La inducción quirúrgica de la isquemia de las extremidades posteriores en el ratón es útil para examinar la angiogénesis, sin embargo, esto se ve comprometido en ciertas cepas endogámicas de ratón que muestran una marcada necrosis tisular inducida por la isquemia. Se describen métodos para inducir isquemia subaguda de las extremidades utilizando constrictores ameroides, para eludir este problema mediante la inducción de una oclusión arterial gradual.
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Artículo de método
Los métodos para aguda y subaguda murino de isquemia del miembro posterior
En este artículo
Resumen
Resumen
La enfermedad arterial periférica (PAD) es una causa importante de morbilidad y mortalidad cardiovascular en los países desarrollados, y modelos animales que se reproducen de forma fiable la enfermedad humana son necesarias para desarrollar nuevas terapias para esta enfermedad. El modelo de extremidad posterior del ratón isquemia ha sido ampliamente utilizado para este propósito, pero la práctica estándar de la inducción de isquemia del miembro aguda por la ligadura de la arteria femoral puede dar lugar a necrosis tisular sustancial, comprometer la capacidad de investigadores para estudiar las respuestas vasculares y el tejido muscular esquelético a isquemia . Un enfoque alternativo a la ligadura de la arteria femoral es la inducción de la oclusión de la arteria femoral gradual mediante el uso de constrictor ameroide. Cuando se coloca alrededor de la arteria femoral en la misma o diferentes ubicaciones como los sitios de ligación de la arteria femoral, estos dispositivos ocluyen la arteria por encima de 1 - 3 días, lo que resulta en más gradual, isquemia subaguda. Esto da como resultado la necrosis del tejido del músculo esquelético menos sustancial, which puede imitar más de cerca las respuestas observadas en la AP humano. Debido a las influencias genéticas fondo resultados tanto en los modelos de isquemia aguda y subaguda, la consideración de la cepa de ratón en estudio es importante en la elección del mejor modelo. Este artículo describe el procedimiento adecuado y la colocación anatómica de ligaduras o constrictoras AMEROID en la arteria femoral de ratón para inducir isquemia subaguda o aguda de las extremidades posteriores en el ratón.
Introducción
La enfermedad arterial periférica (PAD) es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad cardiovascular en los países desarrollados 1. PAD resultados de la obstrucción aterosclerótica de las arterias periféricas que conduce a la isquemia de las extremidades con dolor de esfuerzo o de reposo resultante y, ocasionalmente, las úlceras y gangrena que requieren amputación de miembros que no cicatrizan. Las terapias dirigidas PAD se dirigen principalmente hacia endovascular 2 o 3 revascularización quirúrgica, ya que en esencia no existen terapias médicas eficaces 4.
Por desgracia, la revasc....
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Protocolo
Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con el protocolo aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional de Duke. Los ratones machos se utilizaron en este estudio, aunque se puede utilizar cualquier sexo, como se indica con el fin científico del estudio.
1. Depilación
- Antes de la inducción de la anestesia, establecer un área de preparación de pre-quirúrgico que consiste en una resistencia de calentamiento cubierto fijado en 37 ° C y un puerto de ojiva conectado a flujo continuo de isoflurano.
- Coloque el ratón en la cámara de inducción de la anestesia. Ajuste el medidor de flujo d....
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Resultados
La correcta identificación de los vasos de las extremidades posteriores del ratón es fundamental para asegurar la reproducibilidad de las técnicas para inducir tanto la isquemia subaguda y aguda de las extremidades posteriores, tal como se describe aquí. Además de la variación inherente en estudios con animales, otros factores pueden introducir variabilidad en láser de perfusión Doppler (LDPI), incluyendo el tipo de anestesia, la posición del animal (vs. supina boca abajo), y la.......
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Discusión
Quizás el paso más difícil en este procedimiento es la separación de la arteria femoral de la vena femoral. El diámetro más grande y paredes más delgadas de la vena femoral en comparación con los de la arteria aumentan su susceptibilidad a la perforación y al desgarro durante la manipulación quirúrgica. La probabilidad de que la interrupción de la vena puede reducirse manteniendo húmeda la herida usando un hisopo estéril humedecido con PBS. También es importante asegurarse de que todos los fórceps se afilan, alineados, .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses que divulgar.
Agradecimientos
Este estudio fue financiado por las subvenciones de los NIH R21HL118661, R56HL124444 y R01HL124444 a CDK, y por las subvenciones de los NIH R00HL103797 y R01HL125695 a JMM.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Dumont #5/45 Pinzas | Herramientas de Ciencia Fina | 11251-35 | Dumoxel |
| Dumont Style 5 Mini Pinzas | Herramientas de Ciencia Fina | 11200-14 | |
| Tijeras Bonn Extra Finas de Acero | inoxidable Herramientas de Ciencia Fina | 14084-08 | |
| 7 - 0 Sutura de seda | Sharpoint | DA-2527N | |
| 5 - 0 Sutura de Vicryl Recubierta | Ethicon | J463G | |
| Pinzas Graefe | Herramientas de Ciencia Fina | 11053-10 | |
| Tijeras de resorte Vannas | Herramientas de Ciencia Fina | 15000-03 | |
| Ungüento de lágrimas artificiales | Laboratorios | de Rugby 0536-6550-91 | |
| Cinta quirúrgica | 3M | 1530-0 | |
| Bastoncillos de algodón fino | Contec | SC-4 | |
| Controlador de temperatura | Physitemp | TCAT-2DF | |
| Ameroid Constrictores | Instrumentos de Investigación SW | MMC-0.25 x 1.00-SS | |
| Esterilizador | |||
| calientes Almohadilla isotérmica Deltaphase | Braintree Scientific | 39DP | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | ||
| Solución salina tamponada con fosfato | Gibco | 10010-023 | |
| Moor LDPI | Moor Instruments | moorLDI2 | |
| moorLDI Software de medición | Moor Instruments | v. 6.0 | |
| Crema Depilatoria | Nair |
Referencias
- Criqui, M. H., Aboyans, V. Epidemiology of peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).
- Thukkani, A. K., Kinlay, S. Endovascular intervention for peripheral artery disease. Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).
- Vartanian, S. M., Conte, M. S.
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Reimpresiones y permisos
