Artículo de método

Murino modelo experimental de desarrollo del tumor original y la metástasis peritoneal vía Ortotópico La inoculación con células de carcinoma de ovario

DOI:

10.3791/54353

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9 de diciembre de 2016

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1Bell Research Center for Reproductive Health and Cancer, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Nagoya University Graduate School of Medicine, 3Department of Cancer Biology, Nagoya University Graduate School of Medicine

En este artículo

Resumen

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Para aclarar el proceso de múltiples etapas de diseminación peritoneal de carcinoma de ovario, el estudio actual presenta un modelo experimental murino de desarrollo del tumor original y la metástasis peritoneal a través de la inoculación ortotópico con estas células tumorales.

Resumen

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El carcinoma de ovario epitelial (EOC) se asocia con un mal pronóstico, ya que muestra la diseminación peritoneal. Para mejorar el pronóstico, es importante para controlar la diseminación peritoneal. Sin embargo, todavía no está claro cómo las células tumorales se desprenden de las lesiones primarias y se unen a la mesotelio. Se necesita el establecimiento de un modelo animal apropiado para obtener una comprensión del mecanismo de la difusión peritoneal in vivo. En el estudio actual, se introduce el proceso de la inyección local de células EOC en la superficie del ovario murino para el desarrollo de metástasis, incluyendo el peritoneo y órganos distantes. Se utilizaron ratones desnudos hembra (BALB / c nu / nu) a las 8 semanas de edad. Bajo un campo microscópico de vista, las células EOC (1 x 10 5 células / l de matriz-medio extracelular (ECM) a base de hidrogel / ovario unilateral / ratón) se inyectaron en ovarios murinos a través de un enfoque retroperitoneal desde el flanco dorsal. Este método propuesto es un ficheross procedimiento invasivo para el ratón y minimiza el daño al ovario. A continuación, describimos los pasos metodológicos en el desarrollo de la formación del tumor original y metastásico del COE.

Introducción

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El carcinoma de ovario epitelial (EOC) representa la mayor tasa de mortalidad por cáncer en las neoplasias ginecológicas 1. COE se asocia con un mal pronóstico, debido principalmente al retraso de su sintomatología, y con frecuencia se asocia con múltiples diseminaciones intraperitoneal y metástasis a distancia 2-4. diseminación peritoneal es un proceso de múltiples pasos. En primer lugar, las células tumorales se desprenden de las lesiones primarias, y migran hacia la cavidad abdominal. Cuando las células tumorales se unen a la mesotelio peritoneal, empiezan a invadir los tejidos a través del mesotelio 5,6. Con el fin de entender mej....

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Protocolo

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El protocolo de tratamiento se ajusta a las directrices para la experimentación con animales adoptada por la Universidad de Nagoya.

1. Preparación de las suspensiones celulares

  1. clara línea de ovario humano carcinoma de células.
    1. Mantener ES-2 células 12 en medio RPMI-1640 con 10% de suero bovino fetal (FBS) y penicilina / estreptomicina (penicilina: 100 unidades / ml, estreptomicina: 0,1 mg / ml). Células de cultivo a 37 ° C en un 5% de CO2 humidificada.
    2. Recoger células en la fase de crecimiento logarítmico en 0,05% / 0,02% de solución de EDTA tripsina (tripsina / EDTA).
      1. En prime....

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Resultados

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Seis ratones desnudos tenían sus ovarios inoculados con la línea celular de carcinoma de células claras humana ES-2, tal como se describe en este protocolo. Como se muestra en la Figura 1A, después de 2 semanas, 5 de los 6 ratones tenían un tumor en el ovario inoculado con ES-2 células, pero no había tumor en el ovario contralateral sin inoculación (utilizado como control). Además, 2 de los 5 ratones mostraron múltiples diseminaciones peritoneales con ascitis. Las célula.......

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Discusión

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Los modelos animales son esenciales para analizar los mecanismos de desarrollo del tumor, progresión, metástasis, y la eficacia del fármaco contra las células cancerosas. Los ratones con células de cáncer de ovario humano también se han utilizado como un modelo animal. A continuación, describimos un procedimiento menos invasivo para la administración de células tumorales de ovario en un sitio ortotópico. Usando este procedimiento, la inoculación en el ovario a través de un enfoque retroperitoneal desde el flanco dorsal .......

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

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Los autores agradecen a los miembros del Departamento de Obstetricia y Ginecología y Biología del Cáncer por sus útiles discusiones y asistencia técnica. Este estudio fue apoyado por una Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia (JSP) subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica (15K15604; H. Kajiyama).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Matriz Matrigel  BD354234Jeringa de insulina de hidrogel a base de ECM
TERUMOSS-05M29131/2 cc, 29 G x 1/2"
Aguja de sutura con sutura11 mm, 3/8, Nylon6-0
Reflex 7 mm Aplicador de clip para heridasCellPoint Scientific204-1000
  Pinzas para heridos, Reflex, 7 mm,CellPoint Scientific203-1000

Referencias

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  1. Jemal, A., et al. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin. 61 (2), 69-90 (2011).
  2. Kajiyama, H., et al. Long-term clinical outcome of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma: is it the same for each histological type. ....

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Etiquetas

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