Establecimiento de un modelo de xenoinjerto Humano mieloma múltiple en el pollo para estudiar el crecimiento del tumor, la invasión y la angiogénesis

Agnieszka Martowicz; Johann Kern; Eberhard Gunsilius; Gerold Untergasser

doi:10.3791/52665

Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Establecimiento de un modelo de xenoinjerto Humano mieloma múltiple en el pollo para estudiar el crecimiento del tumor, la invasión y la angiogénesis

12.7K vistas

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1 de mayo de 2015

Agnieszka Martowicz^*¹^,⁴ , Johann Kern^*¹^,² , Eberhard Gunsilius¹ , Gerold Untergasser¹^,³

¹Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, ²Oncotyrol GmbH, ³Tyrolean Cancer Research Institute, ⁴Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Las células humanas de mieloma múltiple (MM) requieren el microambiente de apoyo de células mesenquimales y componentes de la matriz extracelular para la supervivencia y proliferación. Hemos establecido un modelo in vivo de embriones en pollo con células de mieloma y mesenquimales humanas injertadas para estudiar los efectos de fármacos contra el cáncer en el crecimiento tumoral, la invasión y la angiogénesis.

Resumen

El mieloma múltiple (MM), una enfermedad de las células plasmáticas malignas, sigue siendo incurable y nuevos fármacos son necesarios para mejorar el pronóstico de los pacientes. Debido a la falta del microambiente óseo y factores de crecimiento de auto / paracrina células MM humanos son difíciles de cultivar. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de establecer adecuado in vitro y en sistemas de cultivo in vivo para estudiar la acción de nuevas terapias en las células MM humanos. Aquí se presenta un modelo para crecer células de mieloma múltiple humanos en un entorno 3D complejo in vitro e in vivo. Líneas celulares de MM OPM-2 y RPMI-8226 fueron transfectadas para expresar el transgén GFP y se cultivaron en la presencia de células mesenquimales humanos y de colágeno de tipo I matriz como esferoides tridimensionales. Además, esferoides fueron injertados en la membrana corioalantoidea (CAM) de embriones de pollo y el crecimiento tumoral se controló por microscopía de fluorescencia estéreo. Ambos modelos permiten el estudio de la novela dru terapéuticags en un entorno 3D complejo y la cuantificación de la masa celular del tumor después de la homogeneización de los injertos en un GFP-ELISA-transgén específico. Por otra parte, las respuestas angiogénicas de la acogida y la invasión de células tumorales en el tejido huésped subyacente pueden ser monitoreados diariamente por un microscopio estéreo y se analizaron por tinción inmunohistoquímica frente a células tumorales humanas (Ki-67, CD138, vimentina) o células anfitrionas murales que cubren los vasos sanguíneos (desmina / ASMA).

En conclusión, el sistema onplant permite estudiar el crecimiento de células MM y la angiogénesis en un entorno 3D complejo y permite la detección de nuevos compuestos terapéuticos dirigidos a la supervivencia y proliferación de las células MM.

Introducción

El mieloma múltiple (MM) se caracteriza por la proliferación de células plasmáticas malignas en la médula ósea, lesiones óseas e inmunodeficiencia ¹. Aunque existen nuevas opciones de tratamiento, como los inhibidores del proteasoma (bortezomib) y los fármacos inmunomoduladores (pomalidomida y lenalidomida), el MM sigue siendo una neoplasia maligna incurable con un pronóstico sombrío ². El mal pronóstico podría explicarse por la extraordinaria heterogeneidad de los clones de células MM que contribuye a respuestas variables a la terapia, en particular bajo tratamiento a largo plazo y presión de selección de clones MM ³.