Las herramientas utilizadas para visualizar la regeneración vascular requieren métodos para contrastar los árboles vasculares. Esta película demostró una delicada técnica de inyección utilizada para lograr un contraste óptimo de los árboles vasculares e ilustra los beneficios potenciales resultantes de un análisis detallado de la muestra resultante utilizando μCT y secciones histológicas seriadas.
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Artículo de método
La visualización del parénquima vascular y la regeneración después del 70% hepatectomía parcial en ratones normales
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Resumen
Resumen
Un procedimiento de inyección de silicona modificado se utiliza para la visualización del árbol vascular hepática. Este procedimiento consistía en la inyección in vivo del compuesto de silicona, a través de un catéter 26 G, en el portal o vena hepática. Después de la inyección de silicona, los órganos fueron explantados y se prepararon para micro-TC ex-vivo (μCT). El procedimiento de inyección de silicona es un desafío técnico. El logro de un resultado exitoso requiere una amplia experiencia microquirúrgica del cirujano. Uno de los retos de este procedimiento consiste en la determinación de la tasa de perfusión adecuada para el compuesto de silicona. La tasa de perfusión para el compuesto de silicona tiene que ser definido en base a la hemodinámica del sistema vascular de interés. tasa de perfusión inadecuada puede dar lugar a una perfusión incompleta, la dilatación artificial y rotura de árboles vasculares.
La reconstrucción 3D del sistema vascular se basa en la TC y se logró utilizandosoftware preclínica como HepaVision. La calidad del árbol vascular reconstruida estaba directamente relacionada con la calidad de la perfusión de silicona. Posteriormente parámetros vasculares calculadas indicativas de crecimiento vascular, como el volumen vascular total, se calculan en base a las reconstrucciones vasculares. Contrastando el árbol vascular con silicona permitido para la posterior elaboración histológico de la muestra después de μCT de exploración. El espécimen se pueden someter a seccionamiento en serie, el análisis histológico y el escaneo de diapositivas conjunto, y, posteriormente, a la reconstrucción 3D de los árboles vasculares a partir de imágenes histológicas. Este es el requisito previo para la detección de eventos moleculares y su distribución con respecto al árbol vascular. Este procedimiento de inyección de silicona modificada también se puede utilizar para visualizar y reconstruir los sistemas vasculares de otros órganos. Esta técnica tiene el potencial de ser aplicado ampliamente para estudios en relación con la anatomía vascular y crecimiento en varios animales unamodelos de enfermedad de Newcastle.
Introducción
La regeneración hepática es a menudo determinado midiendo el aumento de peso del hígado y el volumen y mediante la evaluación de la tasa de proliferación de hepatocitos 16. Sin embargo, la regeneración del hígado no sólo es la inducción de la regeneración del parénquima sino también la regeneración vascular 6. Por lo tanto, el crecimiento vascular debe investigarse más con respecto a su papel en la progresión de la regeneración del hígado. Visualización del sistema vascular hepática es fundamental para avanzar en nuestra comprensión de la regeneración vascular. Numerosos métodos indirectos se han desarrollado para estudiar los mecanismos molecul....
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Protocolo
Los procedimientos que implican sujetos animales han sido aprobados por la Selva de Landesamt für Verbraucherschutz Abteilung und Tiergesundheit Tierschutz, Alemania. Debido a que el sistema venoso portal se visualizó por separado del sistema venoso hepático, se necesitan animales separados para los diferentes árboles vasculares.
1. Reactivos Preparación
- solución de heparina-solución salina
- Añadir 0,1 ml de heparina en 10 ml solución salina (5 UI / ml).
- mezcla de compuesto de silicona
- Añadir 2 ml MV-120 en un tubo de 5 ml. Diluir MV-120 mediante la adición de 3 ml de diluyente MV resultante....
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Resultados
Criterios de calidad
La calidad de la inyección de silicona puede ser juzgado a simple vista durante el procedimiento. Los pequeños vasos en la superficie del hígado llenan gradualmente con el compuesto azul. Si se observa la estructura vascular normal en la superficie del hígado, la calidad de la inyección de caucho de silicona era bueno. Si el volumen de perfusión fue insuficiente, los pequeños vasos en la s.......
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Discusión
Contrastando el árbol vascular mediante la inyección de silicona y de exploración μCT se ha introducido en modelos de tumores y modelos de enfermedades neurológicas con frecuencia para estudiar la progresión angiogénico 5,7,8,10. Las mejoras en la metodología de la inyección de silicona se hicieron en el presente estudio para visualizar y cuantificar el crecimiento vascular después de la hepatectomía parcial en ratones.
Hay una serie de pasos críticos que requieren atención para l.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Los autores agradecen la financiación del Ministerio de Educación e Investigación de Alemania (BMBF) a través de la red de biología de sistemas "Virtual Liver", los números de subvención 0315743 (ExMI), 0315765 (Reino Unido, Jena), 0315769 (MEVIS). Los autores también agradecen a Frank Schubert por su apoyo técnico.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| PERFUSOR® VI | B.BRAUN | 87 222/0 | |
| Pipetus®-akku | Hirschmann | 9907200 | |
| Pipets | Greiner | 606180 | |
| micro tijeras | Fine Science Tools (F· S· L) | No. 14058-09 | |
| micro serrefine | Fine Science Tools (F· S· L) | No.18055-05 | |
| Micro abrazaderas aplicador Fine | Science Tools (F & middot; S· L) | No. 18057-14 | |
| Micro pinzas rectas | Fine Science Tools (F· S· L) | No. 00632-11 | |
| Micro pinzas curvas | Fine Science Tools (F· S· L) | Nº 00649-11 | |
| portaagujas | Fine Science Tools (F· S· L) | Nº 12061-01 | |
| Jeringa de 1 ml | B.Braun | 9161406V | |
| Jeringa de 5 ml | B.Braun | 4606051V | |
| extensión y conexión | B.Braun | 4256000 | 30 cm, interior ø 1,2 mm |
| 6-0 seda (Perma-Hand Seide) | Ethicon | 639H | |
| 6-0 prolene | Ethicon | 8711H | |
| Microfil® diluyente MV | FLOW TECH, INC | ||
| Microfil® MV - 120 | FLOW TECH, INC | MV - 120 (azul) | |
| MV agente de curado | FLOW TECH, INC | ||
| Heparina 2500 I.E./5 ml | Rotexmedica | ETI3L318-15 | |
| Salina | Fresenius Kabi Deutschland GmbH | E15117/D DE | |
| Aquisgrán, Alemania | |||
| HepaVision | Fraunhofer MEVIS, Bremen, Alemania | ||
| NanoZoomer 2.0-HT Escáner digital de diapositivas | Hamamatsu Electronic Press, Japón | Tomoscopio C9600 | |
| Duo CT | CT Imaging GmbH, Erlangen, Alemania | TomoScope® Sinergia |
Referencias
- Bearden, S. E., Segal, S. S. Neurovascular alignment in adult mouse skeletal muscles. Microcirculation. 12 (2), 161-167 (2005).
- Brown, R. P., Delp, M. D., Lindstedt, S. L., Rhomberg, L. R., Beliles, R. P. Physiological parameter values for physiologically based pharmacokin....
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Reimpresiones y permisos
