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Artículo de método

Microscopia intravital y trombos de inducción en el lóbulo de la oreja de un ratón sin pelo

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DOI:

10.3791/55174

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2 de abril de 2017

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El modelo de oreja del ratón sin pelo SKH1-Hr hr permite microscopía de fluorescencia intravital de la microcirculación y la inducción de trombos fototóxico sin preparación quirúrgica previa en el lecho microvascular examinado. Por lo tanto, la oreja del ratón sin pelo es un excelente modelo in vivo para estudiar las interacciones complejas durante la formación de trombos microvasculares, la evolución de trombos, y la trombólisis.

Resumen

complicaciones trombóticas de las enfermedades vasculares son una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en los países industrializados. Debido a las complejas interacciones entre los componentes sanguíneos celulares y no celulares durante la formación de trombos, estudios fiables de la fisiología y la patofisiología de la trombosis sólo pueden llevarse a cabo in vivo. Por lo tanto, este artículo presenta un modelo de oreja en ratones sin pelo y se centra en el análisis in vivo de la microcirculación, la formación de trombos, y la evolución de trombos. Mediante el uso de microscopía de fluorescencia intravital y la intravenosa (iv) la aplicación de los respectivos colorantes fluorescentes, un análisis repetitivo de la microcirculación en la aurícula fácilmente se puede realizar, sin la necesidad de la preparación quirúrgica. Además, este modelo puede ser adaptado para estudios in vivo de los diferentes temas, incluyendo la cicatrización de heridas, lesión por reperfusión, o angiogénesis. En resumen, la oreja de los ratones sin pelo es un modelo ideal para el en vivo estudio de la microcirculación de la piel en condiciones fisiológicas o fisiopatológicas y para la evaluación de su reacción a diferentes tratamientos sistémicos o tópicos.

Introducción

El propósito del presente artículo es describir la técnica de la microscopía intravital aplicada a la aurícula del ratón sin pelo para la observación directa y el análisis de la microcirculación, la formación de trombos, y la evolución de trombos. Con una tasa de incidencia de 1 en 1000, trombosis venosa sigue siendo una causa común de morbilidad. Aunque el diagnóstico, estrategias de prevención y terapias se han desarrollado en los últimos años, un tercio de la trombosis venosa se manifiesta como una embolia pulmonar 1. La trombosis arterial juega un papel crítico en las enfermedades cardiovasculares, que son la causa más común de muerte en l....

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Protocolo

Todos los experimentos in vivo (7221.3-1-006 / 15) se llevaron a cabo de acuerdo con la legislación alemana sobre protección de los animales y la Guía del NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (Instituto de Recursos Animales de Laboratorio, Consejo Superior de Investigaciones Científicas).

1. Mantener general de los animales

  1. Realice los experimentos con ratones hr SKH1-HR macho de 4 a 6 semanas. Utilizar animales con un peso entre 20 y 25 g.
  2. Mantener a los animales en una instalación libre de patógenos y en condiciones estandarizadas de 24 a 26 ° C y alrededor de 60% de humedad relat....

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Resultados

Efectos del tratamiento sobre Cannabinoides trombogénesis

Tras la inyección de 0,05 ml de FITC-dextrano, la inducción de trombos fototóxico conduce a una lesión endotelial y la formación de un tapón de plaquetas parietal (Figuras 2 y 3). En el presente estudio, la inducción de trombos después de la inyección ip de los cannabinoides (5 mg / kg de peso corporal) o vehículo dio lugar a una oclusión .......

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Discusión

Hay varios pasos críticos para el éxito de la inducción de trombos en el lóbulo de la oreja de los ratones hr SKH1-HR. Para la solución de problemas, las respectivas etapas del protocolo se indican entre paréntesis.

condiciones de examen son ideales en los animales jóvenes a la edad de 4 - 6 semanas y con baja cornificación de la epidermis. En animales de mayor edad, la calidad de la visualización de los vasos es peor y menos comparable debido a la distancia mayor entre la superfi.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores no tienen reconocimientos.

....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Los ratones SKH-1/hrCharles River477se pueden comprar a otros proveedores 
ssniff alimentario de laboratorio estándarSpezialdiaetenV1594-0 se puede comprar a otros proveedores 
microscopio estereoscópico de operaciónLeica M651/M655 se puede comprar a otros proveedores 
microscopio intravitalZeissAxiotech Vario 100 se puede comprar a otros proveedores 
objetivo (20X/0,95) Zeiss20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR se puede comprar a otros proveedores 
objetivo (63X/0,95)Zeiss63x/0,95 W; ACHROPLAN se puede comprar a otros proveedores 
cámara CCD en blanco y negro Pieper FK 6990 IQ-S se puede comprar a otros proveedores 
Grabadora de DVDPanasonicDMR-EX99V se puede comprar a otros proveedores 
cloruro de sodioBraun5/12612055/1011se puede comprar a otros proveedores 
Ketamina 10%Bela pharmF3901-6se puede comprar de otros proveedores 
Xilacina 2%Bayer6293841.00.00se puede comprar de otros proveedores 
FITC-dextrano 5%Sigma 46945-100MG-Fse puede comprar a otros proveedores 
dexapantenol 5% ungüento para los ojosBayer6029009.00.00se puede comprar de otros proveedores 
formaldehído 4%SigmaHT501128-4Lse puede comprar a otros proveedores 
DMSOSigma472301se puede comprar a otros proveedores 
cubreobjetos 5 x 5 x 1 mmMenzelL4339se puede comprar de otros proveedores 
Las tiras adhesivasLeukosilk4683400se pueden comprar de otros proveedores 
centrífugaBeckman CoulterCLGS 15se puede comprar de otros proveedores 
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almohadilla de acrívidrio con calefacciónintegrada, 0,5  Plano de altura en cm

Referencias

  1. White, R. H. The epidemiology of venous thromboembolism. Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).
  2. Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. The hairless mouse in skin research. J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).
  3. Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B.

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Reimpresiones y permisos

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