Analizar los efectos beneficiosos de los suplementos nutricionales sobre las funciones epitelial intestinal de barrera durante Experimental Colitis

Resumen

Los tratamientos actuales de las enfermedades inflamatorias intestinales (EII) tienen como objetivo aliviar los síntomas de la enfermedad, pero pueden causar efectos secundarios graves. Por lo tanto, las estrategias alternativas están siendo investigados en modelos animales con colitis. A continuación, explicamos cómo se analizan los efectos beneficiosos de los suplementos de la dieta en los signos clínicos de la EII en un modelo de este tipo colitis.

Resumen

Las enfermedades inflamatorias intestinales (EII), incluyendo la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa, son enfermedades crónicas recurrentes de los intestinos. Causan problemas graves, tales como calambres abdominales, diarrea con sangre, pérdida de peso, y en los individuos afectados. Desafortunadamente, no existe una cura todavía, y tratamientos sólo tienen como objetivo aliviar los síntomas. Los tratamientos actuales incluyen fármacos antiinflamatorios e inmunosupresores que pueden causar efectos secundarios graves. Esto justifica la búsqueda de opciones alternativas de tratamiento, tales como suplementos nutricionales, que no causan efectos secundarios. Antes de su aplicación en los estudios clínicos, tales compuestos deben ser probados rigurosamente para la eficacia y la seguridad en modelos animales. Un modelo experimental fiable es el modelo de colitis de dextrano sulfato de sodio (DSS) en ratones, que reproduce muchos de los síntomas clínicos de la colitis ulcerosa en humanos. Hemos aplicado recientemente este modelo para probar los efectos beneficiosos de un suplemento nutricional que contienevitaminas C y E, L-arginina, y los ácidos grasos omega 3-poliinsaturados (PUFA). Se analizaron varios parámetros de la enfermedad y se encontró que este suplemento era capaz de mejorar la formación de edema, daño tisular, infiltración de leucocitos, el estrés oxidativo y la producción de citoquinas pro-inflamatorias, lo que lleva a una mejora general en el índice de actividad de la enfermedad. En este artículo, se explica en detalle la correcta aplicación de los suplementos nutricionales utilizando el modelo de colitis DSS en ratones C57BL / 6, así como la forma parámetros de la enfermedad, tales como la histología, el estrés oxidativo y la inflamación son evaluados. El análisis de los efectos beneficiosos de los diferentes suplementos de dieta puede entonces eventualmente abrir nuevas vías para el desarrollo de estrategias de tratamiento alternativas que alivien los síntomas de IBD y / o que prolongan las fases de remisión sin causar efectos secundarios graves.

Introducción

La colitis es una enfermedad inflamatoria del colon que puede causar diarrea y dolor abdominal. La colitis puede ser aguda, en respuesta a la infección o al estrés, o se puede desarrollar como una enfermedad crónica, tal como en la colitis ulcerosa (UC), que pertenece al grupo de las enfermedades inflamatorias del intestino (EII). A pesar de los signos clínicos de la UC han sido bien descritos, la patogénesis aún es poco conocido ^1. Es un hecho aceptado entre los expertos de que la UC es una enfermedad multifactorial, con mutaciones genéticas y las respuestas inmunes aberrantes que juegan un papel importante ^2. Sin embargo, los factores ambienta....

Protocolo

Todos los experimentos con animales han sido aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional del Cinvestav.

1. Preparación de DSS Agua Potable y la inducción de la colitis

1. Preparar una solución de 3,5% w / v de sulfato de dextrano sódico (DSS) en el agua potable tratada en autoclave. DSS se disuelve fácilmente y no es necesario para filtrar la solución final.
   NOTA: 7 días de tratamiento DSS induce colitis severa. Si la inducción de la colitis leve, 3 - 4 Se recomienda a días de tratamiento. Mientras el agua potable DSS queda claro, no es necesario cambiar el agua. Sin embargo, si resulta turbia, debe ser reemplazado.
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Resultados

Suplementos de dieta puede proteger de la colitis DSS

suplementos de dieta Anti-inflamatorias y anti-oxidantes, tales como ácidos grasos omega 3-poliinsaturados vitamina C, la vitamina E, el óxido nítrico (NO) -source L-arginina, y (omega 3-PUFAs), se han utilizado con éxito variable en animales modelos para aliviar los síntomas de enfermedades inflamatorias ^3,6,15. La malnutrición, el estrés oxidativo y la producción .......

Discusión

Con el fin de utilizar suplementos nutricionales en los estudios clínicos, los beneficios y la seguridad de estos suplementos deben ser cuidadosamente evaluados in vivo en estudios con animales. En el caso de colitis, varios modelos animales adecuados que se asemejan a los signos clínicos de la EII se han establecido, incluyendo modelos químicos usando DSS, TNBS, o en ácido acético; knock-out (KO) los modelos tales como IL10-KO; y colitis de células inmune mediada por el uso de la transferencia adoptiva de célu.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0,3% de gelatina	Bioxon	158
10% formaldehído	J.T. Baker	2106-03
Placa de 96 pocillos con fondo plano	Corning	3368
Etanol absoluto	J.T. Baker	9000-03
Xileno absoluto	J.T. Baker	9490-03
ABTS	Sigma Aldrich	H5882
Albúmina sérica bovina	Sigma-Aldrich	9048-46-8
ColoScreen	Helena Laboratories	5072
Corabion (Amablemente proporcionado por Merck, Naucalpan, México)	Merck
Sulfato de dextrano sal de sodio	Affymetrix	9011-18-1	(M.W. 40,000-50,000)
Dihidroetidio	Tecnología de vida	D11347
Eosin-Y	J.T. Baker	L087-03
Evans azul	Sigma-Aldrich	314-13-6
Aguja de alimentación	Cadence Science Inc.	9921
Portaobjetos de vidrio con asa	Microscopía electrónica	70312-16
Portaobjetos de vidrio	Corning	2947
Harris hematoxilina	Sigma-Aldrich	H3136
Hexadeciltrimetimonio (HTAB)	Sigma Aldrich	H6269
Histosette (Casete de incrustación)	Simport	M498.2
Ácido clorhídrico 1 M	J.T. Baker	9535-62
Peróxido de hidrógeno	Sigma Aldrich	H3410
Ketamina	PiSA Agropecuaria	Q-7833-028
Parafina líquida	Paraplast	39501-006
Carbonato de litio	Sigma-Aldrich	2362
N,N-dimetilformamida	J.T. Baker	68-12-2
N-acetilcisteína	Sigma-Aldrich	A9165
Cubos de plástico	Microscopía electrónica	70181
Solución de poli-L-lisina	Sigma-Aldrich	25988-63-0
Prisma 5 estadístico software	GraphPad Software	Prisma 5
Solución salina 0,9% NaCl	CS PiSA	Q-7833-009
Citrato de sodio	Sigma-Aldrich	W302600
Resina sintética	Poly Mont	7987
Taq ADN polimerasa	Invitrogen	11615-010
Tissue-tek. O.C.T Compound	Sakura Finetek	4583
Jeringa de Tuberculina	BD Plastipak	305945
Tween 20	Sigma-Aldrich	9005-64-5
VECTASHIELD Medio de montaje antidecoloración con DAPI	Vector Laboratories	H-1200
Xilacina	PiSA Agropecuaria	Q-7833-099