Se describe un método paso a paso de realizar el recubrimiento pulpar directo en ratones dientes para la evaluación de la cicatrización de la herida pulpar y la formación de dentina de reparación in vivo.
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Artículo de método
Desarrollo de un Modelo de recubrimiento pulpar directo para la Evaluación de la Pulpa Curación de Heridas y formación de dentina reparadora en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
La pulpa dental es un órgano vital de un diente totalmente protegido por el esmalte y la dentina. Cuando la pulpa está expuesta debido a lesiones cariogénicas o iatrogénicas, a menudo se cubre con materiales biocompatibles para acelerar la cicatrización de la herida pulpar. El objetivo final es regenerar la dentina reparadora, una barrera física que funciona como un "sello biológico" y protege el tejido pulpar subyacente. Aunque este procedimiento de recubrimiento pulpar directo se ha utilizado durante mucho tiempo en odontología, el mecanismo molecular subyacente de la cicatrización de heridas pulpares y la formación reparadora de dentina aún no se conoce bien. Para inducir la dentina reparadora, el recubrimiento pulpar se ha realizado experimentalmente en animales grandes, pero menos en ratones, presumiblemente debido a sus pequeños tamaños y a las dificultades técnicas resultantes. Aquí, presentamos un método detallado, paso a paso, para realizar un procedimiento de recubrimiento de pulpa en ratones, incluida la preparación de una cavidad similar a la Clase I, la colocación de materiales de recubrimiento de pulpa y el procedimiento de restauración con compuesto dental. Nuestro modelo de ratón con recubrimiento pulpar será fundamental para investigar los mecanismos moleculares fundamentales de la cicatrización de heridas pulpares en el contexto de la dentina reparadora in vivo, al permitir el uso de ratones transgénicos o knockout que están ampliamente disponibles en la comunidad investigadora.
Introducción
Las caries dentales son una de las enfermedades bucales más prevalentes y la principal causa de intervenciones quirúrgicas en dentición en casi todos los individuos1,2. El pronóstico de las intervenciones quirúrgicas y las restauraciones de un diente depende en gran medida de la respuesta pulpar adecuada y de la cicatrización exitosa de la herida. De hecho, las caries dentales que penetran profundamente a través del esmalte y la dentina con frecuencia conducen a la exposición del tejido pulpar subyacente que a menudo está "cubierto" con materiales dentales, como hidróxido de calcio (Ca(OH)2) o cementos hidráulicos de silicato de calcio (HCSC), in....
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Protocolo
Los ratones fueron adquiridos de Jackson Laboratory y se mantienen en un vivero libre de patógenos en la División de UCLA de Medicina de Laboratorio Animal (DLAM). Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales aprobados desde el Comité de Investigación Animal del Canciller (ARC # 2016-037).
1. Ratón anestesia
- Utilizar ratones hembra C57 / BL6 de ocho semanas de edad (n = 3).
- Anestesiar los ratones utilizando ketamina (80 a 120 mg / kg de peso de ratón) / xilazina soluciones (5 mg / kg de peso de ratón) y administrar por vía intraperitoneal (ip) a una dosis de 10 ml / kg.
- Preparar ketamina (80....
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Resultados
A continuación, mostramos los procedimientos paso a paso para llevar a cabo el recubrimiento pulpar de los dientes ratones. Uno de los aspectos clave de recubrimiento pulpar en ratones es tener el aparato apropiado. En este sentido, teniendo el microscopio con un aumento de potencia de 10X es esencial (Figura 1A). Para crear una preparación de Clase-I-al igual que en el diente, se utilizó una fresa de ¼ de vuelta en una pieza de mano de alta velocidad eléctrica a 200.000.......
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Discusión
Actualmente, hay varios modelos experimentales disponibles para validar los efectos in vivo de los materiales dentales, andamios, o factores de crecimiento sobre la diferenciación odontogénico de células madre de la pulpa dental (DPSCs) 13. Estos modelos incluyen el trasplante autólogo de ectópico DPSCs en un órgano, tales como la cápsula renal, o trasplante subcutáneo de DPSCs en ratones inmunocomprometidos con andamios 14,15. Sin embargo, estos métodos están limitados en que su efecto od.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por R01DE023348 (RHK) del NIDCR / NIH y la Beca de Investigación de la Facultad (RHK) del Consejo de Investigación del Senado Académico de la División de la Universidad de California en Los Ángeles.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Microscopio estereoscópico BM-LED | MEIJI Techno | Microscope | |
| Optima MCX-LED | Bien Air Dental | 1700588-001 | Motor eléctrico |
| isoflurano | Henry Schein salud animal | NDC 11695-0500-2 | |
| 1/4 fresa redonda | Brasseler | 001092T0 | |
| Endodoncia K-file | Roydent | 98947 | |
| ProRoot MTA | Dentsply | PROROOT5W | MTA |
| Punto de papel | Henry schein | 100-3941 | |
| Ultra-Etch | Ultradent producto Inc. | Grabador de ácido fosfórico | |
| OptiBond SoloPlus | Kerr | 29669 | Adhesivos |
| Coltolux LED | Coltene/whaledent Inc. | C7970100115 | Unidad de luz de polimerización |
| Tinte de caracterización | Bisco | T-14012 | Compuesto fluido |
| Skyscan | Breuker | 1275 | uCT |
| Microm | Thermo | HM355S | Microtomo |
| Hematoxilina-1 | Thermo Scientific | 7221 | |
| Eosin-Y | Thermo Scientific | 7111 | |
| Cytoseal 60 | Thermo Scientific | 8310-16 Solución de | montaje |
Referencias
- Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197(2015).
- Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent<....
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Reimpresiones y permisos
