Summary
在这里，我们提出一个协议，在脆弱的青少年墨西哥美国人的样本利用修改版本的特里尔社会压力测试（TSST）激发皮质醇反应性。在TSST发作后15,30和45分钟的基线收集唾液样品。未来的研究可以利用这种改良的TSST与弱势青年。
Abstract
特里尔社会压力测试（TSST）是一种经过验证和广泛使用的社会压力因子，已被证明可诱导皮质醇增加2-4倍，这是人类下丘脑 - 垂体 - 肾上腺素（HPA）轴产生的生物输出。虽然研究探讨了如何修改TSST影响应激反应性，但很少有研究创建了适合易受伤害的青春期的修饰TSST，引起显着的皮质醇应激反应。因此，目前的研究旨在以文化敏感的方式对14岁青少年的脆弱样本进行修改或调整TSST。本研究是在加利福尼亚墨西哥美国家庭的纵向出生队列研究的背景下进行的，称为萨利纳斯母亲和儿童健康评估中心（CHAMACOS）。 CHAMACOS样本是测试修改后的文化适宜的TSST的有效性的最佳选择，因为它由墨西哥美国青年组成，他们是十名被排除在研究之外。这些青年也经历了重大的早期生活逆境。示例修改包括定时提示，替代数学任务，使用同族同伴作为联盟，在TSST结束后立即通报情况，并使用未知的青年考官来管理汇报。在基线（静息期后）收集唾液样品，然后在TSST起始后15,30和45分钟再次收集唾液样品，以评估皮质醇浓度。已分析了50名参与者（50％女性）的试验性研究，对TSST进行皮质醇反应。结果证实，该修改版本的TSST在引发显着的皮质醇反应方面是成功的，其可能因个体差异而具有广泛的变异性。讨论了修改和种族考虑的目标。这项研究为未来的研究提供了一个基础，以利用一个修改TSST与弱势青年。
Introduction
特里尔社会压力测试（TSST） 1已经成为实验室设置中诱发压力的黄金标准2 。它是一种经过良好验证和广泛使用的社会压力因子，已被证明可诱导皮质醇增加2-4倍，这是由下丘脑 - 垂体 - 肾上腺素（HPA）轴1,3产生的生物输出。荟萃分析得出结论，两个关键方面是在整个寿命期间诱导最强大的HPA反应性的不可分割的：不可预测性/不可控性和社会评估威胁（SET），这两者都是TSST 3的特征 。
青春期可能是SET特别压力的关键时期，标志着敏感的发展时期，社交互动促进学习4 。例如，在青春期和青春期早期，与同伴群体融合 s变得动机突出5 。青春期开始时激素水平的快速增加影响边缘线路的发展，这导致与状态相关的社会刺激（ 即钦佩）的加工增加具有增加的动机显着性6 。社会情感参与的这种增加不仅影响了当下的动机和行为，而且影响了长时间间隔的行为模式和动机学习。随着时间的推移，社会激励措施优先排序的这种变化可以导致健康探索和风险承担，这可以促进支持成人社会功能的社会和情感学习和技能。因此，参与TSST演讲阶段的社会功能的各个方面对于青少年来说是一种有力的压力形式， 即 “好朋友”话题7,8 ，然而，由于创伤史或压力性生活事件而敏感的个人可能会由于情绪控制不良或对压力的敏感性增强而对社会评估或不可预测的情况进行反应较差，而这种负面反应模式可能有助于消极的健康结果，如吸毒或危险的刺激寻求，因此，了解对SET的生物反应对弱势青年至关重要。
一些研究探讨了SET和不可控性的变化如何影响应激响应。 SET可以根据联盟法官的数量增加或减少。 TSST要求2个联盟，但是对于11个 ， 12个 ， 13 个 ，还有一个虚拟或遥远的受众，四个10 ，而不是有效的14 ， 11,17 ，而积极评论减少SET和回应率18 。 （a）修改参与者准备演讲的时间长度14 （b）增加参与者的心理社会资源19,20,21或（c）增加参与者的自信心， TSST 22 。改善情绪抑制23 ，警惕或注意压力24,25或关于自身26的想法都增加了TSST的反应能力。最后，性别和年龄联合会影响SET 27,28的应激反应。这些研究表明，响应率可以通过实验来增加或减少。在本研究中，TSST被修改为包括时间提示，替代数学任务，使用同族同胞作为联盟，在TSST结束后立即通报情况，并使用未知的青年考官来管理汇报。
最近对应激源范例的回顾表明，在青春期中期，社会评估威胁对皮质醇升高（HPA反应）的影响尤为显着29 。但是，对TSST与弱势青少年的使用存在有效的担忧。具体来说，可以提出人类受试者的保护问题，以确保这些利益超过风险，因为在青年已经脆弱的时候，与TSST持续存在潜在的创伤（ 例如 30,31的上升方面取得的成功有限。此外，可能需要进行修改以使TSST更具文化敏感性和适用性。例如，有文献表明，与不同种族的个体相互作用可以引发压力和威胁反应32 。参与者和TSST委员会的种族构成不同，已显示不影响皮质醇对TSST 33的反应性，而是影响从TSST 34开始皮质醇恢复。因此，使用TSTS的同族/族裔同盟可以消除联盟对种族对TSST的认知刻板印象威胁和皮质醇恢复的不必要的混淆。
本研究是在加利福尼亚墨西哥美国家庭的纵向出生队列研究的背景下进行的，称为萨利纳斯母亲和儿童健康评估中心（CHAMACOS）。由于高贫困率（76％的家庭处于或低于联邦贫困水平），大量不良早期生活事件（平均生活事件数为4.5，样本为SD = 3.3）。相比之下，美国疾病控制与预防中心与凯撒永久合作伙伴基于数千名受访者进行的大型回顾性研究发现只有13％的人报告了4种或更多的不良感染发展活动35 。
TSST在本研究中被管理给青少年，作为一项大型NIH补助金的一部分，旨在研究不利早期生活事件，14岁时（TSST治疗时）对社会评估威胁的生物反应性与冒险行为之间的联系（16岁;数据收集仍在进行中; grant1R01DA035300）。在TSST试点的早期阶段，我们观察到，这种方法需要转变为对这个人口的独特需求变得内容敏感，并减轻不良反应（ 即哭泣，生气，脱离TSST）。确切地说，在修改之前，我们对TSST的行为反应差20％（ 即 20个TSST参与者中有4个人愤怒地呼喊或响应），而在实施修改后只有5％的人反应不佳。研究人员也非常了解reta的重要性在这个纵向研究中青春。应该指出的是，在试验阶段，在报告期间，在极端压力反应行为上回应TSST的个人在生物层面上是“无应答者”， 即它们没有表现出皮质醇的上升。来自这些初步结果的这种情感/生物并置也突显出需要修改TSST以产生诱导对TSST的适当生物反应的最佳条件。因此，本研究提供了青年子样本的初步证据，其中修饰的TSST诱导皮质醇反应性的功效。
Protocol
这项研究得到加利福尼亚大学伯克利分校和加利福尼亚大学旧金山分校的机构审查委员会的批准。参加者定于4：30-5：00 PM抵达实验室。
冲洗口腔
- 请参与者去洗手间，只用水冲洗嘴巴。让参与者用冷水冲洗5-10秒，然后吐在水槽里。只做一次
- 对参与者说， “这是为了确保你的牙齿没有食物或面包屑唾液收集。”
休息期
- 将参与者带入孤立的房间，让他们至少坐10分钟。让参与者完成非侵入性或非挑衅性的问卷调查，如联系方式和日常生活问卷调查，以及观看海洋生活3分钟的平静视频。
唾液收集＃1（P再应力）
- 放置一条线以表示2 mL冷冻条件下的1 mL唾液，并告诉参与者将冷冻液填充到这一行。通过被动流口水将参与者的唾液通过2英寸吸管收集入2 mL冷冻36，并立即冷冻（-80°C）。
- 对参与者说，“ 我会请你把唾液填满这条线，这样做的方法是让唾液收集在你的嘴里，然后让它通过吸管进入小瓶，最好是你不要吐出来，因为你的样本中有气泡 - 只是让唾液通过稻草，如果你在做这个事情时不要说话会有所帮助，请尽量不要咳嗽痰，我们只是想要正常的唾液注意你的唾液小瓶和充满的气泡如果你的唾液顶部有气泡，那么它们应该在线上，所以只有液体唾液直到线，告诉我什么时候填满到了这里重复一些贴在墙上的食物图（点出图），因为最喜欢的食物的想法使人们的嘴水。
- 在参加者完成唾液样本之后提供水。不要让参与者保持水分;当他/她完成后，把它拿回来。
准备期
- 对参与者说： “在几分钟之内，我们希望你就你是一个好朋友发表一个五分钟的讲话，有一个由两名训练有素的评论家组成的委员会，他们正在旁边的房间里，他们将会在听你的工作是让审稿人认为你是一个好朋友，他们希望你解释什么事情让你成为别人的好朋友，你正在与很多其他人竞争，因为你在给予什么好处你的演讲和令人信服的人你是一个好朋友，审稿人是判断面部表情和身体运动的专家，他们要去com把你的演讲交给其他人去学习。您可能会注意到评论者正在做笔记。这样我们可以稍后再来看他们的笔记。您也将进行录像，以便我们稍后对您的演奏进行评分。
你现在有3分钟准备你的演讲。请记住，你的讲话应该解释一下你是一个好朋友，而且你正在与其他人竞争你的信心。之后，我会带你到另一个房间，在那里你会向评论者介绍自己，并给你5分钟的讲话。言论之后还有另一项任务，但是审稿人会让你知道讲话后的任务。你有任何问题吗？如果你愿意，你可以写笔记，但你不能把它们带到你的房间里。好的，请开始准备。我会在几分钟后回来。“ - 手持参与者纸张，笔和剪贴板，让他们记录笔记。
- 让参与者独自离开房间。
- 等待3分钟，然后回到房间。
TSST设置
- 对参与者说， “好的，现在是时候到隔壁开始了。”如果参与者写了笔记，请从参与者那里拿走。说：“ 我现在可以带你们， 谢谢。
- 将参加者带到TSST室，并指出他们应该面对联盟和摄像机。
- 在参与者进入房间之前开始视频录制。记录整个演讲和数学任务（总共约10分钟）。
- 青年采访者介绍委员会。 “这是_（参与者的名字）_。（参与者）_，你知道这两个人吗？
- 如果参与者回答不了，青年采访员说“好吧，你可以开始”。
- 如果参与者回答是，h参加者表示他/他知道谁，并让青年访员说“好，_（联盟）__，请原谅自己，法官需要是不认识你的人”。
TSST演讲任务
- 有联盟1说：“ 请告诉我们你为什么是好朋友，现在开始说话 。”
- 设置定时器5分钟。启动计时器
- 默认30秒后，使用以下提示之一来保持参与者的说话。每次暂停30秒时都可以使用提示。
- 说“你还有时间，请继续。”
- 说“你为什么还是个好朋友？”
- 说“请举个例子，当你是一个好朋友。”
- 说“像你一样有创意，你为什么还是个好朋友？”
- 以上所有提示已被使用后，继续提示后来， “你还有时间，请继续。”
- 5分钟后，联盟1说： “请停止，你的时间到了。 （继续数学任务。）
TSST数学任务
- 有联盟1说： “我们现在要求你大声倒数，从423开始，倒数7，继续向后倒7点，直到我们告诉你停止，如果你犯了错误，将会让您知道并要求您重新开始，请尽可能快速准确，现在我们希望您开始向后计数，从423开始，减去7.继续减去7点，直到我们告诉您停止。 “
- 设置定时器5分钟。启动计时器
- 如果参与者看起来很困惑，联邦1会说： “你要我重复一遍吗？
- 如果参与者犯了错误，联邦1会说： “那个”不正确请重新开始423减7.“
- 如果参与者在30秒后没有大声开始计数，请转到下一个更容易的数学问题，使用与上述相同的提示相同的说明。
- 使用以下内容，因为更容易的数学问题包括（按此顺序）：
423 - 5 =？
95 - 5 =？
66 - 3 =？
6 + 3 =？ - 如果参赛者在每次正确答案后停止等待确认，联盟1会说： “继续向后倒数7.如果出错，我们只会纠正错误 - 否则，继续。
- 5分钟后，联邦1说： “时间到了，请到隔壁给你下一个唾液样本。”
- 护送参加者回到孤独的房间。
8.停止协议
- 使两个联盟能够提早停止协议。在这样做之前，两个联盟都不需要相互协商。
- 如果参加者哭泣或出现眼泪，变得明显生气或侵略性，或以其他方式显示痛苦， 或者如果参与者以出现激进或奇怪的方式开始姿势，请立即停止协议，但尽可能正常。
- 说：“ 时间了，请到隔壁给你下一个唾液样本 。”
- 直接参加到下一个房间。
9.唾液样品＃2（应激后15分钟开始）
- 当青年重新进入隔壁房间时，设定计时器15分钟。
- 对参与者说： “这是访问中最棘手的一部分，谢谢你这样做，我们将在一秒钟内谈论，现在是收集另一种唾液的时候了。”
- 如果参与者提到TSST，对参与者说： “我们可以在一分钟内谈论，但请先唾液样本。
- 放置一条线，以表示2 mL冷冻条件下的1 mL唾液，并告诉参考考虑将冷冻机填满这条线。通过被动流口水将参与者的唾液通过2英寸吸管收集入2 mL冷冻36，并立即冷冻（-80°C）。
- 在参加者完成唾液样本后，喝水。不要让参与者保持水分;当他/她完成后，把它拿回来。
汇报
- 对参与者说： “好吧，让我们谈论演讲和数学活动，你可能已经猜到了，但这些活动的整个目的是创造压力，你可能已经注意到”评论者“不是最友好的在世界上，对吧？
“首先，我想告诉你，”审稿人“只是研究助理，他们的工作是让青少年做这些活动，但不要给任何积极的反馈，无论你做得多好，所以他们在那里的行为h广告与您在这些任务上的表现无关 - 他们与所遇到的每一位参与者的行为方式相同。 “
“你可能想知道为什么我们这样做，我们有一个科学的理由，我们正在研究你在日常生活中遇到的压力的大小是否会影响你对这样一个紧张局势的反应如何，一点这项研究是为了了解为什么青少年对压力有不同的反应，我们正在测量你的唾液样品中称为皮质醇的东西，以此来看待你的压力反应。“
“如果你发现演讲和数学压力，你不是孤单的！我们选择发言和做数学，因为我们知道即使他们很安全，他们让很多人紧张，让我告诉你，我们需要自己做这些活动，我们都发现真的很难！即使是伯克利的科学家也搞砸了数学，我们都说'那些是长期的我的生命十分钟！“你有这样的感觉吗？
“还有几件我想提的东西...”
[如果VIDEOTAPED]“我们录制了两个原因，主要原因是我们的老板可以确保我们正在正确地做这个活动，今后我们也可以看视频来获取有关人们面部表情的更多信息。这只是另一种看待青少年如何应对不同压力的方法。“
[如果不是VIDEOTAPAP]“事实是，我们并不是录像带，摄像机没有真正打开，这是使它更加紧张的另一部分。
“那里的人们并没有真正写出关于你表演的笔记，他们只是写废话，作为他们演出的一部分。
“我们想请你不要把这个活动提交给任何可能在的人这个研究，即使他们是你最好的朋友，兄弟，姐姐，表弟，或者其他的东西。如果其他人在进入这个访问之前就会学习这个活动，他们可以在家里练习演讲，或者在他们到达这里之前感到紧张，他们将会有完全不同的体验。我们不希望发生这种情况。这是否有意义？同样的原因，如果你和你的父母谈谈，请问他们不要在学习中告诉朋友或家人。“
“你有任何问题吗？”
11.唾液样品＃3（应激后30分钟起始）
- 放置一条线，以在2 mL冷冻条件下显示1 mL唾液，并告诉参与者将冷冻液填充到这一行。通过被动流口水将参与者的唾液通过2英寸吸管收集入2 mL冷冻36，并立即冷冻（-80°C）。
- 设置定时器15分钟。
- 提供水炖k参与者完成了唾液样本。不要让参与者保持水分;当他/她完成后，把它拿回来。
12.唾液样品＃4（45分钟压力后开始）
- 放置一条线，以在2 mL冷冻条件下显示1 mL唾液，并告诉参与者将冷冻液填充到这一行。通过被动流口水将参与者的唾液通过2英寸吸管收集入2 mL冷冻36，并立即冷冻（-80°C）。
- 在参与者完成唾液样本后，提供饮水。不要让参与者保持水分;当他/她完成后，把它拿回来。
Representative Results
该样本由14岁的儿童组成，这是一个成绩斐然的群体研究的一部分，即萨利纳斯母亲和儿童健康评估中心（CHAMACOS）。这项研究由加利福尼亚州农民社区居住的325名墨西哥美国家庭的第一批人群组成，并在子宫内前瞻性地追踪。从9岁起，TSST没有被管理给300名儿童的第二个CHAMACOS队列。如果青少年在以前的访问中被诊断为孤独症（如果在过去的访问中显示出极端的非典型行为），那么青少年如果他们的全面智商从前一次访问（12岁）小于70岁就被筛选参加TSST如果他们的抑郁症筛查评分≥3SDs高于年龄和性别，如果t他的青少年报导参与过去一年的帮派斗争。这些排除标准是基于最初对TSST的过度响应而添加的，但是这些排除标准是否在最终结果上有所不同。除了这些排除标准外，参加者无论身心健康如何都入学了。最终，264名青少年完成了TSST，没有报告问题或没有问题直到汇报。 表1列出了被排除的参与者人数以及为什么被排除在外。那些完成的人没有完成TSST的人口统计学差异。
唾液样品储存在-80℃，直到它们在干冰上运送到爱荷华州立大学的同事（ 即生物安全二级实验室）。到达后，将冷冻唾液样品编入目录并再次放置在-80°C冷冻箱中。上在测定当天，每个唾液样品在24小时内解冻，并使用完善的高度灵敏的酶免疫测定试剂盒进行一式两份测定。平均测定内变异系数（CV）小于2.25％，皮质醇的平均测定间CV为5.13％。如果重复测量的CV大于7％，则重新分析样品。
皮质醇测量的描述性统计学以及每个样品的标准偏差在表2中提供， 如图1所示 。进行2×4重复测量方差分析来测试性别对四种唾液样品的影响。皮质醇对TSST反应的主要作用（ F = 9.09， p <0.001），但性别不是皮质醇对应激反应的重要预测因子（ F = 1.03， p = .39）。平均体重指数为23.53，也不是重复的重要预测指标测量皮质醇方差分析（ F = 1.03， p = 0.38）。如预期的那样，配对样品t检验（ 表3中提供）显示皮质醇从应激前至压力后发作15分钟，应激后发作15分钟至压力后发作30分钟，应激后30分钟至应激后45分钟。当比较预应激皮质醇浓度与应激后浓度30分钟时，皮质醇发生的最大变化与先前研究一致（Cohen's d = .80） 1,3 。被标记为与TSST有困难时间的个体倾向于报告应激反应的高应激反应，但报告在研究结束之前恢复正常状态。尽管压力后30分钟浓度是这些样品中最高的浓度，但应激后皮质醇浓度45分钟后表明个体开始从应激源恢复，因为45分钟的应激后浓度显着低于30分钟浓度（ 见表3 ）。
图1：皮质醇对TSST的反应性。皮质醇反应性意味着标准偏差。 请点击此处查看此图的较大版本。
表1：排除的原因。参与者如果开始了TSST，但是早点停止，拒绝参与，被淘汰，或因项目相关问题而被跳过研究。
表2：平均皮质醇浓度和标准偏差。皮质醇从样品1-3增加，然后由样品4下降。
表3：配对样品t检验。将皮质醇浓度（μg/ dL）和皮质醇变化的标准偏差（SD）相互比较。从基线样本到应激后样本观察到皮质醇显着增加。
Discussion
目前的研究旨在证实TSST与弱势青年的修改版本的功效。 CHAMACOS项目提供了最佳样本来测试修改后的相关TSST的有效性，因为它是独一无二的（墨西哥美国样本经常被排除在研究之外），并且代表了经历了重大早期生活困难的青年样本。结果证实了改性TSST在诱发皮质醇从预应激到应激后样本的显着增加以及在收集最后一次唾液样品时从TSST的正常相对恢复的成功。本研究通过TSST的上下文相关协议以及影响原始TSST修改的因素的探索，为该领域提供了有价值的工具。
TSST的建立和管理有几个关键步骤必须注意。首先，两个联盟需要穿白色实验大衣，坐在桌子后面，并且有一个摄像机录音，并指向参与者在参加者进入房间之前站在哪里。参与者贯穿整个TSST，而委员会则坐在那里。第二，每个性别需要1个联盟，联盟需要与参与者具有相似的种族/民族，并且与参与者相似的年龄出现（本研究使用年龄略小于参与者的年龄较小的青年） ）。第三，联盟必须表现出平淡的影响，整个协议中都会轻微的无聊。联盟是在TSST期间尽可能多地看待参与者，而不表示兴趣。邦联2写笔记，而联邦1负责管理提示和说明。
应该注意的是，在情绪上“中立”34;国家掌握技能和实践。一些人如果不能保持中立的面孔，可能不适合联盟的角色。本研究中的联盟是在整个TSST期间能够保持中立立场的手段。但是，如果参与者变得泪流满面，悲伤或侵略，那么这些人员需要知道如何和何时进行干预来停止协议。 TSST的完整性还需要在整个研究期间定期评估，以确保情绪风格或脚本中没有漂移。在这项研究中，当他们能够解决与TSST管理专家的任何异常事件并检查问题时，向联盟提供了每周检查。 TSST“复习”也每隔几个月提供一次，以重新训练TSST的联盟。在TSST期间为母亲提供同意的参与者录制了视频，并对这些视频进行了审查，以确保TSST脚本的真实性。最后，一些研究人员可能认为，对TSST反应表达背叛或愤怒的参与者将具有高皮质醇反应。然而，这项研究排除了这一数据的概念，因为这些青少年最有可能是通过皮质醇反应来评估的，这些青少年是非反应者（ 即皮质醇在整个任务中降低或保持稳定的个体）。因此，严格遵守敏感议定书并没有破坏整体的反应率，而是确保压力因素的挑战被淘汰到适合这些青年的水平。因此，标准的TSST方案在道德上也是科学上不合适的，因为消耗，无反应，而“放弃”是主要的反应。
在通过原始TSST运行几个参与者之后，原始TSST被修改为更好地匹配由于非最优响应而导致的这个人口的上下文因素（ 即哭泣，脱离任务，积极姿态）。研究人员与许多研究人员协商，这些研究人员使用了易受伤害人群的TSST（ 例如孤儿院，少年司法设置，受虐待的人群），但没有一项修改完全符合本研究的需求 - 一些偏离了协议，我们担心这些变化不会引起皮质醇反应12,27。因此，我们的研究中对TSST应用了三个主要修改，下面阐述了这些修改的修改和动机。
首先，重要的是不要疏远参与者。压力任务的管理对于这项研究很重要，但是参与者不必因为自己的母亲怀孕而纵向追踪青少年，所以参与者不必失去生命力。在这项研究中，参与者是d在TSST之后立即了解，以确保TSST结束后参与者的压力停止。对于这个样本，管理汇报的工作人员需要是尽可能不熟悉的人，但仍然同情，而与青年没有情感联系。虽然这可能看起来违反直觉，当熟悉和情感上与青年有关的工作人员在TSST上向他们汇报时，青年人倾向于倾向于反对TSST，并更多地谈论这个问题，有时候会因为哭泣或愤慨的感觉而结束被“欺骗”。管理汇报工作的不熟悉的工作人员帮助确保我们没有通过实施TSST来切断队伍与熟悉的工作人员的纵向联系。这在拉丁裔社区被认为是重要的，但是与参与者发展良好关系的许多纵向研究应该考虑。使用不熟悉的sta鉴于我们观察到的使用不熟悉的工作人员的行为反应更为理想，ff也减少了这一简报进一步强调青年的可能性。在收集两个唾液样本之前的汇报可能涉及使用这种修改的研究人员，应该注意的是，本研究观察到TSST结束后的原型皮质醇反应模式（应激者结束15分钟后最高浓度，并在应激者结束30分钟后恢复）。这种修改对于由于脆弱国家而可能在TSST之后可能继续施加压力的青年更为文化上敏感。
第二，TSST协议需要对参与者的个体因素灵活。墨西哥美国青年在这项研究中居住在Salinas山谷的低资源和贫困农业社区。 CHAMACOS家庭劳动困难条件，特别是低工资，间歇性季节性就业和漫长的工作时间，规避在快速和突出的青少年发展期间积极的家庭互动的机会。与队伍中SES /贫困程度相关的压力因素有助于粮食不安全，住房过度拥挤，生活条件不合格以及医疗服务不足以解决认知障碍和精神卫生需求。更重要的是，萨利纳斯山谷的青年不成比例地受到家庭动荡和青年暴力的侵害，这些暴力事件也渗透到当地的学校和社区。随着青少年学习适应迅速变化的社会和经济挑战，或逐渐变得敏感（或在某些情况下，脱敏）到日常生活的不可预测性质，这些风险因素越来越突出。使TSST对于这个人群更加灵活的一个例子是改变数学部分的难度。鉴于这个study对以前的认知测试不利，并且了解可能影响到智商38的环境病原体暴露，很明显，通常与TSST相关联的“一刀切”的数学任务不能适应这个人群。在其他压力因素39,40之后，数学难题因此被评为具有挑战性，但对青年而言并非不可能。
第三，TSST协议需要在某些文化环境中认识和建立社区和社会关系的高度意识。使用青年参与者联系的联盟很重要，所以这项研究招募了比参与者年龄稍长的联盟，以便出现类似的年龄和种族，来自同一个社区，所以SET来自“同龄人”。相反，社会关系太多是有问题的。确保这一点很重要联盟是适当的中立的，联盟对参与者来说是未知的。这对于目前的研究至关重要，因为尽管萨利纳斯山谷是一个相对较大的地区，但青年社区可能非常小，相互关联。因此，在TSST开始之前确保参与者和联盟彼此不认识是有用的。如果参与者或联盟在本研究中认识到另一个，则TSST只与一个联盟一起运行。在这个背景下（Salinas），这个研究的同盟来自同一个社区的事实是重要的，这是远离大学环境，并且难以找到一次可以工作一两个小时的工作人员。这项研究的外地办事处研究人员对研究非常精通和训练有素，在维护协议方面不应被视为理所当然的。
虽然这些结果有助于验证修改的TSST的使用与脆弱的青少年，需要更多的研究来确认这些影响在不同样本之间的可复制性。首先，虽然这个项目很幸运能够获得墨西哥美国青少年这样一个独特而脆弱的样本，但是这些结果需要在其他脆弱的种族中进行复制，以确认这种改良的TSST是否足够强大以引起皮质醇反应其他人群。其次，这个样本限于14岁。虽然狭窄的抽样在这个样本中受到年龄对TSST反应的影响，但未来的研究可能会尝试在不同的青少年和儿童年龄，也可能在青春期发育中复制这些影响。最后，应该指出的是，没有从使用非修改的TSST的比较组中收集数据，因为这个样本是不道德的，因为我们在一开始就经历了较少修改的较差行为和情绪反应版本of TSST。
一般而言，TSST技术也有局限性。如前所述，联盟在整个TSST中保持中立立场是很重要的。需要至少3个人来适当地运行TSST（2个联盟和1个实验者），如果这些人对参与者不了解，则TSST运行得更好。因此，这种协议在大学校园设置中更容易运行，本科生可以在实验室中一次工作1-2小时，但在远程设置中不太容易，或者在联盟作为工作支付的设置中（因为它们只付费每个TSST工作约1 h）。这种技术也可能是对随时间推移的项目进行纵向研究的障碍 - 这些知名人员不应该是管理TSST的人员。此外，在保持TSST随时间的完整性方面存在重大开销 - 需要专家来审查录像带的TSST，保持与联盟的每周检查，并提供定期的“复习”会议，以确保该技术没有漂移。此外，TSST对于给定的参与者来说难以反复进行，因为它依赖于轻微的欺骗，参与者可能习惯于该技术。演讲和数学部分不是平衡的，对于其他方法，如自主神经系统功能，这将更为最佳。 TSST没有任何部分没有压力，因此需要另一个会话（ 即 ，友好的TSST或安慰剂TSST）或其他（ 即基础日）进行非压力比较。最后，非实验室的压力源可能更有效（ 即卡拉OK，过山车或闹鬼的房屋）或更多的生态41 。
这项研究为未来的研究提供了一个基础，以利用一个修改TSST与弱势青年。未来纵向寻求在多个数据收集波幅中保留参与者的研究也可能需要利用这些修改中的一些修改其方法，以限制消耗。此外，这项研究表明，确实有可能创建文化敏感的TSST的修改版本，同时仍然将应激反应性滴定到适当水平以捕获皮质醇反应性的个体差异。
Acknowledgments
作者要感谢参加CHAMACOS研究的家长和青少年。我们还要感谢研究工作的CHAMACOS工作人员，特别是Katherine Kogut，MS，她为本研究项目经理所做的所有工作。作者还要感谢国家药物滥用研究所1R01DA035300。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| TSST | |||
| 2 white lab coats | Dickies | 83403 | For confederates |
| 2 clip boards | Staples | 21423 | For confederates |
| 2 pens | BIC | GSM609-Blk | For confederates |
| Table | Ikea | B00EYU3E7I | For confederates to sit behind |
| Video Camera & Tripod | Sony | K-86674-05 | |
| Paper | Generic | For participant's preparation period | |
| Saliva samples | |||
| Latex gloves | Fisher Scientific | 19041171C | To collect saliva samples |
| 2 mL cryovials | Wheaton | W985872-100 | 4 per participant |
| 80 °C freezer | So-Low | U85-13 | |
| 2'' straws | Genuine Joe | GJO58925 |
References
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