Modelo apical Resección ratón para el Estudio de la regeneración del corazón de mamíferos Temprana

Resumen

En este estudio se demuestra un protocolo de video paso a paso de la resección apical. La resección apical es un abordaje quirúrgico recientemente destacado en la investigación de la regeneración cardíaca en mamíferos. Este estudio puede promover la aplicación de la resección apical como metodología estándar en la investigación del mecanismo subyacente a la regeneración del corazón.

Resumen

La enfermedad cardiovascular afecta a todo el mundo debido a los cambios de estilo de vida intensivos. La regeneración del corazón representa una gran promesa para la reparación y la restauración de los cardiomiocitos perdidos debido a lesiones y enfermedades. En contraste con la regeneración cardiaca robusta de ciertos vertebrados inferiores, corazones de mamíferos adultos típicamente muestran una capacidad mínima para la regeneración del corazón y reparación. Sin embargo, estudios recientes han suscitado considerable interés científico con el hallazgo de que, entre el día postnatal 1 al 7 (P1 a P7), el corazón neonatal de ratón retiene potencial regenerativo significativa después de la resección apical (es decir, la amputación quirúrgica y la exposición del ápice del ventrículo izquierdo). Una gran controversia sobre este hallazgo podría ser debido a los diversos procedimientos relacionados con la cirugía utilizados en los esfuerzos para replicar o ampliar sobre este importante hallazgo. Estas instrucciones presentan dinámicamente los materiales y la metodología para la resección apical en un modelo de ratón. Las medidas más destacadas de este Surviva roedoresl cirugía involucra anestesia hipotermia, toracotomía, la amputación quirúrgica del ápex del ventrículo del corazón, y la sutura y la recuperación de los ratones. El método descrito también podría ampliar la aplicación del modelo de ratón de la resección apical para la investigación cardiovascular.

Introducción

La prolongación de la vida humana conduce a diversas enfermedades relacionadas con el envejecimiento y el estilo de vida, incluida la insuficiencia cardíaca, una de las principales causas de mortalidad. Sin embargo, sin el reemplazo de las células del músculo cardíaco perdidas o disfuncionales, las terapias actuales solo pueden mejorar transitoriamente la función cardíaca^{1, 2}. Por lo tanto, es necesario descubrir y desarrollar estrategias innovadoras para la regeneración y reparación cardíaca. El corazón de los mamíferos adultos tiene un potencial regenerativo limitado. Los estudios de vertebrados inferiores, como los anfibios urodelos y los peces teleósteo....

Protocolo

Todos los experimentos con ratones fueron aprobados por el Programa de Uso y Cuidado de Animales de los Institutos Nacionales de Salud (NIH), con número de protocolo H0083R3. El NHLBI IACUC aprobó el protocolo sin analgésicos.

1. La hipotermia Anestesia en ratones recién nacidos

1. Esterilizar esponjas y equipo quirúrgico en un autoclave antes de la cirugía. Prepare todos los materiales quirúrgicos y cambiar en un esterilizador de cuentas en caliente 15-20 minutos de antelación para llegar a 240 ° C a 270 ° C.
2. Transferir todas C57BL / 6 cachorros (edad P1) de su madre que amamanta a una jaula del ratón limpia con ropa de....

Resultados

Crías de ratón fueron sacrificados 1, 2, y 21 días después de la resección apical, y sus corazones se recogieron para H & E y tricrómico de Masson. De color azul en tricrómico de Masson indica la deposición de matriz extracelular epicárdica ^5. Con la resección apical éxito, un coágulo de sangre se forma de manera efectiva para sellar el LV One día post-resección apical, como se muestra en la Figura 1A. Se observa una resorción gradual del coágulo de sangre y principios de fibrosis cardiac.......

Discusión

La regeneración cardíaca muestra potencial para el tratamiento y la prevención de la insuficiencia cardíaca^{1, 2}. Los modelos animales son indispensables y juegan un papel fundamental en la comprensión de cómo ocurre la regeneración cardíaca^3-6. Muchos anfibios y peces regeneran el tejido cardíaco en respuesta a una lesión, lo que proporciona información sobre nuestra comprensión de la enfermedad cardiovascular humana^{13, 14}. En términos de evolución, sin embargo, la fisiopatología debería .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Portaagujas Olsen-Hegar con tijeras, 1,5 mm	Fine Science Tools	12002-12
Tijeras de resorte Vannas - 2 mm Cutting Edge Science	Tools	15000-03	Tijeras de iridectomía Esterilizador
perlas calientes Fine	Science Tools	18000-45
Pinzas de iris, rectas, dentadas	Fine Science Tools	11064-07
Pinzas de iris, curvado, dentado	Herramientas de ciencia fina	11065-07
Tijeras de karité - Curvas/romas-romas/12cm	Herramientas de ciencia fina	14105-12
pinzas de atado de sutura con mango redondo, rectas	Herramientas de ciencia fina	18025-12
Tijeras de resorte Vannas con mango redondo Herramientas de	ciencia fina	15400-12
Hemostático fino	Herramientas	de ciencia fina13007-12
Lámpara de aumento	Luxolamp Corp	IM120
Lámpara calefactora	Brandt Equipment llc	51152/3
6-0 Suturas Prolene	Ethicon	8889H
Pegamento para piel-Vetbond Adhesivo para tejidos	3M	1469
Aplicadores estériles con punta de algodón	Dynarex	4305
WEBCOL Almohadilla de preparación con alcohol	Covidien	6818	Medium 2 PLY, 200/BOX, Saturada con 70% de alcohol isopropílico
Curity All Purpose Sponges	Covidien	9024	No tejida 4 CAPAS, 4"x4" (10.2cm× 10,2 cm)
Hoja protectora de sobremesa	KIMTECH SCIENCE	7546	18" x 19,5" (45,72 cm x 49,53 cm) x 50
Cloruro de sodio al 0,9%, 250 ml	Hospira Inc.	NDC 0409-6138-22
Hisopos de solución Betadine Productos	Purdue L.P.	NDC 67618-153-03
Autoclave	TOMY Digital Biology	SX-700	ESTERILIZADOR DE VAPOR DE ALTA PRESIÓN
Escáner de portaobjetos	HAMAMATSU	NanoZoomer 2.0-RS

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