Un modelo de ratón IL-8 transgénicamente transgéni-<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoreo a Largo Plazo de las Respuestas Inflamatorias

Gabriella Bergamini; Fabio Stellari; Angela Sandri; Maria M. Lleo; Gaetano Donofrio; Francesca Ruscitti; Federico Boschi; Andrea Sbarbati; Gino Villetti; Paola Melotti; Claudio Sorio

doi:10.3791/55499

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Artículo de método

Un modelo de ratón IL-8 transgénicamente transgéni-

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DOI:

10.3791/55499

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7 de julio de 2017

Gabriella Bergamini^*¹ , Fabio Stellari^*² , Angela Sandri^*³ , Maria M. Lleo³ , Gaetano Donofrio⁴ , Francesca Ruscitti⁵^,² , Federico Boschi⁶ , Andrea Sbarbati⁷ , Gino Villetti² , Paola Melotti⁸ , Claudio Sorio¹

¹Department of Medicine, General Pathology Division, Cystic Fibrosis Translational Research Laboratory "D. Lissandrini", University of Verona, ²Corporate Preclinical R&D, Chiesi Farmaceutici S.p.A., ³Department of Diagnostic and Public Health, Microbiology Division, University of Verona, ⁴Dipartimento di Scienze Medico-Veterinarie, University of Parma, ⁵Department of Biomedical Biotechnological and Translational Sciences, University of Parma, ⁶Department of Computer Science, University of Verona, ⁷Department of Neurological, Biomedical and Movement Sciences, University of Verona, ⁸Cystic Fibrosis Regional Center (CFC), AOUI Verona

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El método descrito aquí permite la visualización de la activación de la inflamación dependiente del promotor de IL-8 en los pulmones de ratones a través de imágenes de bioluminiscencia no invasivas (BLI). El mismo animal puede ser sometido a BLI múltiples veces durante hasta dos meses a partir del momento de la entrega de la construcción de indicador de luciferasa.

Resumen

La inflamación de las vías respiratorias se asocia a menudo con infecciones bacterianas y representa un determinante principal de la enfermedad pulmonar. La determinación in vivo de las capacidades proinflamatorias de diversos factores es desafiante y requiere procedimientos terminales, como el lavado broncoalveolar y la extirpación de los pulmones para el análisis in situ , impidiendo la visualización longitudinal en el mismo ratón. Aquí, la inflamación pulmonar se induce a través de la instilación intratraqueal de sobrenadante de cultivo de Pseudomonas aeruginosa (SN) en ratones transgénicos transitoriamente expresando el gen indicador de luciferasa bajo el control de un promotor bovino heterólogo de IL-8. La expresión de luciferasa en el pulmón se monitoriza mediante análisis de imagen bioluminiscente in vivo (BLI) en un intervalo de tiempo de 2,5 a 48 h después de la instilación. El procedimiento puede repetirse varias veces dentro de 2 - 3 meses, permitiendo así la evaluación de la respuesta inflamatoria en los mismos ratones conLa necesidad de terminar con los animales. Este enfoque permite el monitoreo de factores pro y antiinflamatorios que actúan en el pulmón en tiempo real y parece adecuado para estudios funcionales y farmacológicos.

Introducción

Las enfermedades pulmonares crónicas, como el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la fibrosis quística (fibrosis quística) y la bronquiectasia, se caracterizan por la inflamación de las vías respiratorias. La inflamación de las vías respiratorias se caracteriza por edema, infiltración celular, linfocitos T y activación de los mastocitos, aumento de las secreciones de las vías respiratorias y deposición excesiva de colágeno. La CF es un trastorno multisistémico, y su principal causa de mortalidad y morbilidad es la infección bacteriana pulmonar con aumento de la exacerbación pulmonar. La disminución de la función pulmonar predice un resultado sign....