principales dificultades técnicas de este modelo. Siguiendo los procedimientos presentados, la realización de la lesión de alambre de la arteria femoral del ratón se vuelve más fácil. Una vez familiarizado, todo el procedimiento puede ser completado dentro de 20 min.

Introducción

En la era de la aplicación ampliada de tratamientos endovasculares para diversas enfermedades cardiovasculares, la reestenosis después de la angioplastia es uno de los principales problemas para los pacientes que se someten a dichos tratamientos. El daño al endotelio vascular en el momento de la angioplastia, en consonancia con el fondo aterosclerótico, induce una proliferación excesiva de células de músculo liso en la capa medial, lo que resulta en hiperplasia neointimal. ^1,2 Un modelo animal viable que recapitule la hiperplasia neointimal post-angioplastia es, por lo tanto, importante no solo para la investigación de los mecanismos de la enfermedad, sino ....

Protocolo

Declaración de Ética: NOTA: Todos los procedimientos se ajustan a la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (National Academies Press, 8ª edición, 2011), y los protocolos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad de Wisconsin. Todas las cirugías se realizaron bajo anestesia con isoflurano (a través de la inhalación, caudal de 2 ml / min), y se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento. Los animales fueron sacrificados en una cámara llena gradualmente con CO _2.

1. La inducción de la anestesia general y la incisión de la piel

1. Utilice macho C57BL....

Resultados

Cuatro semanas después de la cirugía, la cosecha de la arteria femoral alambre heridos y hacen muestra de bloque una parafina para analizar la formación de la neoíntima. Inducir la anestesia general como se describió anteriormente. Abra el pecho inmediatamente e inserte una mariposa aguja de calibre 20 al ventrículo izquierdo. Conecte la línea de una botella de infusión. Realizar fijación por perfusión a través de infusión por goteo de PBS seguido de paraformaldehído al 4% (por lo general 10 a 20 ml, cada uno)........

Discusión

El procedimiento lesión alambre es aplicable a todas las cepas de ratones, siempre y cuando sus estructuras anatómicas son similares. ⁴ En este trabajo, hemos utilizado macho C57BL / 6 ratones con una edad de 12 a 16 semanas. Como hemos aprendido de nuestros estudios preliminares, las arterias femorales de ratones más jóvenes de 10 semanas son a menudo tan pequeña que la inserción del alambre es todo un reto. Por otro lado, la inserción del alambre en ratones de más de 16 semanas es técnicamente más fácil, pe.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Guía de alambre de núcleo fijo	Cook	G02426	Diámetro 0.015 pulgadas,
pinzas de dilatación	Roboz	RS-4927	Puntas curvas y romas
Dumont Tweesers #5	World Precision Instruments	14095	Puntas rectas y afiladas
Pinzas de canulación de recipientes Dumont	Precision Instruments	503373
Tijeras McPherson-Vannas	World Precision Instruments	501234
Pinzas para mosquitos	World Precision Instruments	501291
Ethilon Sutura de Nylon 9-0	Ethicon	7717G	9-0, Monofilamento de Nylon
Negro Micro AROSuture, Estéril 11-0, 70 micrómetros, MET Point	AROSurgical	VT4A00N07	11-0, Monofilamento de Nylon
Negro 3M Precise Multi-Shot DS Piel Desechable Grapadora	3M	DS-25

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