Bone Medium acondicionado: Preparación y Bioensayo

Summary

Se describe aquí cómo preparar medio hueso acondicionado (BCM) y probar su actividad in vitro.

Abstract

Injertos óseos autólogos son ampliamente utilizados en la cirugía oral y maxilofacial, ortopedia y traumatología. Injertos óseos autólogos no sólo reemplazan el hueso faltante, también apoyan el complejo proceso de regeneración ósea. Este comportamiento favorable de los autoinjertos se atribuye a las tres características: osteoconductividad, osteogenicidad y osteoinductividad. Sin embargo, hay otro aspecto: Bone injertos de liberar una gran variedad de moléculas, incluyendo factores de crecimiento, que pueden dirigirse a las células mesenquimales implicadas en la regeneración ósea. Las propiedades paracrinos de injertos óseos se pueden estudiar in vitro mediante el uso de medio hueso acondicionado (BCM). Aquí presentamos un protocolo sobre cómo prepararse medio hueso acondicionado de hueso cortical cerdo nativo, y el hueso que sufrió el procesamiento térmico o desmineralización. Las células pueden ser expuestos directamente a BCM o sembradas en biomateriales, tales como membranas de colágeno, previamente remojados con BCM. Damos ejemplos para in vitro bioassays con células mesenquimales en la expresión de genes regulados TGF-β. Los protocolos presentados deben animar a revelar aún más los efectos paracrinos de injertos óseos durante la regeneración ósea y abrir un camino para la investigación traslacional en el amplio campo de la cirugía reconstructiva.

Introduction

El hueso autólogo es ampliamente utilizado para cerrar defectos que se produjeron como consecuencia de la malformación, la cirugía de resección, la cirugía reconstructiva trauma, y antes de la colocación del implante ^1,2. La comprensión de los principios biológicos de cómo injertos óseos apoyan el proceso de consolidación del injerto no sólo es clave para entender por qué los autoinjertos son considerados como el estándar de oro en la cirugía reconstructiva, también es biónico para la mejora del diseño de los sustitutos óseos ^3. Sin embargo, la consolidación del injerto es más rápido con hueso autólogo en comparación con sustitutos óseos ^4,....

Protocol

1. Preparación BCM

1. Obtener mandíbulas de cerdos de la carnicería local lo más fresco posible. Coloque las mandíbulas sobre una superficie firme y suelte un colgajo de espesor total con especial atención para no dejar ningún tejido blando o periostio unido al hueso. Trabajar en un ambiente limpio y sin la necesidad de trabajar bajo la campana de flujo.
2. Una vez que se dio a conocer un colgajo de espesor total, use un raspador de hueso para recoger los fragmentos de hueso del lado bucal. Tenga en cuenta que el raspador de hueso tiene que ser fuerte. Maneje con firmeza el raspador de hueso y con movimientos largos recogen el hueso. Desechar astillas ....

Results

Bone Medium acondicionado se preparó a partir de astillas de hueso porcino frescas. Visión general del proceso para preparar BCM y usar biomateriales en combinación con BCM se muestra en la Figura 1 y la Figura 2 respectivamente. Durante la preparación del BCM, es importante para obtener grandes astillas de hueso con movimientos largos como movimientos cortos o muy pequeñas astillas de hueso puede afectar a la calidad del BCM final. Calidad de BCM se puede controlar mediante el análisis.......

Discussion

Bone medio acondicionado refleja la actividad liberada de injertos óseos durante las primeras etapas de la regeneración ósea. El protocolo se describe aquí puede adaptarse para estudiar la respuesta de diferentes tipos de células implicadas en la regeneración ósea. Además, el protocolo se puede utilizar para preparar el medio de rellenos óseos o hueso procesado condicionado. Los métodos son fáciles de realizar y se basan en un concepto simple: los factores liberados de varios hueso nativo y procesados. La comprensión de.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mandíbulas de cerdo	Raspador de huesos de bucher
	Hu-Friedy PPBUSE2	/36
Antibióticos & Antimicotics	All life Technologies	15240-062
Membranas de colágeno (Bio-Gide)	Geistlich
Fetal Calf Serum	Invitrogen Corporation	16030074
DMEM	Invitrogen Corporation	21885-025
Kit de aislamiento de ARN de alta pureza	Roche	11828665001
Transcriptor First Kit de síntesis de ADNc Roche		4379012001
Primers	Microsynth
SYBR Verde (para Q-RT-PCR)Roche		4673484001
PBS	Roche	11666789001