Por encargo Microdiálisis Sonda Diseño

Summary

La microdiálisis es una técnica muy utilizada en la investigación en neurociencias. Por lo tanto sondas comerciales están en gran demand.In esta obra un conjunto de sonda se explica en detalle la construcción de una sonda fiable, concéntrico a medida microdiálisis por menos de $ 10.

Abstract

La microdiálisis es una técnica muy utilizada en la investigación en neurociencias. Por lo tanto sondas comerciales tienen una gran demanda para monitorear los cambios fisiológicos, farmacológicos y patológicas en el líquido cefalorraquídeo. Por desgracia, las sondas comerciales son caros para los grupos de investigación en las instituciones públicas. En este trabajo, un conjunto de sonda se explica en detalle la construcción de una sonda fiable, concéntrico a medida microdiálisis por menos de $ 10. La sonda de microdiálisis se compone de una membrana de polisulfona con un corte molecular de 30 kDa. Sonda in vitro se comparan recuperaciones de sustancias con diferente peso molecular (en el intervalo de 100-1,600 Da) y diferentes propiedades fisicoquímicas. La sonda produce una recuperación in vitro de aproximadamente 20% para los compuestos pequeños glucosa, lactato, acetilcolina y ATP. En vitro recuperaciones para los neuropéptidos con un peso molecular entre 1.000-1.600 Da cantidad de 2-6%. Por lo tanto, mientras que la mayor w molecularocho de los neuropéptidos bajó en los valores de recuperación in vitro, la diálisis de compuestos en el rango inferior (hasta 500 Da) de pesos moleculares no tiene gran impacto en la tasa de recuperación en vitro. El presente método permite la utilización de una membrana de diálisis con otro valor de corte y material de la membrana. Por lo tanto, este conjunto de la sonda a medida tiene la ventaja de la flexibilidad suficiente para dializar sustancias en una gama amplia de peso molecular. Aquí, se introduce una sonda de microdiálisis con una longitud de intercambio de 2 mm, que es aplicable para microdiálisis en regiones del cerebro de ratón y rata. Sin embargo, las dimensiones de la sonda se pueden adaptar fácilmente para longitudes de cambio más grandes para ser utilizado en animales más grandes.

Introduction

La microdiálisis es una técnica muy utilizada en la investigación en neurociencias. Durante los últimos 50 años, la técnica de microdiálisis mínimamente invasiva ha sido mejorada continuamente para convertirse en un método bien establecido para monitorear las concentraciones locales de compuestos de bajo peso molecular en el espacio extracelular. Casi cada fluido del tejido intersticial puede ser investigado en animales con libertad de movimientos.

Gaddum introdujo la técnica de vaivén en la década de 1960. Se modificó un enfoque de Feldberg et al. En la que tubocurarina se perfundió a través de una cánula termina en el ventrícul....

Protocol

1. Preparación de PTFE-tubing

1. Acortar PTFE tubo en 2,5 cm pieza. Utilice un papel escala para estimar las dimensiones físicas. (Véase la figura 3a)
2. Cortar un final en un ángulo para facilitar la conexión de la tubería de salida. (Véase la figura 3a)
3. Roughen PTFE de la tubería mediante el uso de papel de lija para permitir adherencia de la cola epoxi.

2. Preparación de sílice fundida

1. Acortar sílice fundida en 2,25 cm pieza. (Véase la figura 3a)

3. Inserción de la sílice fundida en el tubo de PTFE

1. ....

Results

La sonda de microdiálisis a medida concéntrica consta de una membrana de polisulfona con un corte molecular de 30 kDa. El conjunto de la sonda se ilustra en la Figura 3.

Se exhibió una recuperación in vitro para la glucosa metabolitos pequeña de energía (180,16 Da) y lactato (112,06 Da) de 19,10 ± 1,2% y 21,2 ± 1,6%, respectivamente. Para la acetilcolina cargado positivamente con un peso molecular de 181,66 Da, que mostró un valor de in vitro de recuperació.......

Discussion

La Figura 3 muestra un conjunto de sonda ejemplar. Cotas de diámetro interior y exterior Corregir tienen que ser cuidadosamente monitorizados por tubo (OD 1,6 mm; ID 350 micras), sílice fundida (OD 105 m; ID 40 micras) y la membrana de diálisis (OD 245 m; ID 210 micras). También es importante mantener un espacio entre la membrana y la sílice fundida de (105 m) y entre la membrana y el tubo (105 micras) también. Si los valores son diferentes, la presión en la sonda puede elevarse y producir la pérdida de.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pegamento epoxi	SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, Alemania
Sílice fundida ID 40 y micro; m OD 105 y micro; m	Ziemer-Chromatographie, Mannheim, Alemania	Art. Nº: 6.040105
Membrana de polisulfona (filtro de hemodiálisis FX Cor Diax 600)	Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, Bad Homburg, Alemania	REF: F00001593
Pegamento de cianacrilato (Pattex® superglue plastic)	Henkel AG&Co. KGaA, Dü sseldorf, Alemania
Tubo de teflón 1,6 x 0,35 mm	SunChrom® GmbH, Friedberg, Alemania	Art. Nº: 969-195.219
Bisturí (Feather® Cuchilla quirúrgica n.º 10)	pfm medical ag, colonia, Alemania	Art. No: 07310
Microscopio	MEIJI Techno	EMZ-8TR
Cánula de 30 G x 11" (0,3 x 25 mm); Sterican® Z	B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Alemania	REF: 9324500
Cánula de 25 G x 11/2" (0,5 x 40 mm) 100 Sterican®	B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Alemania	REF: 9186166
Bolígrafo fino (Stabilo point 88 fine 0.4)	Schwan-STABILO Schwanhä uß er GmbH & Co. KG	Art. No: 88/36
Pegamento caliente  (Barras de pegamento ULTRA Power x 11 mm)	Steinel® GmbH, Herzebrock-Clarholz, Alemania	Art. No: 4007841046910
Papel de lija P60 230 x 280	Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerhö he, Alemania	Número de catálogo: 2608605397