Aquí presentamos un protocolo para detectar la expresión de miRNA en muestras de pacientes con cáncer de mama utilizando hibridación in situ de miRNA.
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Artículo de método
Análisis clínico-patológica de los genes miARN expresión en el cáncer de mama mediante el uso de tejidos miARN
En este artículo
Resumen
Resumen
En este artículo, describimos un protocolo detallado para la detección de miRNA en tejido de cáncer de mama utilizando hibridación in situ con una sonda de LNA (ácido nucleico bloqueado) marcada con digoxigenina. La sonda fue reconocida por anticuerpos anti-DIG contra la fosfatasa alcalina y posteriormente se desarrolló utilizando sustrato de fosfatasa alcalina que produce señales de fluorescencia. Aquí utilizamos la técnica de hibridación in situ (MISH) de miRNA para analizar la expresión de miR-489 en tejidos de pacientes con cáncer de mama. Esta técnica puede detectar la localización de miRNA de interés en muestras individuales de tejido. Esta técnica se puede utilizar para comparar la expresión del miRNA deseado en el tejido tumoral con la del tejido normal adyacente y para identificar las estructuras específicas responsables de expresar este miRNA. Esta técnica puede ser muy útil para responder a ciertas preguntas clínicas, como el papel de un miRNA específico en el desarrollo del cáncer. Nuestros resultados indican que las células epiteliales mamarias expresan niveles significativamente más altos de miR-489 que las células tumorales adyacentes.
Introducción
El cáncer de mama es una de las neoplasias más comunes que afectan a la población femenina en todo el mundo. Más de 1,3 millones de casos de cáncer de mama cada año se registran en todo el mundo 1,2. Aunque las células tumorales han sido tradicionalmente considerado como biológicamente homogénea y altamente proliferativas, se ha hecho evidente que el cáncer de mama es genéticamente y clínicamente heterogéneos. La resistencia a medicamentos contra el cáncer prevalentes es una característica de los cánceres de mama avanzados, que conduce a la mortalidad en la mayoría de los pacientes a través de su facilitación de la progresión del cáncer y la metástasis a d....
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Protocolo
Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital de la Universidad Nacional de Chonnam Hwasun y la Universidad de Carolina del Sur. TMA muestras compuestas de cáncer de mama y tejidos de mama normales adyacentes emparejados fueron proporcionados por el Biobanco del Hospital Hwasun Chonnam Universidad Nacional, un miembro de la Red de Biobancos Corea.
1. Preparación de la solución
- Preparar 1 l de DNasa y RNasa libre de agua. Realiza todas las soluciones químicas mediante el uso de dietilo (DEPC) de agua tratada. Tratar 1 L de agua con 500 l de DEPC y se incuba durante 3 horas a temperatura ambiente. Autoclave el agu....
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Resultados
Se utilizó el tejido de cáncer de mama humano para determinar la expresión de miRNA-489. Se encontraron conducto de la glándula mamaria y las células epiteliales de expresar significativamente más altos miARN-489 niveles que el tejido adyacente tumor en dos pacientes (Figura 1A y 1B). Esto demuestra claramente que la expresión de miRNA-489 se ha perdido en el tejido tumoral, lo que sugiere una actividad supresora de tumores de miARN-489. Para confirmar a.......
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Discusión
El objetivo de este estudio fue determinar el nivel de expresión de los genes miARN en los tejidos de cáncer de mama utilizando miARN hibridación in situ. Hay que señalar que en este experimento, todas las condiciones se optimizaron para el tejido de cáncer de mama. Una optimización adicional puede ser necesario para otros tipos de tejidos. Todas las soluciones deben hacerse con agua DEPC y todos los contenedores que se utilicen deben ser enjuagados con agua tratada con DEPC y posteriormente en autoclave. Inclu.......
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Divulgaciones
No hay nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la beca NIH (5R01 CA178386-03) y la subvención USC ASPIRE-1 a HC. Nos gustaría agradecer a Vrushab Gowda por su ayuda con el manuscrito.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tecnología de vida ELF-97 | E6604 | ||
| 50x Denhard't | Tecnología de la vida | ||
| ARNt | Roche | 109541 | Reconstituir en agua DEPC |
| Arenque Esperma ADN | Promega | D1815 | |
| Roche Bloqueo | Roche | 11096176001 | |
| RVC | Fisher | 50-812-650 | Antes de usarlo, gírelo a 16.1 RCF y tome sobrenadante |
| Sonda miR-489 | Exiqon | 38599-01 | |
| Libre de nucleasa BSA | Roche | ||
| Anticuerpo primario-anti DIG | Roche | ||
| Pirocarbonato de dietilo | Sigma | 1609478 |
Referencias
- Shah, N. R., Chen, H. MicroRNAs in pathogenesis of breast cancer: Implications in diagnosis and treatment. World J Clin Oncol. 5, 48-60 (2014).
- Tang, H., et al. miR-185 sup....
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Reimpresiones y permisos
