Reabsorción del ácido de bilis del intestino-dependiente y la inhibición de la regeneración de la síntesis hepática de ácidos biliares es importante para la salud y la homeostasis sistémica. En este estudio, describimos un modelo de ratón para la resección ileal evaluar la malabsorción biliar inducida por ileectomy, la sobreacumulación y la toxicidad en intestino de ratón.
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Artículo de método
Sobreacumulación de Ileectomy inducida por bilis en intestino de ratón
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
La resección intestinal es un enfoque terapéutico común para enfermedades humanas como la obesidad, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y cáncer de colon que a menudo resulta en intestino corto severo síndrome-como los efectos adversos como diarrea de ácidos biliares, deshidratación, trastornos electrolíticos y mala absorción de nutrientes. Aquí introducimos un modelo murino de resección iléica, denominado ileectomy, para evaluar la comunicación de tejido y el mantenimiento de la homeostasis sistémica. Después de la resección ileal, sangre circulante carece permanentemente el factor de crecimiento del fibroblasto hormona endocrina específica de íleon 15 (FGF15), que lanza su endocrinas inhibición de la síntesis de ácidos biliares en el hígado. En combinación con el aumento de la producción y suprimido la reabsorción de ácidos biliares después de quitar el íleo, ratones que experimentaron la cirugía sufren de sobreacumulación de sales biliares en el intestino y asoció diarrea, morbilidad y mortalidad. Uso novedoso del cirugía modelo introducido en este estudio puede proporcionar la visión mecanicista y funcional control ileal de regulación metabólica sistémica en fisiología y enfermedad.
Introducción
En investigación biomédica moderna, modelos de animales genéticamente manipulados son ampliamente utilizados para recoger ideas sobre enfermedades humanas. En particular, tejido o célula-funciones específicas de ganancia y la pérdida de genes se han utilizado para estudiar la regulación molecular así como efectos biológicos inducidos. A pesar de los avances en la manipulación de genes diana en vivo, hay limitaciones persistentes. Primero, muchas células o tejido deleciones específicas afecta múltiples órganos. Por ejemplo, canceladura del gene epitelial eliminará la expresión en los epitelios de tejidos múltiples. Además, incluso si la eliminación se limita a....
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Protocolo
animal protocolo fue revisado y aprobado por el cuidado institucional de animales y uso en el caso Western Reserve University School of Medicine y se llevó a cabo con arreglo a la guía de institutos nacionales de salud (NIH) para la Uso y cuidado de animales de laboratorio (8ª edición, 2011). Ratones fueron sacrificados por métodos compatibles con las directrices de la Asociación Médica Veterinaria americana (AVMA) para la eutanasia de animales (edición de 2013). C57BL/6J, ratones machos, de 8-16 semanas de edad fueron utilizados en el presente Protocolo. Ratones fueron alojados en un entorno de ciclo luz/oscuridad de 12 horas.
1. preparaci....
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Resultados
Los procedimientos para la ileectomy se muestran en la figura 1. El primer paso incluye preparación de la piel abdominal de ratón, haciendo una incisión abdominal y usando retractores para exponer completamente el intestino (figura 1A-C). A continuación, el ciego de ratón fue localizado (figura 1D); Dado que su tamaño y su forma hacen un hito fácilmente identificable.......
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Discusión
Para llevar a cabo una exitosa ileectomy, la arteria mesentérica superior debe ligarse por adelantado para bloquear el suministro de sangre al segmento resecting. El segmento de íleon isquémico volverá púrpura oscuro después de la ligadura. El segmento ileal entonces debe ser resecado totalmente. Un suministro normal de sangre se realizará para los extremos retenidos. Esto es esencial para evitar el sangrado e incorrecta eliminación, que puede fácilmente causa fracaso quirúrgico debido a la necrosis isquémica después de .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Esta investigación es apoyada por Fundación de Tom Peterson y concesión de NIH R01-HL119780 (Jain, MK).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Microscopio de disección | Olympus | SZ61 | Para cirugía |
| Controlador de temperatura animal | Physitemp Instruments, Inc. | TCAT-2LV | Para el control de la temperatura corporal |
| Vaporizador anestésico de isoflurano | VetEquip | 911104 | Para la anestesia |
| Pinzas de disección | Herramientas de Ciencia Fina, Inc. | 11274-20 | Para cirugía |
| Tijeras | Herramientas de Ciencia Fina, Inc. | 14084-08 | Para cirugía |
| Portaagujas | Roboz Instrumento Quirúrgico Co. | RS-7882 | Para cirugía |
| Micro cuchillos-hoja de aguja Fisher | Scientific | 10318-14 | Para cirugía |
| Sutura monofilamento 6-0 | Ethicon | 1698G | Para el cierre de la piel abdominal |
| 7-0 sutura de seda | Ethicon | 766G | Para ligadura |
| 8-0 sutura monofilamento | Ethicon | 1714G | Para anastomosis |
| Esponjas quirúrgicas | Dynarex Corp. | 3333 | Para cirugía |
| Pequeños aplicadores con punta de algodón | Fisher Scientific | 23-400-118 | Para cirugía |
| Isoflurano | Piramal Healthcare Limited | 66794-013-25 | Para anestesia |
| Clorhidrato de buprenorfina | Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals | 12496-0757-1 | Para analgesia |
| Inyección de cloruro de sodio al 0,9% | B. Braun Medical Inc. | 0264-7800-10 | Para lavado/inyección |
| povidona solución de preparación de yodo | Dynarex Corp. | 1413 | Para la preparación de la piel |
| Puralube ungüento veterinario | Dechra Productos veterinarios | 17033-211-38 | Para la protección de los ojos |
| Loción removedora de vello | Church & Dwight Co., Inc. | Para la preparación | |
| Unidad de cuidados intensivos | ThermoCare | FW-1 | Para la recuperación postoperatoria |
| DietGel recovery | ClearH2O | 72-06-5022 | Para la recuperación postoperatoria |
| Aurum kit de tejido graso y fibroso de ARN total Bio-Rad | 7326830 | Para el aislamiento de ARN | |
| iScript supermix de transcripción inversa para RT-qPCR | Bio-Rad | 1708841 | para ensayo de transcripción inversa |
| TaqMan fast advanced master mix | Applied Biosystems/Life Technologies | 4444965 | para el análisis QPCR |
| kit de ensayo de ácidos biliares totales | Genzyme Diagnostic | DZ042A-K01 | Para ensayo de ácidos biliares |
| C57BL/6J | El Laboratorio Jackson |
Referencias
- McLeod, R. S. Surgery for inflammatory bowel diseases. Dig Dis. 21, 168-179 (2003).
- Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon. Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).
- Polle, S. W., Bemelman, W. A.
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Reimpresiones y permisos
