Modelo de ratón de rechazo vascular inducida por aloinmune y Arteriosclerosis Trasplante

Resumen

Describimos un protocolo para el injerto de interposición aórtica en ratones. El objetivo del protocolo es proporcionar un modelo con el que estudiar los procesos patológicos y las estrategias terapéuticas relevantes para las reacciones aloinmunes en las arterias y los cambios arteriales resultantes que contribuyen al fracaso del trasplante de órganos.

Resumen

El rechazo vascular que conduce al trasplante La arteriosclerosis (AT) es la principal representación de la insuficiencia cardíaca crónica. En la AT, el sistema inmunitario del receptor causa daño de la pared arterial y disfunción de las células endoteliales y las células musculares lisas. Esto desencadena una respuesta de reparación patológica que se caracteriza por engrosamiento de la íntima y oclusión luminal. La comprensión de los mecanismos por los cuales el sistema inmunitario causa el rechazo de la vasculatura y la AT puede informar el desarrollo de nuevas formas de tratar el fracaso del injerto. En este trabajo describimos un modelo de interposición aórtica en ratón que puede utilizarse para estudiar los mecanismos patogénicos del rechazo vascular y la AT. El modelo consiste en el injerto de un segmento aórtico de un animal donante en un receptor alogénico. El rechazo del segmento arterial implica reacciones aloinmunes y da lugar a cambios arteriales que se asemejan al rechazo vascular. El enfoque técnico básico que describimos se puede utilizar con diferentes cepas de ratones e intervenciones específicas para responder a preguntas específicas relacionadas con el rechazo vascular y la AT.

Introducción

Durante los últimos 30 años, los avances en los fármacos inmunosupresores han disminuido el rechazo del injerto por rechazo agudo, pero el rechazo crónico sigue siendo un desafío principal. La principal manifestación de rechazo al trasplante cardíaco crónico es la arteriosclerosis del trasplante (TA) ^1,2. Esta condición se caracteriza por hiperplasia de la íntima y la disfunción vasomotor de las arterias de aloinjertos y se desarrolla como resultado de la focalización inmunológica de las células musculares lisas y endoteliales por el sistema inmune del destinatario. La orientación específica de la vasculatura del injerto debido al reconocimiento de complej....

Protocolo

Todos los protocolos en este estudio fueron revisados ​​y aprobados por el comité de ética del cuidado de animales de la Universidad Simon Fraser. Uso Balb / CYJ (H2 ^d) los ratones donantes y / 6 ratones (H2 ^b) receptores C57Bl para examinar las reacciones alogénicos. Los ratones se utilizan para los experimentos entre las edades de 8 a 12 semanas. Utilice los ratones, ya sea hombre o mujer. Controles singénicos consisten en segmentos aórticos de ratones C57BL / 6 donantes en ratones C57BL / 6 destinatarios.

1. donante y el receptor Preparación

Nota: Tanto el donante y el receptor son anestesiados y preparados ....

Resultados

En este modelo, la aorta abdominal de un ratón Balb / CYJ se interpone en la aorta infrarrenal de un C57BL / 6 destinatario. Esto permite una evaluación completa de aloinmunes respuestas que se dirigen a las arterias de aloinjertos. Lesión vascular inmunomediada en este modelo inicia respuestas reparadoras vasculares que culminan en el engrosamiento de la íntima, el estrechamiento luminal y el reclutamiento de células inmunes (Figuras 1 y 2). Estos criterios sirven entonces como una de .......

Discusión

Hemos descrito un protocolo para la interposición de injerto aórtico en ratones que es útil para estudiar el rechazo vascular inmunomediada y TA. Este modelo puede ser utilizado para investigar las causas de la TA, así como el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas. Se ha utilizado en el pasado para establecer un papel esencial de la inmunidad adaptativa, las respuestas de células T citotóxicas, las respuestas efectoras CD4 de células T mediada por citoquinas, y el daño del injerto mediado por anticuerpos en TA <.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
C57BL/6J (H-2b)	Laboratorios Jackson, Cepa de Bar Harbour ME	# 000664
Balb/cBYJ	Laboratorios Jackson, Cepa de Bar Harbour ME	# 001026
Inyección de clorhidrato de ketamina USP 100 mg/ml	Ketalean	DIN 00612316
Inyección de xilacina 20 mg/ml	Rompum	DIN 02169592
Ketoprofeno Inyección 100 mg/ml	Anafen	DIN 01938126
Tartrato de Butorfanol  inyección 10 mg/ml	Torbugesic	DIN 008450000
Buprenorfina inyectable 0,3 mg/ml	Reckitt Benckiser	B.N. 5241
Clorhidrato de atipamezol solución inyectable estéril	Antisedan	DIN 02237744
Heparina Sódica Inyección, USP, 1.000 unidades/ml	McKesson Distribution	DIN 02264315
Tears naturale ungüento oftálmico	Alcon	DIN 02082519
Microscopio estereoscópico	Leica	M80
0.9% Cloruro de sodio, estéril	Baxter Corporation
Timbre lactato s, estéril	Baxter Corporation
0.9% Cloruro de Sodio Inyección, estéril, 10 ml	Baxter Corporation
Almohadillas de Preparación con Alcohol	Loris
Povidona	Yodado Betadine
Gluconato de Clorohexidina 4% c/v	Germi-Stat
Poliamida Negra Monofilamento	AROSurgico Instrumentos	T4A10Q07
Sutura, sutura 10-0, 70 micras	Corporation
Sutura monofilamento azul 5-0, aguja P3	Ethicon	8698G
Jeringa de 1 ml	BD	REF 309659
10 ml Jeringa	BD	REF 309604
1cc Jeringa de insulina TB con 28 G 1/2	BD	REF 309309
25 G 7/8, aguja hipodérmica	BD	REF 305124
27 G 1/2, aguja hipodérmica	BD	REF 305109
Colibri Retractor- 1,5 cm de extensión 4 cm	Fine Science Tools	17000-04
S& T CAF-4 Pinza de aplicación con clip, sin bloqueo	Fine Science Tools	00072-14
Pinza Supergrip, S& T	Herramientas de Ciencia Fina	00632-11
Pinzas Médicas No.5	Herramientas de Ciencia Fina	11253-20
Tijeras para bebés Lexer	Herramientas de Ciencia Fina	14078-10
Pinzas Micro Adson dentadas	Herramientas de Ciencias Finas	11018-12
Microtijeras Vannas-Tubingen Herramientas de	Ciencias Finas	15003-08
Micro pinzas, b-1; 3,5 mm x 1 mm; 7 mm de longitud	Fine Science Tools	00396-01
Pinzas de Graefe, 10 cm 1x2 dientes	Fine Science Tools	11054-10
Castroviejo con cerradura y mordazas de tungsteno	Fine Science Tools	12565-14
Esterilizador de perlas de vidrio caliente	Inotech 250	IS-250 - Steri-250
Gasas no tejidas	Progene
Punta de algodón Aplicadores	Puritan
Beard Trimmer	Wahl
Almohadilla térmica	Sunbeam