Inducción y Evaluación de la isquemia-reperfusión en perfundidos Langendorff corazones de ratas

Resumen

El corazón de rata aislado es un modelo duradero para la lesión por isquemia y reperfusión. Aquí, describimos el proceso de recolección del corazón latiendo de una rata a través de la canulación aórtica in situ, la perfusión de Langendorff del corazón, la lesión simulada por isquemia-reperfusión y la tinción del infarto para confirmar la extensión de la agresión isquémica.

Resumen

Los eventos bioquímicos que rodean la lesión por isquemia-reperfusión en el entorno agudo son de gran importancia para promover nuevas opciones de tratamiento para el infarto de miocardio y las complicaciones cardíacas de la cirugía torácica. La capacidad de ciertos fármacos para precondicionar el miocardio contra la lesión por isquemia-reperfusión ha dado lugar a múltiples ensayos clínicos, con poco éxito. El modelo de corazón aislado permite la observación aguda de los efectos funcionales de la lesión por isquemia-reperfusión en tiempo real, incluyendo los efectos de diversas intervenciones farmacológicas administradas en cualquier momento antes o dentro de la ventana de lesión por isquemia-reperfusión. Dado que los períodos breves de isquemia pueden precondicionar el corazón contra la lesión isquémica, se realiza una canulación aórtica in situ para permitir la evaluación funcional del miocardio no precondicionado. Se coloca un balón lleno de solución salina en el ventrículo izquierdo para permitir la medición en tiempo real de la generación de presión. La lesión isquémica se simula mediante el cese del flujo tampón de perfusión, seguido de reperfusión. La duración de la isquemia y la reperfusión se puede modular para examinar los eventos bioquímicos en un momento dado. Aunque el modelo de corazón aislado de Langendorff no permite considerar los eventos sistémicos que afectan la isquemia y la reperfusión, es un modelo excelente para el examen de los eventos funcionales y bioquímicos agudos dentro de la ventana de la lesión por isquemia-reperfusión, así como el efecto de la intervención farmacológica en el pre y postacondicionamiento cardíaco. El objetivo de este protocolo es demostrar cómo realizar la canulación aórtica in situ y la escisión cardíaca seguidas de una lesión por isquemia/reperfusión en el modelo de Langendorff.

Introducción

La elucidación de los hechos que subyacen a la respuesta cardiaca tanto la isquemia y la reperfusión es esencial para mejorar el tratamiento del infarto de ¹ y cardíacas procedimientos quirúrgicos miocardio que requieren pinzamiento aórtico ^2. Mientras que los modelos in vivo de la lesión de reperfusión de isquemia permiten el análisis de punto final muy útiles, no son tan eficaces para el estudio de los efectos funcionales de la lesión de reperfusión de isquemia aguda en tiempo real. Además, en modelos de isquemia reperfusión in vivo generalmente producen variabilidad significativa en el tamaño del infarto, y la entre....

Protocolo

Todos los procedimientos que figuran a continuación han sido aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad de Medicina de Carolina del Sur. Los experimentos descritos aquí son experimentos agudos, no de supervivencia. Como tal, no hay uso de la pomada para los ojos y no se requiere un quirófano estéril. La eutanasia se logra por desangrado durante la recolección del corazón.

1. Preparación Experimental

1. Configure sea una presión constante o flujo constante de perfusión Langendorff Aparato ^4.
2. Preparar 4 L de Krebs Henseleit modificado Buffer (en mM: 112 NaCl, 5 KCl, 1,2 ....

Resultados

El aparato de balón del ventrículo izquierdo permite la monitorización en tiempo real de la presión desarrollada por la contratación del ventrículo izquierdo (Figura 1). Como se ha descrito previamente ^7, esta traza de presión puede ser usada para calcular muchos de los parámetros de la función ventricular. Estos cálculos pueden realizarse en la fase de línea de base, así como la fase de reperfusión, promediados sobre múltiples trazas dentro de cada grupo, y se compararon con el fin de determ.......

Discusión

El corazón aislado y perfundido de rata puede ser utilizado con éxito para estudiar el efecto de la intervención farmacológica en el precondicionamiento cardíaco en la isquemia reperfusión ^9. Sin embargo, hay algunos pasos esenciales para el procedimiento que debe ser estandarizada con el fin de asegurar resultados reproducibles. El mantenimiento de una temperatura de 37,4 ° C dentro del sistema es crítica, ya que incluso la hipotermia leve y la hipertermia pueden causar preacondicionamiento cardíaco ^10,.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Cloruro de Sodio	Sigma Aldrich	S3014
Cloruro de Potasio	Sigma Aldrich	P9541
Sulfato de Magnesio	Sigma Aldrich	203726
Fosfato de Potasio Dibásico	Sigma Aldrich	RES20765-A7
Cloruro de Calcio Dihidratado	Sigma Aldrich	C8106
Sodio Bicarbonato	Sigma Aldrich	S5761
D-glucosa	Sigma Aldrich	G8270
Ácido octanoico	Sigma Aldrich	C2875
Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio	Sigma Aldrich	T8877
Transductor de presión médica	MEMSCAP	SP844
Masterflex Bomba peristáltica	Cole Parmer	EW-07521-40
Masterflex Cabezal de bomba de carga fácil	Cole Parmer	EW-07518-10
Baño de agua circulante calentado	Lauda	M3
Consola de investigación modular	Transonic
	Transonic	ME2PXN
dispositivo de adquisición de datos	AD Instruments	PL3508
LabChart software de adquisición de datos	AD Instruments	MLU60/8

Módulo de flujo de tubería TS410 Sensor de flujo en línea Transonic T402 PowerLab