Cuantificación de Protección neurovascular Siguiendo repetitivo hipóxico Precondicionamiento y transitoria cerebral media oclusión de la arteria en ratones

Katherine Poinsatte; Uma Maheswari Selvaraj; Sterling B. Ortega; Erik J. Plautz; Xiangmei Kong; Jeffrey M. Gidday; Ann M. Stowe

doi:10.3791/52675

Artículo de método

Cuantificación de Protección neurovascular Siguiendo repetitivo hipóxico Precondicionamiento y transitoria cerebral media oclusión de la arteria en ratones

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DOI:

10.3791/52675

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4 de mayo de 2015

Katherine Poinsatte¹ , Uma Maheswari Selvaraj¹ , Sterling B. Ortega¹ , Erik J. Plautz¹ , Xiangmei Kong¹ , Jeffrey M. Gidday² , Ann M. Stowe¹

¹Department of Neurology and Neurotherapeutics, University of Texas Southwestern Medical Center, ²Department of Neurological Surgery, Washington University School of Medicine

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe el precondicionamiento hipóxico repetitivo, o exposiciones breves a la hipoxia sistémica que reducen los volúmenes de infarto y la interrupción de la barrera hematoencefálica después de una oclusión transitoria de la arteria cerebral media en ratones. También detalla la cuantificación dual del volumen del infarto y la alteración de la barrera hematoencefálica después de un accidente cerebrovascular para evaluar la eficacia de la protección neurovascular.

Resumen

Modelos animales experimentales de ictus son herramientas muy valiosas para la comprensión de la patología de carrera y el desarrollo de estrategias de tratamiento más eficaces. Un protocolo de 2 semanas para precondicionamiento hipóxico repetitivo (RHP) induce una protección a largo plazo contra las lesiones del sistema nervioso central (SNC) en un modelo de ratón de accidente cerebrovascular isquémico focal. RHP consta de 9 exposiciones estocásticos a la hipoxia que varían tanto en duración (2 o 4 hr) y la intensidad (8% y 11% O _2). RHP reduce los volúmenes de infarto, barrera hematoencefálica (BBB) perturbación, y la respuesta inflamatoria posterior al accidente cerebrovascular durante semanas después de la última exposición a la hipoxia, lo que sugiere una inducción a largo plazo de un fenotipo SNC-protectora endógena. La metodología para la cuantificación de doble el volumen del infarto y disrupción de la BHE es eficaz en la evaluación de la protección neurovascular en ratones con RHP u otros neuroprotectores putativos. Adultos ratones macho Swiss Webster fueron acondicionados previamente por RHP o exposiciones de duración equivalente al 21% de O (es decir, aire ambiente). Una oclusión media transitoria 60 min arteria cerebral (tMCAo) fue inducida 2 semanas después de la última exposición hipóxica. Tanto la oclusión y reperfusión fueron confirmados por transcraneal flujometría Doppler láser. Veintidós horas después de la reperfusión, azul de Evans (EB) se administró por vía intravenosa a través de una inyección en la vena de la cola. 2 horas más tarde, los animales fueron sacrificados por sobredosis y secciones cerebrales isoflurano se tiñeron con cloruro de 2,3,5- trifeniltetrazolio (TTC). Los volúmenes de infarto fueron luego cuantificados. A continuación, EB se extrajo a partir del tejido durante 48 hr para determinar disrupción de la BHE después de tMCAo. En resumen, RHP es un protocolo simple que puede ser replicado, con un costo mínimo, para inducir protección neurovascular endógeno a largo plazo de una lesión derrame cerebral en ratones, con el potencial de la traducción de otros estados de enfermedad pro-inflamatorias CNS-basados y sistémicos.

Introducción

Como la principal causa de discapacidad en los adultos y la cuarta causa principal de muerte, accidente cerebrovascular es uno de los estados de enfermedad más debilitantes que enfrenta la población adulta de los Estados Unidos. ¹ Los modelos animales de accidente cerebrovascular permiten para la investigación experimental de nuevos métodos de reducción de la lesión isquémica y mejorar la recuperación después de un accidente cerebrovascular. Una vía novedosa para este tipo de investigación traslacional se preacondicionamiento. Preacondicionamiento es el uso intencional de un estímulo no perjudicial para reducir el daño de una posterior, y más grave, lesion....