Summary
この手順では、等電脳の状態で、その結果、生理学的に関連する脳の状態の間、継続的な電気的活動の完全な廃止後に単一ニューロンからの長期的なin vivoでの細胞内記録を行います。動物の生理学的定数は慎重に人工的な昏睡状態への移行中に監視されています。
Abstract
方法ニューロンのプロセス情報は、それらの固有の膜特性上および求心性シナプスのネットワークのダイナミクスの両方に依存します。特に、強い警戒の状態の関数として変化する内因的に生成されたネットワーク活動は、有意に神経の計算を調節します。自発的な脳のダイナミクスが単一ニューロン「統合的特性に与える影響を、異なる調査するために、我々は、ペントバルビタールナトリウムの高用量の全身注射によって、 生体内でのすべての脳の活性を抑制することからなるラットにおける新しい実験戦略を開発しました。継続的に組み合わせた皮質脳波（ECOG）と細胞内記録によって監視皮質の活動は、次第に安定した等電点電気泳動プロファイルにつながる、鈍化しています。深い昏睡状態にラットを入れ、この極端な脳の状態は、注意深く実験を通して動物の生理学的定数を測定することによってモニターしました。細胞内Recordingsは、私たちは、このような睡眠 - 覚醒サイクルに遭遇するなどの生理学的に関連する皮質ダイナミクス、中に埋め込まれた同じニューロンの統合的な性質を特徴づけると比較させ、脳は完全に沈黙していたとき。
Introduction
任意の環境刺激または行動作業の非存在下では、脳は、脳波（EEG）波として、頭皮の記録可能な電気活動の連続的なストリームを生成する「休止」。この内因性の脳活動の細胞内相関は、求心性のネットワーク1,2の継続的な活動を反映し、興奮性と抑制性シナプス電位の組み合わせで構成されている（また、「シナプスノイズ」として知られている）背景膜電圧の変動によって特徴付けられます。この自発的な活動は、警戒の異なる状態で周波数と振幅で変化します。単一ニューロンの興奮性と応答性にネットワーク活動の影響を解明することは神経科学3,4の主要な課題の一つです。
多くの実験と計算の研究では、統合propertie上の継続的なシナプス活性の機能的影響を検討していますニューロンの秒。しかし、背景シナプスノイズの影響を受け、異なる神経細胞のパラメータの役割は、とらえどころのないままになります。例えば、膜の脱分極の平均レベルは、正に5,6または負7-9活動電位を誘発する感覚入力の能力と相関が見出されました。また、いくつかの調査は他の人がいることを示し、求心性シナプス入力の連続的に変化する流れに起因する膜電位の変動は、強くその入出力関係3,10-13のゲインを調節することによって、単一ニューロンの応答性に影響を与えることを示唆しているのに対し、阻害シャントによって媒介される膜入力コンダクタンスの変化にかかわらず、膜変動14,15の大きさのニューロンの利得を調節するのに十分です。最後に、目を覚まし動物で行われた最近の研究では、単一ニューロンにおける感覚情報の処理が非常に警戒aの状態に依存してどのように強調しましたndは現在の行動の需要16,17。
高度に相互接続システム内の指定されたプロセスの機能的役割を解明する簡単な戦略は、その不在は、具体的にシステムの機能を変化させる方法を決定することです。この方法は、広く実験的病変または異なる脳領域18-21の不活性化、または特定のイオンチャネル22,23の薬理学的遮断を使用して、たとえば、神経科学の研究に用いられてきました。特に、機能的接続性とネットワークダイナミクスは、単一のセルの計算24-27にどのように影響するかを明らかにするために、in vivoで適用されています。しかし、今日まで、ニューロンの発火を阻止および/ またはそれらの基本的な生物物理学的特性を摂動することを意図するものでローカル操作は部分的に有効であることができ、比較的小さな脳容積28に限定されています。
これらの制限を克服するために、我々は、新たなインビボ実験的アプローチを開発しました指定された脳の状態で記録された単一神経細胞の電気生理学的特性を比較するために、ラット、 すなわち、全脳のシナプス活動29の完全な抑制後に得られたものに、動的な特定のネットワークに埋め込 まれました。制御条件において、二つの異なる皮質ダイナミクスを生成することができます。睡眠のようなelectrocorticographic（ECOG）のパターンは、ペントバルビタールナトリウムの適度な用量の注射によって誘発されました。また、覚醒状態（覚醒状パターン）を根底にある皮質の活動に匹敵する小振幅の高速ECOG波はフェンタニルの注入によって生成することができます。同じECOG細胞内記録を維持しながら、続いて、内因性の脳の電気的活動の完全なサイレンシングは、等電ECOGと細胞内活動によって特徴付けられる、ペントバルビタールナトリウムの高用量の全身注射によって得られました。このような極端な昏睡状態の誘導は、潜在的に致命的なconsequenを持っている可能性があるため生物学的機能上のCESは、生理学的変数の慎重かつ継続的な監視が不可欠でした。したがって、我々は細心の注意を払って実験を通じてハートビート周波数、呼気終末CO 2濃度（のEtCO 2）、O 2飽和度（SpO 2）およびラットの中心温度を追いました。
我々は、in vivoでの長期かつ安定した録音のために特に適している鋭い微小電極を使用して、これらの異なる状態の間に単一ニューロンの特性を評価します。ここで説明する手順は、他の電気生理学的およびイメージング手法と組み合わせることができ、他の動物モデルに拡張することができます。
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Protocol
すべての手順は、欧州連合（指令63分の2010 / EU）のガイドラインに沿って行われ、動物実験でのチャールズ・ダーウィン倫理委員会によって承認されました。我々は、しかし、ほとんどの手順は、すべての人の特定のニーズにマッチするように適合させることができ、ここで私たちは日常的に我々の研究室で使用する手順について説明します。
1.外科の準備
注：すべての切開と圧力点を繰り返し局所麻酔薬（リドカインまたはブピバカイン）で浸透されるべきです。無菌製剤は、いくつかの修正が実施されるべき必要とされる場合、本手順は、端末です。
- 腹腔内（IP）注射を分離ローカル二つにペントバルビタールナトリウム（40mg / kg）およびケタミン（50mg / kg）でラットを麻酔。
- 動物は全身麻酔下に行くと繰り返し麻酔の外科的平面が（つま先ピンチへの反応）が達成されていないことを確認してみましょう。 FEにラットを置きますedback加熱ブランケットとは、37°Cの周囲のコア温度を維持するために、直腸プローブを挿入します。
- 麻酔薬のその後の注入を容易にし、繰り返し針穿刺30で臓器を穿孔回避するために、腹腔内にカテーテルを配置します。
- 胃の右下または左象限内に位置する領域の上の領域 - 小（3ミリメートル〜2）の上に髪をクリップ。
注：脱毛クリームを使用することもできます。 - 鋭いハサミやメスで皮膚上の3ミリメートル切開 - 2を行います。腹膜腔が観察されるまで鈍的切開を使用して、脂肪と筋肉層を除去。
- キャビティ内の小さなカテーテル2センチ、手術用接着剤で傷口を閉じます - 約1を挿入します。
注意：直径およびカテーテルの長さの合計が最小であるべきである（。 例えば 、2フランス語-内径0.043ミリメートルに相当）デッドボリュームを減らすために。ポリウレタンチューブが最も適しています。 - ループおよび縫合糸トンを作ります彼は、所定の位置に固定するために皮膚にカテーテル。
- 胃の右下または左象限内に位置する領域の上の領域 - 小（3ミリメートル〜2）の上に髪をクリップ。
- 人工呼吸時の換気を制御するために気管チューブを取り付けます。
- 前のステップについては、関心領域の準備（1 - 右胸骨柄上記気管の上を2cm）、髪を除去し、皮膚を切開。
- 脇唾液腺を移動し、静かに筋肉の最後の層を解剖することにより気管を露出させた後、脂肪と筋肉の最初の層を分析鈍いです。
- 慎重に気管を介して組織を除去し、小さな鉗子を使用して、その下のスレッドをスライドさせます。スレッドと外科医の結び目を作るが、まだタイトません。
- 2軟骨環の間の気管の横方向を切開。気管内スワブの血液があれば。
- 適切な直径の気管チューブを挿入し、安定したチューブを固定するために、スレッドの結び目を締めます。さらなる安定性のために、スレッドは、さらに、気管内チューブのより高い点で取り付けることができます。
- Sutur電子傷近いかは、外科用ステープルを使用しています。気管チューブを再利用することを意図している場合は、ここで手術用接着剤を避けてください。
- 定位フレームに動物をインストールして、慎重に次の生理的変数の監視：ECOG、のSpO 2、のEtCO 2、および内部温度（心電図、心電図を介して）心拍数を。麻酔や生理状態の適切な深さを保つためにこれらの変数を監視し、調整します。具体的には、ペントバルビタールナトリウムの小さい用量（10mg / kgの）必要に応じて麻酔を補います。
- 乾燥を避けるために、両眼に眼軟膏を適用します。縦切開（約2センチ）作り、頭皮の上に髪をクリップし、メスまたはキューレットを使用して頭蓋骨を覆う結合組織を切除。
- 歯科用ドリルで関心のある領域上に小さい（〜1.5ミリメートルの直径）開頭を行います。
注：ここでは、一次体性感覚野のバレルフィールドは（7対象としている - 耳線へ8ミリメートルの前方を、4.5-正中線31に対して横5.5ミリメートル）。熱を放散するために繰り返し洗浄します。 - 優しく硬膜に小さな穴を作るために極細のピンセットを使用してください。 ECOG電極を配置する頭蓋穿孔内〜0.5ミリメートルの領域を確保（次のステップを参照）。永久に0.9％NaCl溶液（または人工脳脊髄液）との湿った皮質を保ちます。
- 髄膜で覆われていない皮質領域を避け、硬膜上に低インピーダンス（〜60kΩの）銀電極（ECOG電極）を配置し、ヘッドの反対側の頭皮の筋肉に基準電極を配置します。
- この段階（最後のペントバルビタールナトリウム注射後30分）では、IPカテーテルを介してペントバルビタールナトリウム（10〜15ミリグラム/ kg /時）またはフェンタニル（3-6μgの/ kg /時）の反復注射によって麻酔を維持します。後者は非同期化、覚醒のような、皮質のプロファイルになります前者は遅い振動、睡眠のような、ECOGパターンになります。
- 人工Vを調整します呼吸頻度および量は、ラットの自発呼吸（ - 115呼吸/分で32正常範囲70）と同様になるようentilationシステム。その後、気管チューブに機械的な換気を接続し、（両側の）適切な胸郭のインフレを確認します。そうでない場合、気管軸換気チューブの位置を調整します。必要に応じて、注射器または真空ポンプに接続されたカテーテルを用いて気管内に存在する分泌を吸います。
- 全ての生理学的変数32-35とECOG 29,36のパターンが麻酔の安定した外科手術面を反映している場合、最初の注射のために、ラット、40mgの/キロを麻痺させる各脚にガラミンのtriethiodideの筋肉内注射を行い、その後は20mg / kgの、すべての2時間19,29,36,50。
2.細胞内記録
- 〜0.2μmの先端を有するガラスマイクロピペット（シャープ微小電極を）引きなどの抵抗がbetwee範囲nは50と80MΩはかつて2 M酢酸カリウム（KAC）を充填しました。
- （ヘッドステージを介して）細胞内のアンプにピペット溶液を接続するには銀/塩化銀（銀/塩化銀）のワイヤを使用して特定のホルダーにピペットを置きます。ホルダーは、マイクロマニピュレータに接続する必要があります。ラットの首の筋肉にAg / AgCl参照電極を配置します。
- ゆっくりと関心領域まで脳内にピペットを挿入し、現在の段階に応じて電圧降下を監視することにより、その抵抗を確認。必要に応じてピペットをクリアする話題（またはザップ）アンプのボタンを使用します。
- 脳の動きを低減するためにシリコーンエラストマーまたは4％アガロースでそれをカバーする前に（ECOGまたは細胞内の電極に触れないように注意してください）開頭術を乾燥させるために綿棒または合成吸収三角形を使用してください。
- セルに近づいたときに、その抵抗値が増加するまで、2ミクロンのステップ - 1でピペットを下げます。その後penetraにアンプの話題機能を使用ニューロンにTE。
3.等電点電気泳動の状態を誘導します
- 同時に、ニューロンの膜電位、ECOGおよび生理学的変数を監視しながら、この段階で（細胞内電流、電流-電圧の関係、感覚刺激応答を注入するための応答を発射など 、）適切な実験プロトコルを実行します。
- 細胞内の電極は、記録セッション中膜電位と活動電位特性の両方の安定を分析することによって、細胞内で安定していることを確認してください。ない場合は、次のステップに進み、記録が安定するまで再び待つか、別のニューロンを検索しません。
- ペントバルビタールナトリウムの高いが赤外線致死量を注入IP回線を経由して（〜/ kgを90 mgのは、ペントバルビタール初期状態から35ミリグラム/キログラムなどとフェンタニル初期状態から155ミリグラム/キログラムまでと低くすることができます）。
注：15内 - 20分、細胞内およびECOG WAveformsは一過次第に完全な等電状態に崩壊するいわゆる「バースト抑制を「プロファイル37,38を 、到達するために断続的に電気無音でスローダウンする必要があります。しかしなSpO 2とのEtCO 2が比較的安定とどまるべきである-心拍数が大幅に（20％〜10で）遅くなることが期待されます。 - 等電状態に達していない場合は、ペントバルビタールナトリウム（ステップ3.1投与量の約10％）の少量を注入。等電点電気泳動状態がまだ達成されていない場合はより多くの麻酔薬を追加する前に、15分待ってください。
- 記録されたニューロンの統合的特性にネットワークダイナミクスの影響を比較するための実験プロトコルを繰り返します。
注：麻酔注射を中止した後、電気的な脳活動が完全に3〜4時間以内に回復する必要があります。 - 実験の最後に、ペントバルビタールナトリウムの致死量を注入する（200ミリグラム/ kgのIP）にラットを安楽死させます。
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Representative Results
等電脳の状態を誘導し、維持することは、インビボ実験手順で繊細です。直接神経細胞の興奮と伝達関数29に皮質ネットワーク活動の影響を研究するための強力なツールであることが証明されている。 図1は、ECOGと重要な定数を含むマルチパラメータモニタリングを示し、動物の生理的状態の（ 図1Aの前に等電状態の）及び後（ 図1B）の誘導。
制御および等電点電気泳動条件での生理的パラメータの1モニタリング図。
AとB、アクティブ皮質状態（A）と潜水艦時のECOG（上のトレース）および生理的パラメータの同時録音equent等電点電気泳動期間（B）。コア温度（温度）、のEtCO 2とのSpO 2は 、実験を通して、本質的に安定しています。心拍数は、対照的に、漸進的に等電状態の誘導後に減少（382 349拍/分から）、ECGに見られるように。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
制御セッション中は、生理的パラメータは、健康的で目を覚まし動物32-35で測定されたものと同様であったとわずかに鈍化した心拍数（ 図1）を除いて、等電状態の誘導後に影響を受けないままであった。この 低酸素症39または高炭酸ガス40以来の重要な点は著しく神経細胞の興奮性を変更することができ、したがって、スタッドに重大なバイアスを導入することができますです yはニューロンの統合的特性の脳の状態依存変調を探索します。
私たちは、睡眠の初期段階（ 図2AA、左パネル）の間、または（ 図2Abの 、左パネル）覚醒中に内因的に生成された皮質のダイナミクスを模倣する二つの異なる初期条件から等電状態を得ました。これらの活性の状態は、いずれのペントバルビタールナトリウム（睡眠など）またはフェンタニル（覚醒状）の注射によって誘導しました。両方の場合において、ペントバルビタールナトリウムの高用量のその後の注入は、従って用語等電点、ECOGにおける自発的活性の完全な廃止と同時に記録したニューロン（ 図2AA及びB、右パネル）が得られました。継続的なシナプス活性を抑制することがニューロンの膜電位（ 図2B）の大幅な安定した過分極をもたらしました。
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図膜電位の自発的ダイナミクスにシナプス活性の抑制の2帰結。
（A）（a）および（b）覚醒状パターン（左のパネル）、および対応する後続の等電エポックの間スリープ状時ECOG（上部のトレース）および細胞内活動（イントラ、下部トレース）の同時代表レコーディング（抑制注射後の示された時間で、等電点電気泳動、右パネル）。 ECOG信号の時間 - 周波数解析（0のエネルギー密度 - 50 Hzの周波数範囲）はカラースケールで示されています。 （B）膜電位の値の確率密度（P）を （Vmは、ビンサイズ0.5 mVで、記録の10秒）パネルAに示すニューロンからのこの図は、参考文献29から、許可を得て、変更されています。/ftp_upload/53576/53576fig2large.jpg "ターゲット=" _空白 ">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
この極端な脳の状態の機能的影響を説明するために、我々は、等電ニューロンのパッシブとアクティブの固有の特性を抽出し、対応する初期状態の間に測定されたものと比較しました。この戦略を使用して、我々は、ニューロンが、彼 らも背景シナプス活性（ 図部3Aaと、b、等電点電気泳動）の完全な抑制後に完全に興奮性のままであることを実証し、等電状態の間に電流を脱分極の細胞内注射に応答して活動電位を発射することができることを示しています。さらに、我々は、強度（FI関係）を増加させる電流を脱分極工程によって誘導された発射周波数を測定することによって評価したニューロンの伝達関数は、最初のアクティブ状態と比較して右にシフトしたことが見出さ示します弱い興奮入力（ 図3B）に対するニューロンの感受性の低下。対応するニューロンの利得は、 すなわち、FI曲線の傾きは、変化しないままか、制御状態（ 図3B）は、それぞれ、sleep-または覚醒型であった場合に減少しました。驚くべきことに、ニューロンの見かけ上の入力抵抗は大幅に制御アクティブ条件（ 図部3Aa、B）と比較して、シナプスのドライブが存在しない場合には変更されませんでした。人口分析アクティブおよび等電点電気泳動条件におけるニューロンの時間的な発火パターンの定量化を含むより多くの結果は、我々の最初の論文29でご利用いただけます。
図3.膜の特性と入力-出力関係に関する三つの皮質活動パターンの比較インパクト。
（A）Voltag睡眠時などに脱分極する体性感覚皮質ニューロンおよび過分極電流パルス（下のトレース）の電子応答（真ん中のトレース）（a）と（b）覚醒のようなECOGパターン（上のレコード）とシナプス活性の剥奪後（等電点電気泳動）。膜入力抵抗（R mを、値が示されている）は、過分極電流パルス注入（-0.4 NA）によって誘導される電圧降下（灰色のトレース、20試行の平均値）から測定しました。 （B）、FI曲線を対応するパネル（A）に示すニューロンの伝達関数を提供します。発火率を増加させる強度の電流パルス（200ミリ秒の持続時間）を脱分極に応答して測定しました。各電流強度は20回印加し、対応する発火率を平均しました。破線は、（A）に示す細胞応答を示します。この図は、参考文献29から、許可を得て、変更されています。/ 53576 / 53576fig3large.jpg "ターゲット=" _空白」をアップロード>この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
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Discussion
ここでは、ネットワークと細胞レベルの両方で生体内自発的な脳の電気的活動に抑制するための新しい方法を説明します。この手順は、等電昏睡41として知られている極端な脳の状態をもたらします。臨床的観点からは、そのようなelectrocerebral非アクティブは、EEG上で見ることができる最も深刻な異常です。これは、主にどちらか死んまたは遷延性植物状態42に連続するすべての患者で、不可逆的昏睡に関連付けられていますが、（例えば、チオペンタールなど）は、中枢神経系抑制薬との中毒によって引き起こされたときに少なくとも部分的に、偶発性低体温を逆にすることができます42または仮死心停止43。我々の実験パラダイムでは、等電状態は徐々に最初急速ECOGの周波数成分の減少を誘導し、高用量でのペントバルビタールナトリウムの全身注射、「バーストサプレッション」モードによって達成されます。41,42、完全に平らECOGに最終的にリードします。細胞内レベルでは、自発的な活動の消失は、脱分極および過分極膜電位変動の同時減少と同様の時間経過をたどります。したがって、ペントバルビタールナトリウムの注射は、最初のアクティビティを発射皮質ニューロンの減少につながるシナプス抑制性伝達を増加させることを仮定することができ、最終的には等電ECOGと細胞内活動29,44もたらす興奮性および抑制性シナプス伝達の漸進的廃止。アクティブから等電ECOGパターンと同様の遷移は、ケタミン（個人的な観察 ）またはイソフルラン45,46などの他の麻酔薬の投与後に取得することができます。
手順は比較的簡単表示されることがあります。しかし、誘導された非常に深い昏睡状態に起因し、内の基本的な生理学的変数を維持正常範囲は、実験の成功のために最も重要です。 EtCO 2の変動の変化が気管内に形成粘液栓の結果である可能性があります。このような状況では、人工呼吸器が外され、粘液が素早く吸引や気管チューブを通じて一掃されるべきです。また、準備の機械的安定性は、細胞内記録のために重要です。従って、特別な努力が適切な気管チューブの位置合わせを維持しながら、注意深くヘッドに動物の体を相対的に調整することにより、そして開頭術のアガロースまたはシリコーンエラストマーを適用することにより、血管及び呼吸器の脈動を低減するために行われるべきです。麻痺剤を注入することによって自発的な筋肉収縮を回避するためにも必要です。最後に、環境振動や電気的ノイズを極力低減されるべきです。その他の刊行物詳細安定した細胞内または細胞パッチクランプを可能にするin vivoでの準備で最適のための基本的な手順を誰ル・セル記録29,47-50。
神経細胞の本質的な膜特性とネットワークのダイナミクスを分離する能力は、個々のニューロンは、その高度接続された環境で情報を処理するメカニズムを分析することが不可欠です。はじめに述べたように、基本的な神経科学のこの中心的な問題に専念し、以前の研究では、部分的には、ニューロンやネットワークを調査し、最終的にin vivoでの準備と、対in vitroで含む様々な実験条件の特定の機能に、矛盾する結果につながりました、使用異なる麻酔手順（例えば29,36,51参照）。我々は、本発明の方法は、 インビトロ準備が減少し、in vivo実験からから得られた結果を検証し、場合によって和解するために使用することができることを提案します。確かに、それは直接、同じ神経細胞に、同じ実験手順の過程で検討し、比較することができます覚醒のようなダイナミクスからの求心性シナプス入力の異なるパターンの影響は、生きている動物における神経統合の性質上、不活動を完了します。
このプロトコルの一つ特徴は、それが多次元を調査するために、このようなマルチサイト表面と深さ脳波記録、調査をベースと遺伝的にコードされた蛍光指示薬と脳のさえ血行動態および代謝イメージングなどの他の実験技術と組み合わせることができ、一度マスターし、ということです等電点電気泳動脳の特性。臨床および診断の視点として、我々はニューロンがまだ持続的な等電昏睡状態の間に、興奮していることを実証したので、脳のような病的状態に浸漬患者および動物モデルの、例えば、感覚情報の処理を皮質の機能をテストするために、関連するであろう非アクティブ。
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Acknowledgments
この作品は、財団・ド・フランス、研究所国立・デ・ラ・サンテエ・デ・ラ・RECHERCHEMédicale、ピエール＆マリー・キュリー大学とプログラムのINVESTISSEMENTSドールアベニール「ANR-10-IAIHU-06からの助成金によってサポートされていました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Pentobarbital | Centravet | Pentobarbital | |
| Ketamine 500 | Merial | Imalgène 500 | |
| Fentanyl | Janssen-Cilag | Fentanyl | |
| Xylocaine | Centravet | Xylovet | |
| Gallamine triethiodide | Sigma | G8134 | |
| ECoG amplifier | A-M Systems | AC amplifier, Model 1700 | |
| Intracellular amplifier | Molecular Devices | Axoclamp 900A | |
| Data acquisition interface | Cambridge Electronic Design | CED power 1401-3 | |
| Data analysis software | Cambridge Electronic Design | Spike2 version 7 | |
| micromanipulator | Scientifica | IVM-3000 | |
| Capillary Puller | Narishige | PE-2 | |
| Borosilicate glass capillaries | Harvard Apparatus | GC150F-10 | |
| Silver wire 0.125 mm (intracellular recording) | WPI | AGT0525 | |
| Ag-AgCl reference | Phymep | E242 | |
| Silver wire 0.25 mm (ECoG recording) | WPI | AGT1025 | |
| Artificial respiration system | Minerve | Alpha Lab | |
| Physiological parameters monitoring | Digicare | LifeWindow Lite | |
| Heating Blanket | Harvard Apparatus | 507215 | |
| Stereomicroscope | Leica | M80 | |
| Scissors | FST | 15005-08 | |
| Forceps Dumont #5 | FST | 11295-10 | |
| Forceps Dumont #5SF | FST | 11252-00 | |
| IP Polyurethane catheter - 0.43x0.69 mm | Instech | BTPU-027 | |
| Silicon elastomere | WPI | KWIK-CAST | |
| Dental drill | NSK | Y1001151 and P496 | |
| Surgical glue | 3M | vetbond |
References
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