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Immunology and Infection

गर्मी की रोकथाम से चूहे में प्रतिकूल प्रभाव तनाव Published: July 11, 2016 doi: 10.3791/54122
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Anatomy, Physiology and Pharmacology, Auburn University

Abstract

इस अध्ययन में तनाव गर्मी से संबंधित जटिलताओं के खिलाफ बेसिलस subtilis तनाव के सुरक्षात्मक प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए डिजाइन किया गया था। बत्तीस Sprague-Dawley चूहों इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया। पशु मौखिक रूप से दो बार बी के साथ दो दिनों के लिए एक दिन के लिए इलाज किया गया subtilis BSB3 तनाव या पीबीएस। अगले दिन पिछले उपचार के बाद, प्रत्येक समूह विभाजित किया गया था और दो ​​प्रयोगात्मक समूहों (एक पीबीएस के साथ इलाज किया गया और एक बी subtilis के साथ इलाज) 25 मिनट के लिए 45 ओ सी में रखा गया था। दो नियंत्रण समूहों कमरे के तापमान पर 25 मिनट के लिए रुके थे। सभी चूहों euthanized थे और विभिन्न मापदंडों के सभी समूहों में विश्लेषण किया गया। गर्मी तनाव के प्रतिकूल प्रभाव विल्ली ऊंचाई और आंतों उपकला में कुल श्लैष्मिक मोटाई की कमी से पंजीकृत हैं; लुमेन से बैक्टीरिया के translocation; बढ़ी हुई lipopolysaccharides की एरिथ्रोसाइट्स की vesiculation और ऊंचाई (एलपीएस) रक्त में स्तर। उपचार के सुरक्षात्मक प्रभावकारिता पूर्व द्वारा मूल्यांकन किया हैइन दुष्प्रभावों के vention। प्रोटोकॉल गर्मी तनाव जटिलताओं की रोकथाम के लिए बैक्टीरिया के साथ चूहों के मौखिक उपचार के लिए स्थापित किया गया था, लेकिन इस प्रोटोकॉल संशोधित और प्रशासन के अन्य मार्गों के लिए और विभिन्न यौगिकों के विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

Protocol

सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं ऑबर्न विश्वविद्यालय के IACUC, कपिश, अलबामा द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. संस्कृति, मीडिया, बर्तन और जीवाणु संस्कृति की तैयारी

  1. बेसिलस subtilis BSB3 संस्कृति का एक भी कॉलोनी, एक पोषक तत्व अगर प्लेट पर रातोंरात बड़े के साथ एक फ्लास्क में पोषक तत्व शोरबा के 10 मिलीलीटर टीका लगाना।
  2. Sporulation मध्यम 19 (प्रति लीटर की 500 मिलीलीटर बनाओ: Bacto पोषक शोरबा, 8 ग्राम, 10% (w / v) KCl, 10 मिलीलीटर, 1.2% (w / v) MgSO 4 एक्स 7H 2 हे, 10 मिलीलीटर; अग्रवाल, 15 ग्राम) और 20 मिनट के लिए 121 ओ सी में आटोक्लेव। 50 ओ सी को शांत और निम्न बाँझ समाधान जोड़ने की अनुमति दें: 1 एम सीए (NO 3) 2, 1 मिलीलीटर; 0.01 एम MnCl 2, 1 मिलीलीटर; 1 मिमी 4, 1 मिलीलीटर FeSO।
  3. कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए 40 ओ सी के लिए कूल तैयार मध्यम और 20 बाँझ कैबिनेट में बाँझ पेट्री डिश में से प्रत्येक में 25 मिलीलीटर डालना। मध्यम रात भर जमना।
  4. बी की रात संस्कृति के 0.5 मिलीलीटर बिखराacillus subtilis BSB3 पेट्री डिश में मध्यम की सतह पर। 90% तक sporulation 5 दिनों के लिए 37 ओ सी में संस्कृति सेते हैं। उच्च संकल्प माइक्रोस्कोपी द्वारा चरण उज्ज्वल बीजाणुओं पता चलता है।
  5. थाली करने के लिए बाँझ फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के 1 मिलीलीटर जोड़ने और एक बाँझ सेल स्प्रेडर का उपयोग कर एक सतह से बैक्टीरिया scraping द्वारा हार्वेस्ट बैक्टीरिया। फ्रिज में स्टोर जब तक निलंबन की जरूरत है।
  6. 37 ओ सी पर 24 घंटा - sporulation मध्यम प्लेटों पर एक जीवाणु निलंबन की उचित कमजोर पड़ने (10 -5 10 -6 के लिए) के लिए 18 ऊष्मायन द्वारा पीछा के 0.1 मिलीलीटर चढ़ाना द्वारा बैक्टीरिया की व्यवहार्यता की पुष्टि
  7. एक कॉलोनी काउंटर का उपयोग प्लेटों पर जीवाणु कॉलोनियों गणना की और परीक्षण निलंबन में बैक्टीरिया की अनुमापांक गणना। अंतिम एकाग्रता 1 एक्स 10 8 CFU / पीबीएस में मिलीलीटर के साथ जीवाणु निलंबन तैयार करें।

2. पशु

  1. 300 ग्राम - 32 पुरुष Sprague-Dawley चूहों (250 उपयोग)। मानक गोली चाउ और पानी के लिए स्वतंत्र पहुँच के साथ विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त शर्तों के तहत जानवरों को बनाए रखें। एक औसत तापमान (21 ± 1 ओ सी), आर्द्रता (50 ± 5%) और एक 12 घंटा प्रकाश अंधेरे चक्र स्थापित करना।

3. प्रायोगिक डिजाइन

  1. मौखिक gavage 11 से पशुओं का उपचार शुरू अभ्यस्त के 2 दिनों के बाद। मौखिक gavage सुई के साथ सिरिंज का प्रयोग करें। बी के साथ 16 चूहों को समझो subtilis BSB3 निलंबन (चूहा प्रति 1 मिलीलीटर) में दो बार दो दिनों के लिए एक दिन (बी subtilis समूह)। पीबीएस के साथ 16 चूहों (चूहा प्रति 1 मिलीलीटर) दो दिन (पीबीएस समूह) (चित्रा 1) के लिए दिन में दो बार समझो।
  2. समूह 1- नियंत्रण (पीबीएस / कोई तनाव), ग्रुप बी 2: उपचार के बाद, प्रत्येक समूह (समूह प्रति 8 चूहों) प्रतिभाग subtilis (बी subtilis / कोई तनाव), समूह 3 तनाव (पीबीएस / गर्मी तनाव) और ग्रुप बी 4 subtilis + तनाव (बी subtilis / गर्मी तनाव)।
  3. उपाय प्रत्येक चूहे की गुदा तापमान एक चुनाव का उपयोग करडिजिटल थर्मामीटर इलेक्ट्रॉनिक। 25 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर समूह 1 और 2 के चूहों रखें। 45 ओ सी में 3 और 4 समूहों को एक जलवायु चैम्बर में और सापेक्ष आर्द्रता 25 मिनट के लिए 55% की जगह जानवरों।
  4. बाद में, एक इलेक्ट्रॉनिक डिजिटल थर्मामीटर का उपयोग सभी समूहों में प्रत्येक चूहे की गुदा तापमान को मापने। कमरे के तापमान पर सभी जानवरों को 4 घंटे के लिए रखें।
  5. एक sealable संज्ञाहरण जार में - (4% 2) और निरीक्षण जब तक चूहों गहरा (पैर की अंगुली चुटकी के जवाब के अभाव) anesthetized हैं isoflurane के साथ चूहों anesthetize। एक गिलोटिन के साथ तेजी से कत्ल द्वारा चूहों euthanize।
  6. सीरम प्राप्त करने और तुरंत (प्रत्येक चूहे से 7 μl) सूक्ष्म परीक्षण के लिए एक विंदुक के साथ रक्त के नमूने लेने के लिए - (16 मिलीलीटर 15) apyrogenic ट्यूबों में apyrogenic pipettes के साथ प्रत्येक चूहा 20 से ट्रंक खून ले लीजिए।
  7. कम से कम 30 मिनट के लिए एक रेफ्रिजरेटर में रक्त के साथ ट्यूब रखो थक्के की अनुमति है। 20 ओ सी पर अपकेंद्रित्र ट्यूब, 7000 10 मिनट के लिए और जल्दी से XGएक विंदुक के साथ सीरम को हटा दें। अशेष सीरम परख जब तक -20 ओ सी में 50 μl खंडों में प्रत्येक चूहे और दुकान से प्राप्त की।

4. सर्जिकल प्रक्रिया

  1. कट / पेट और बिजली कैंची के साथ शव के नीचे की छाती से सभी फर ट्रिम। एक बाँझ कैबिनेट में शव की जगह और 70% शराब के साथ शव की मुंडा सतह का इलाज।
  2. पेट के एक midline चीरा बनाने के लिए एक बाँझ छुरी का प्रयोग करें। प्रत्येक चूहे बाँझ चिमटी का उपयोग करने से जिगर, mesenteric लिम्फ नोड्स, प्लीहा और छोटी आंत निकालें।

5. बैक्टीरियल स्थानान्तरण के विश्लेषण

  1. जिगर, mesenteric लिम्फ नोड्स और तिल्ली के प्रत्येक नमूना पूर्व तौला बाँझ ट्यूबों में रखें और वजन। एक नमूने के साथ एक ट्यूब के वजन और एक खाली ट्यूब के वजन के बीच एक अंतर के रूप में नमूने के वजन की गणना।
  2. ट्यूब के लिए बाँझ पीबीएस जोड़ें 1:10 कमजोर पड़ने प्राप्त करने के लिए (डब्ल्यू / वी) का नमूना और homogeएक बाँझ कांच ऊतक homogenizer के साथ प्रत्येक नमूना Nize एक सजातीय निलंबन 21 प्राप्त करने के लिए।
  3. बाँझ पीबीएस में प्रत्येक नमूने की धारावाहिक dilutions (10 -1 10 -4 के लिए) बनाओ। प्लेट Hemin (0.005 जी / एल) और विटामिन K1 (0.01 छ / एल) प्लेटों के साथ MacConkey के सतह और 5% रक्त अगर और ब्रूसिला रक्त अगर पर प्रत्येक ऊतक के सभी dilutions की 0.1 मिलीलीटर।
  4. 37 ओ सी 22 पर MacConkey के और 5% रक्त अगर प्लेटों aerobically और ब्रूसिला रक्त अगर प्लेटों अवायवीय स्थितियों के तहत सेते हैं।
  5. 24 घंटे के बाद एरोबिक बैक्टीरिया की कालोनियों गणना, और बाद में एक कॉलोनी काउंटर का उपयोग ऊष्मायन के 48 घंटा anaerobic बैक्टीरिया की कालोनियों। ऊतक के एक ग्राम में कॉलोनी के गठन इकाइयों (CFU) की संख्या के रूप में परिणाम व्यक्त करते हैं।

6. histological विश्लेषण

  1. शल्य प्रक्रिया द्वारा प्रत्येक चूहे से छोटी आंत नमूने निकालें (4.1 कदम - 4.2)। आयल में एम्बेड Bouin लगानेवाला में नमूने, ठीक है,hematoxylin और eosin मानक प्रक्रियाओं 23 उपयोग करने के साथ 6 माइक्रोन वर्गों और दाग वर्गों तैयार करते हैं।
  2. प्रत्येक नमूना (बढ़ाई 100x) 24 में आंतों विल्ली और कुल श्लैष्मिक मोटाई की ऊंचाई मापने के लिए एक उच्च संकल्प माइक्रोस्कोप प्रणाली का प्रयोग करें। प्रत्येक चूहे से 4 नमूनों का विश्लेषण और प्रत्येक नमूने में कम से कम बीस माप करना। एक्सप्रेस माइक्रोमीटर में परिणाम है।

7. साइटोकाइन परख

  1. आईएल 1β के लिए वाणिज्यिक चूहे एलिसा किट का उपयोग करें; आईएल -6; TNF-α; INF-γ, और आईएल -10 निर्माता प्रोटोकॉल के अनुसार सीरम में साइटोकिन्स के स्तर को मापने के लिए।
  2. प्रासंगिक किट के लिए मानकों का प्रयोग यत्न नमूने के प्रत्येक सेट के लिए मानक घटता उत्पन्न करता है। उचित मानक की अवस्था के साथ प्रयोगात्मक डेटा की तुलना द्वारा प्रत्येक नमूने में साइटोकिन्स के स्तर को परिभाषित करें।

8. lipopolysaccharide परख

  1. के अनुसार एक चूहे LPS एलिसा किट का उपयोग सीरम में LPS के स्तर का विश्लेषणनिर्माता प्रोटोकॉल। मानक वक्र के मूल्यों के साथ प्राप्त मूल्यों की तुलना द्वारा नमूनों में एलपीएस की एकाग्रता का अनुमान है।

9. उच्च संकल्प प्रकाश रक्त की माइक्रोस्कोपी

  1. माइक्रोस्कोप प्रणाली पहले से 25,26 वर्णित का प्रयोग करें। माइक्रोस्कोप प्रणाली के लिए एक आधार है और वीडियो कैमरा और कंप्यूटर 25 के रूप में एक कंपन अलगाव मंच का प्रयोग जीना छवियों रिकॉर्ड करने के लिए। एक रिचर्डसन स्लाइड का उपयोग कर के रूप में पहले 27 में वर्णित परीक्षण छवियों जांचना।
  2. एक गिलास स्लाइड, coverslip, तस्वीर पर प्रत्येक चूहे से हौसले से तैयार खून के 7 μl रखें और प्रत्येक नमूना (बढ़ाई 1,700X) में 72 × 53.3 माइक्रोन 2 के दस छवि फ्रेम रिकॉर्ड है।
  3. सॉफ्टवेयर है जो वास्तविक समय में उच्च संकल्प प्रत्यक्ष-दृश्य ऑप्टिकल चित्र प्रदान करता है का उपयोग कर पुटिकाओं की एकाग्रता को मापने। प्रत्येक प्रयोगात्मक हालत 28 के लिए 20 छवि फ्रेम की एक न्यूनतम जांच करते हैं।

10 आंकड़ेtics

  1. मतलब है और मानक विचलन के रूप में सभी मूल्यों को व्यक्त करते हैं। सांख्यिकीय विश्लेषण और ग्राफ की साजिश रचने का प्रदर्शन। दो नमूने टी परीक्षण के साथ परिणामों का विश्लेषण, सांख्यिकीय महत्व को परिभाषित करने के लिए 0.05 पर महत्व स्तर सेट।

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Representative Results

गर्मी तनाव के बाद पहले और तुरंत जानवरों का मतलब शरीर का तापमान 36.7 ± 0.07 ओ सी और 40.3 ± 0.17 ओ सी, क्रमशः (पी <0.05) था। गर्मी (समूह 3) के लिए चूहों का एक्सपोजर विल्ली ऊंचाई के महत्वपूर्ण निषेध और कुल श्लैष्मिक मोटाई में हुई (आंकड़े 2, 3)। BSB3 तनाव की मौखिक प्रशासन से पहले गर्मी के हानिकारक प्रभाव से तनाव की रक्षा की आंत।

पेट से बैक्टीरिया के translocation mesenteric लिम्फ नोड्स के जीवाणु विश्लेषण (मिलियन), जिगर और तिल्ली प्रत्येक चूहे के द्वारा निर्धारित किया गया था। 1.7 x 10 3 ± 4.6 x 10 2 CFU / छ ऊतक (चित्रा 4) के एक एकाग्रता में बैक्टीरियल संस्कृतियों MLN से ही अलग थे और चूहों के यकृत पीबीएस के साथ पूर्व इलाज और गर्मी से अवगत कराया (समूह) 3। नियंत्रण चूहों से सभी परीक्षण के नमूने (समूह 1, 2) और गर्मी जोर दिया जानवरों सेएक BSB3 तनाव (समूह 4) बाँझ थे प्राप्त किया। कोई बैक्टीरिया तिल्ली के नमूने से अलग थे।

आईएल 1β का कोई परिवर्तन नहीं; आईएल -6, TNF-α, inf-Γ साइटोकिन्स स्तरों गर्मी जोर दिया चूहों में दर्ज किए गए थे। आईएल -10 और LPS स्तर की गर्मी जोखिम महत्वपूर्ण ऊंचाई से पहले पीबीएस के साथ इलाज जानवरों के सीरम में पाया गया था (समूह 3) - (आंकड़े 5, 6)। बी के साथ पूर्व उपचार subtilis BSB3 (समूह 4) गर्मी जोर दिया पशुओं के सीरम में आईएल -10 और LPS के उदय को रोका।

(पी <0.001) से (1.4 ± 0.2) मुक्त पुटिकाओं एकाग्रता की एक उल्लेखनीय वृद्धि × 10 6 (3.8 ± 0.3) के लिए μl -1 10 6 पुटिकाओं × चूहों के रक्त कि गर्मी तनाव से पहले पीबीएस प्राप्त में पाया गया था (आंकड़े 7 8)। BSB3 साथ pretreated जानवरों का एक समूह में मुक्त पुटिकाओं की संख्या में कोई परिवर्तन नहीं मिला था पिछाड़ीएर गर्मी जोखिम (चित्रा 7)।

आकृति 1
चित्रा 1. अध्ययन डिजाइन। चूहों के दो समूहों (प्रत्येक समूह में 16 चूहों) बी के साथ मौखिक gavage द्वारा इलाज किया गया subtilis BSB3 (बी subtilis समूह) या पीबीएस के साथ (पीबीएस समूह) में दो बार एक दिन। 3 दिन प्रत्येक समूह के प्रत्येक समूह में 8 चूहों द्वारा विभाजित किया गया था। समूह 3 और 4 से चूहों 25 मिनट के लिए 45 ओ सी में रखा गया था। नियंत्रण जानवरों (समूह 1 और 2) कमरे के तापमान पर रखा गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2 की आंतों Villi ऊँचाई (ए) और चूहों में श्लैष्मिक मोटाई (बी) के मापन। चूहे पीबीएस या के साथ पूर्व इलाजबी subtilis BSB3 45 ओ सी (तनाव) या कमरे के तापमान पर (नियंत्रण) से अवगत कराया गया। प्रत्येक समूह 8 चूहों शामिल थे। प्रत्येक नमूने में प्रत्येक पैरामीटर के बीस माप ले जाया गया। मूल्यों मतलब है और मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। परिणाम महत्व स्तर 0.05 पर दो नमूने टी परीक्षण सांख्यिकीय महत्व को परिभाषित करने के साथ विश्लेषण किया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
Hematoxylin और eosin। चूहे के साथ आंत्र mucosa दाग चित्रा 3. ऊतकीय छवियाँ पीबीएस या बी के साथ पहले से इलाज किया गया subtilis BSB3 और 45 ओ सी (तनाव) या कमरे के तापमान पर (नियंत्रण) के संपर्क में ए पीबीएस / कोई तनाव;। बी पीबीएस / गर्मी तनाव, सी। बी subtilis / कोई तनाव, डी बी subtilis / गर्मी तनाव। विल्ली ऊंचाई तीर द्वारा संकेत दिया है। बार 200 माइक्रोन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4. कुल चूहे के ऊतकों में जीवाणुओं की संख्या। चूहे पीबीएस या बी के साथ पूर्व इलाज subtilis BSB3 45 ओ सी (तनाव) या कमरे के तापमान पर (नियंत्रण) से अवगत कराया गया। प्रत्येक समूह 8 चूहों शामिल थे। Mesenteric लिम्फ नोड्स, जिगर, तिल्ली और aseptically प्रत्येक चूहे, homogenized से हटा दिया है और एरोबिक और anaerobic बैक्टीरिया ठीक करने के लिए अगर मीडिया पर चढ़ाया गया था। translocated बैक्टीरिया (एरोबिक और anaerobic) की कुल गिनती ऊतक के ग्राम प्रति कॉलोनी के गठन इकाइयों (CFU) के रूप में प्रस्तुत किया है। मूल्यों के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं मतलब है और मानक विचलन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चूहे के सीरम में आईएल -10 की चित्रा 5. स्तर। चूहे पीबीएस या बी के साथ पूर्व इलाज subtilis BSB3 45 ओ सी (तनाव) या कमरे के तापमान पर (नियंत्रण) से अवगत कराया गया। प्रत्येक समूह 8 चूहों शामिल थे। रक्त सीरम प्रत्येक चूहे से प्राप्त की और एक व्यावसायिक चूहे एलिसा किट के साथ विश्लेषण किया गया था। मूल्यों मतलब है और मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। परिणाम महत्व स्तर 0.05 पर दो नमूने टी परीक्षण सांख्यिकीय महत्व को परिभाषित करने के साथ विश्लेषण किया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तम्बू "fo: रख-together.within-पेज =" 1 "> चित्रा 6
चित्रा 6 LPS चूहे के सीरम में एकाग्रता। चूहे पीबीएस या बी के साथ पूर्व इलाज subtilis BSB3 45 ओ सी (तनाव) या कमरे के तापमान पर (नियंत्रण) से अवगत कराया गया। प्रत्येक समूह 8 चूहों शामिल थे। रक्त सीरम प्रत्येक चूहे से प्राप्त की और एक व्यावसायिक चूहे एलिसा किट के साथ विश्लेषण किया गया था। मूल्यों मतलब है और मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। परिणाम महत्व स्तर 0.05 पर दो नमूने टी परीक्षण सांख्यिकीय महत्व को परिभाषित करने के साथ विश्लेषण किया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 7
चित्रा 7. vesicles की संख्या चूहों के रक्त में। चूहे पूर्व इलाजपीबीएस या बी के साथ subtilis BSB3 45 ओ सी (तनाव) या कमरे के तापमान पर (नियंत्रण) से अवगत कराया गया। हौसले से तैयार की खून की एक छोटी छोटी बूंद (7 μl) प्रत्येक नमूना (बढ़ाई 1,700X) में एक गिलास स्लाइड पर रखा गया था, coverslipped, फोटो खिंचवाने और दर्ज की गई दस छवि फ्रेम। पुटिकाओं की एकाग्रता सॉफ्टवेयर है जो वास्तविक समय में उच्च संकल्प प्रत्यक्ष-दृश्य ऑप्टिकल चित्र प्रदान करता है का उपयोग कर मापा गया था। बीस छवि फ्रेम प्रत्येक प्रयोगात्मक हालत के लिए जांच की गई। मूल्यों मतलब है और मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। परिणाम महत्व स्तर 0.05 पर दो नमूने टी परीक्षण सांख्यिकीय महत्व को परिभाषित करने के साथ विश्लेषण किया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

आंकड़ा 8
8 चित्रा Ve के बढ़ाएँरक्त में sicles एकाग्रता गर्मी तनाव के बाद। कमरे के तापमान (ए) या ​​45 ओ सी (बी) के लिए करने के लिए जोखिम से पहले पीबीएस के साथ pretreated चूहों के रक्त का वीडियो छवि। हौसले से तैयार की खून की एक छोटी छोटी बूंद (7 μl) प्रत्येक नमूना (बढ़ाई 1,700X) में एक गिलास स्लाइड पर रखा गया था, coverslipped, फोटो खिंचवाने और दर्ज की गई दस छवि फ्रेम। पुटिका वी बार 6 माइक्रोन के रूप में संकेत दिया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

गंभीर स्वास्थ्य की स्थिति 29 में उच्च तापमान के परिणाम के लिए एक्सपोजर। रोकथाम और गर्मी तनाव से संबंधित जटिलताओं का जल्दी पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण महत्व 30 के हैं। प्रस्तुत प्रोटोकॉल गर्मी तनाव प्रतिकूल प्रभाव की रोकथाम के लिए विभिन्न तरीकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

इस प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम शामिल हैं: गर्मी उपचार प्रक्रिया (45 ओ सी, 25 मिनट); संग्रह और enterotoxins साथ प्रदूषण को रोकने के लिए रक्त के प्रसंस्करण के दौरान apyrogenic सामग्री का उपयोग; -20 ओ सी में सीरम aliquots रखते हुए दोहराया ठंड और विगलन से बचने के लिए; और बैक्टीरियल स्थानान्तरण के विश्लेषण के दौरान बाँझ प्रक्रिया के बाद। प्रोटोकॉल गर्मी तनाव साइड इफेक्ट की रोकथाम के लिए बैक्टीरिया के साथ चूहों के मौखिक उपचार के लिए स्थापित किया गया था। प्रशासन और अन्य यौगिकों के अन्य मार्गों के लिए, इस प्रोटोकॉल को संशोधित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, टीआर का समयगर्मी से पहले तनाव eatment बढ़ाया जा सकता है। मौखिक प्रशासन मलाशय प्रशासन को बदला जा सकता है। बेसिलस subtilis जीवाणु ऊंचा तापमान के लिए जोखिम से पहले जानवरों के मौखिक उपचार से गर्मी तनाव जटिलताओं की रोकथाम के लिए इस्तेमाल किया गया। क्रम में गर्मी तनाव की जटिलताओं का इलाज करने के लिए, इस प्रोटोकॉल गर्मी से संपर्क के बाद पशुओं के उपचार के लिए बैक्टीरिया के प्रयोग के द्वारा संशोधित किया जा सकता है।

यह दिखाया गया था कि शरीर के तापमान की ऊंचाई एरिथ्रोसाइट vesiculation की वृद्धि के कारण होता है, और यह पूरी तरह से बी के साथ पूर्व उपचार से रोका गया था subtilis बैक्टीरिया। इस प्रकार, गर्मी के प्रदर्शन के दौरान रक्त में पुटिकाओं एकाग्रता की वृद्धि गर्मी तनाव के स्तर से संकेत मिलता है और एरिथ्रोसाइट्स की स्थिरता और गर्मी के लिए उनके प्रतिरोध के लिए नैदानिक ​​सबूत उपलब्ध कराता सकता है। यह भी मूल्यांकन गर्मी तनाव जटिलताओं के खिलाफ निवारक उपचार की प्रभावकारिता के लिए एक बहुत ही उपयोगी और तेजी से परीक्षण है। प्रेरण ओएफ गर्मी तनाव का एक मार्कर के रूप में गर्मी झटका प्रोटीन पहले 30 चर्चा की गई थी, लेकिन इस दृष्टिकोण समय लेने वाली है और तनाव को गर्म करने के लिए प्रतिक्रिया की वास्तविक समय निदान के लिए इस्तेमाल नहीं किया जा सकता।

गर्मी तनाव प्रतिकूल प्रभाव की रोकथाम के लिए प्रस्तुत दृष्टिकोण सरल, लागत प्रभावी है और अतिरिक्त उपकरण या विशेष सुविधाओं की आवश्यकता नहीं है। इस काम के भविष्य आवेदन गर्मी तनाव जटिलताओं के खिलाफ संरक्षण के तंत्र इस संरक्षण के लिए नई प्रक्रिया को समझने और को चिह्नित करने में मदद मिलेगी। लोग हैं कि तीव्र आउटडोर शारीरिक गतिविधि 29 के दौरान हीट स्ट्रोक के लिए खतरा हैं के समूहों - इस विधि सड़क श्रमिकों, सैन्य कर्मियों, एथलीटों के लिए महत्व का है। प्रस्तावित दृष्टिकोण एक गर्मी तनाव के स्तर की जांच करने के लिए और चरम स्थितियों में काम कर रहे लोगों के स्वास्थ्य की रक्षा करने के लिए विभिन्न तरीकों का मूल्यांकन करने के लिए अनुमति देता है।

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Disclosures

लेखकों घोषणा की कि वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, St. Louis, MO P4417
Ethyl Alcohol  Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA  64-17-5
Agar VWR 97064-334
MacConkey agar plates VWR 470180-742
5% blood agar plates VWR 89405-024
Brucella blood agar plate with Hemin, and Vitamin K VWR 89405-032
Bouin’s Fixative Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA 15990
IL-10 Rat ELISA kit Invitrogen, Camarillo, CA, USA KRC0101
IL-1beta Rat ELISA Kit Invitrogen, Camarillo, CA, USA KRC0011
IL-6 Rat ELISA Kit Invitrogen, Camarillo, CA, USA KRC0061
INF-gamma Rat ELISA Kit Invitrogen, Camarillo, CA, USA KRC4021
TNF-alpha Rat ELISA Kit Invitrogen, Camarillo, CA, USA KRC3011
Rat LPS ELISA Kit NeoBioLab, MA, USA RL0275
Environmental Chamber 6020-1 Caron, Marietta, OH, USA 6020-1
Centrifuge  Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA Optima L-90K
Ultra Centrifuge
Light microscope optical system CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Colony counter Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA RE-3325
Freezer Haier, Brooklyn, NY, USA HCMO50LA
Ultra microplate reader Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA ELx 808
Auto Strip Washer Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA ELx50
Pipettes Gilson, Pipetman, France P100, P200, P1000
C24 Incubator Shaker New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA Classic C24
Rocking Shaker  Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA 55
Petri dishes Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA 875713 100 mm x 15 mm
SterilGard III Advance The Baker Company, Sanford, ME, USA SG403
Culture Growing Flasks Corning Incorporated, Corning, NY, USA 4995 PYREX 250 ml Erlenmeyer flasks
Optical Spectrometer Genesys 20 Thermo Scientific, Waltham, MA, USA. 4001
Sony DXC-33 Video camera Sony
Richardson test slide Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA 80303
Millipore water purification system Millipore Direct-Q
Image-Pro Plus software Media Cybernetics, MD, USA
Triple Beam Balance OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA
Tissue Homogenizer, Dounce VWR 71000-518

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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इम्यूनोलॉजी अंक 113, गर्मी तनाव पेट microbiota प्रोबायोटिक्स एरिथ्रोसाइट vesiculation बैक्टीरिया की translocation lipopolysaccharides
गर्मी की रोकथाम से चूहे में प्रतिकूल प्रभाव तनाव<em&gt; बेसिलस subtilis</em&gt; तनाव
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Sorokulova, I., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain. J. Vis. Exp. (113), e54122, doi:10.3791/54122 (2016).

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