Medidas de seguridad y procedimientos de operación en una (A) de laboratorio BSL-4: 2. Prácticas generales

Resumen

La realización de ensayos virales en un laboratorio BSL-4 es más complicada en comparación con el trabajo en un laboratorio BSL-2 debido a las precauciones de seguridad adicionales requeridas. Aquí, presentamos una descripción general de las prácticas y procedimientos utilizados dentro de un laboratorio BSL-4 que ilustra el uso adecuado del gabinete de bioseguridad de Clase II, la gestión/eliminación de desechos y la extracción de muestras.

Resumen

El trabajo en un laboratorio de contención de bioseguridad de nivel 4 (BSL-4) requiere tiempo y una gran atención al detalle. El mismo trabajo que se realiza en un laboratorio BSL-2 con patógenos no de graves consecuencias tardará mucho más en un entorno BSL-4. Este aumento de las necesidades de tiempo se debe a una multitud de factores que tienen por objeto proteger el investigador de las infecciones adquiridas en el laboratorio, el ambiente de trabajo de la contaminación potencial y la comunidad local de la posible liberación de los agentes patógenos de graves consecuencias. En el interior del laboratorio, el movimiento está restringido debido a las mangueras de aire conectados a los trajes de seguridad obligatorias para todo el cuerpo. Además, se requiere la desinfección de todos los elementos que se retira de los gabinetes de bioseguridad de clase II (BSC). especialistas de laboratorio deben ser entrenados en las prácticas de laboratorio BSL-4 y deben demostrar alto dominio de las habilidades que están realizando. El objetivo de este artículo es describir los procedimientos y las técnicas de laboratorio para asegurar b adecuadasiosafety y la precisión experimental usando un ensayo de placa viral estándar como un procedimiento de ejemplo. En particular, las técnicas adecuadas para trabajar con seguridad en un entorno de BSL-4 cuando se hará hincapié visualmente la realización de un experimento. Estas técnicas incluyen: la creación de un BSC de clase II para los experimentos, limpieza adecuada del BSC Clase II cuando terminó de trabajo, gestión de residuos y eliminación segura de los residuos generados en un laboratorio BSL-4, y la eliminación de las muestras inactivadas por dentro de un BSL- 4 de laboratorio para el laboratorio BSL-2.

Introducción

Dado que la seguridad del personal de laboratorio que manipulan agentes patógenos de alto riesgo (no existen profilaxis de infección ni las opciones de tratamiento) es de suma importancia, el Departamento de Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos ha establecido directrices para la construcción de instalaciones y las mejores prácticas para la conducción segura de trabajo con agentes patógenos en biomédica y laboratorios clínicos desde una perspectiva de seguridad de la biotecnología ^1. A través de la legislación y la regulación, muchas de las prácticas y procedimientos se han convertido en requisitos obligatorios que deben seguirse para el trabajo ....

Protocolo

1. Entrada de laboratorio

1. Reunir todos los materiales de construcción de un laboratorio BSL-2 para el experimento (por ejemplo, células, los medios y los consumibles) antes de entrar en el laboratorio BSL-4.
2. Completar el procedimiento de entrada BSL-4 (descrito en detalle en ^la referencia ^7).

2. Preparación de una Clase II Gabinete de Bioseguridad en el Laboratorio BSL-4

1. Una vez dentro del laboratorio BSL-4, garantizar la lista de control interno diario (Figura 1) se ha completado. Completar la lista de comprobación si la lista no ha sido previamente rel....

Resultados

De los procedimientos apropiados dentro del laboratorio BSL-4 son fundamentales para asegurar la terminación segura y eficaz de los ensayos. Al referirse a la lista de control interno diario completado (Figura 1), el personal de laboratorio asegurar que el equipo está en pleno funcionamiento. El posicionamiento adecuado del cuerpo en el centro de la BSC se asegura de que el experimento se lleva a cabo bajo condiciones de flujo de aire óptima (Figura 2). .......

Discusión

Trabajo en un laboratorio BSL-4 requiere un tiempo considerable y mayor atención a los detalles. Cualquier tipo de trabajo en este entorno requiere bien entrenado, a fondo, y los individuos de conciencia. El ensayo estándar de placa viral proporciona un modelo preciso de un procedimiento común para trabajar con patógenos de graves consecuencias en el laboratorio BSL-4, ya que el ensayo implica varios conceptos principales en las que deben ser entrenados los trabajadores de laboratorio.

El pr.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Micro-Chem Plus	National Chemical Laboratories	255
Etanol	Fisher	BP2818500
2 ml Placas de pocillos de 96 pulgadas	Fisher	278743
10 ml Pipeta serológica	Fisher	13-678-11E
25 ml Pipeta serológica	Fisher	13-678-11
Placas de 6 pocillos	Fisher
Violeta Cristal	Sigma	HT90132-1L
10% Neutral Formalina Tamponada Fisher		22-050-105
Tragacanto	Fisher	50-702-2000
20 μ l Puntas de pipeta	Fisher	21-402-550
200 μ l Puntas de pipeta	Fisher	21-402-561
1.000 μ l Puntas de pipeta	Fisher	21-402-581
DMEM	Lonza	12-604Q
FBS	Sigma	F2442-500mL
Penicilina/Estreptomicina	Lonza	17-602E
2x EMEM	Calidad Biológica	115-073-101
Pipeta	Drummond	4-000-101
1.000 μ l Pipeta	Lluvia	L-1000XLS+
200 μ l Pipeta	Lluvia	L-200XLS+
12 Pozos, Multicanal 200 μ l Pipeta	Rainin	L12-200XLS+
8-Pozo, Multicanal 1.000 μ l Pipeta	Rainin	LA8-1200XLS
Attest	Express Suministros Médicos
Autoclave	Getinge	GEB 2404 AMB-2
Bolsa de Autoclave	Fisher	01-828E
2.000 ml Vaso de precipitados	Fisher	02-591-10H Bandeja
autoclave	Fisher	13-359-20B
Bandeja de pipetas	Fisher	13-361-5
37 ° C Incubadora	Fisher	WU-39321-00
Lata de riesgo biológico	Rubbermaid Comercial	FG614500 RED
Cinta de autoclave	Fisher	15-903
Varilla de autoclave	fabricada por IRF Facility	N/A
Caja	de luz Fisher	S11552
Selladora de calor	Fisher	NC9793612
Bolsas termoselladas Fisher		01-812-25H
Bolsa de riesgo biológico	Fisher	01-828E

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