Este método evalúa la invasión de células cancerosas desde esferoides a una matriz 3D circundante. Los esferoides se generan mediante el método de cultivo de gota colgante y luego se incrustan en una matriz compuesta por materiales de membrana basal y colágeno tipo I. Posteriormente, se monitorea la invasión de los esferoides.
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Artículo de método
Un Cancer Cell esferoide Ensayo para evaluar la invasión en un entorno 3D
En este artículo
Resumen
Resumen
Se cree que la naturaleza invasiva de las líneas celulares cancerosas se correlaciona con su potencial metastásico. Sin embargo, la mayoría de los ensayos tradicionales no examinan estas características invasivas en un entorno tridimensional y los datos resultantes sufren de una aplicabilidad biológica reducida. Aquí se presenta un enfoque para visualizar la capacidad invasiva de las líneas celulares en un entorno fisiológicamente relevante. El ensayo de invasión de esferoides de células cancerosas primero utiliza la gravedad para generar esferoides dentro de gotas de medio que cuelgan de la tapa de una placa de cultivo celular. A continuación, estos esferoides se incrustan en una matriz 3D que consiste en una mezcla de materiales de la membrana basal y colágeno tipo I. La salida de las células cancerosas de los esferoides a la matriz circundante se monitorea a lo largo del tiempo. El método descrito aquí puede modificarse para examinar la invasión después del cocultivo de diferentes tipos de células, la inclusión de fármacos/inhibidores o alteraciones en los constituyentes de la matriz extracelular (MEC).
Introducción
Se establece que la motilidad de células de cáncer es predictivo de potencial metastásico, dado que tal comportamiento facilita la invasión a través de la membrana basal y la entrada en el sistema circulatorio 1. Mayoría de las investigaciones sobre la motilidad se ha centrado en cómo las células se comportan en un entorno de dos dimensiones (2D), a pesar de que se está ampliamente reconocido que el movimiento de las células en una matriz (3D) tridimensional es más representativo de cómo estas mismas células en realidad comportarse 2 in vivo. Sistemas de cultivo en 3D se utilizan cada vez más para estudiar comportamientos celulares que ....
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Protocolo
1. Generación de esferoides
- Preparar la suspensión de una sola célula para colgar culturas gota a separar los cultivos de células adherentes cáncer de ~ 70% de confluencia usando un lavado con PBS seguido de exposición a solución de tripsina-EDTA 0,05%.
- Neutralizar la solución de tripsina con medio de cultivo celular y contar las células usando una parte alícuota de la suspensión celular. Nota: El medio de cultivo celular específica dependerá de la línea celular se está probando. Siga ATCC recomendaciones de los medios, donde el medio de cultivo celular es típicamente DMEM + 10% FBS. Más información se puede encontrar en la Tabla de Materiales.
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Resultados
Usando el ensayo de invasión esferoide (Figura 1), un panel de líneas celulares de cáncer se ensayó para determinar su capacidad para formar esferoides, así como para la cantidad de egreso celular exhibido después de la implantación en una matriz 3D que consiste en materiales membrana basal y colágeno tipo I (Tabla 1). Estos resultados demuestran que no todas las línea celular de cáncer creará esferoides bien formadas, donde las líneas celulares que poseen una morfología epitelial i.......
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Discusión
Este estudio evaluó el rendimiento de un panel de líneas celulares de cáncer en un ensayo de invasión esferoide (Tabla 1). En general, nos encontramos con que la formación de esferoides es mayor en los más líneas de células epiteliales de aspecto, donde la presencia de uniones célula-célula promueve la formación de una arquitectura esferoide similar. Líneas celulares conocidos que se han sometido a una transición epitelial-mesenquimal, como MDA-MB-231 células no forman esferoides en el cultivo gota colg.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Apoyado por el NIH subvenciones CA051008 P30 y T32 CA009686 (ATR).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Matrigel Factor de Crecimiento Reducido | Corning | CB-40234 | |
| Colágeno Tipo I, Cola de Rata, 100 mg | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Life Technologies | 11995-065 | |
| RPMI 1640 Medio | Life Technologies | 11875-093 | |
| PBS | Life Technologies | 10010-023 | |
| 0.05% Tripsina-EDTA | Life Technologies | 25300-054 | |
| Suero Fetal Bovino, Inactivado por Calor | Omega Scientific | FB-12 | |
| 100 mm Platos tratados con TC | Corning Incorporated | 430167 | |
| placas tratadas con TC de 24 pocillos | NEST | 702001 | |
| Microscopio | |||
| mantuvieron en DMEM + 10% FBS, con la expectativa de células BT-474 y LNCaP, que se mantuvieron en RPMI + 10% FBS. |
Referencias
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Metastasis: Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev. Cancer. 2 (8), (2002).
- Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.
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Reimpresiones y permisos
