Modelado de la muerte Neuronal y la degeneración en las neuronas del gránulo cerebeloso primario de ratón

Matthew Laaper; Takrima Haque; Ruth S. Slack; Arezu Jahani-Asl

doi:10.3791/55871

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Artículo de método

Modelado de la muerte Neuronal y la degeneración en las neuronas del gránulo cerebeloso primario de ratón

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DOI:

10.3791/55871

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6 de noviembre de 2017

Matthew Laaper¹^,² , Takrima Haque¹ , Ruth S. Slack³ , Arezu Jahani-Asl¹^,²^,⁴

¹Lady Davis Institute for Medical Research, Jewish General Hospital, ²Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ³Department of Cellular and Molecular Medicine, University of Ottawa, ⁴Department of Oncology, Faculty of Medicine, McGill University

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un método simple para el aislamiento y cultivo de neuronas de gránulo cerebral primario de ratón (CGNs) de cachorros de 6-7 días, transduction eficiente de CGNs por pérdida y ganancia de estudios de la función y modelado de excitotoxicidad neuronal inducida por el NMDA, muerte celular inducida por potasio bajo, daño del ADN y estrés oxidativo utilizando el mismo modelo de cultura.

Resumen

Las neuronas cerebelosas del gránulo (CGNs) son un modelo neuronal comúnmente utilizado, formando una abundante población homogénea en el cerebelo. A la luz de su desarrollo post-natal, abundancia y accesibilidad, CGNs son un modelo ideal para el estudio de procesos neuronales, incluyendo el desarrollo neuronal, la migración neuronal y estimulación de la actividad neuronal fisiológico. Además, las culturas de la CGN proporcionan un excelente modelo para estudiar modos de muerte celular como excitotoxicidad y apoptosis. Dentro de una semana en cultura, CGNs expresan los receptores N-metil-D-Aspartato (NMDA), un receptor de glutamato ionotrópicos específicos con muchas funciones esenciales en salud neuronal y la enfermedad. La adición de bajas concentraciones de NMDA junto con despolarización de la membrana para roedores cultivos primarios de la CGN se ha utilizado para estimulación de la actividad neuronal fisiológica mientras que la adición de altas concentraciones de NMDA puede ser empleada para modelar lesión neuronal excitotóxicos. Aquí, se describen un método de aislamiento y cultivo de CGNs de cachorros 6 días de edad, así como la manipulación genética de CGNs por adenovirus y lentivirus. Tenemos también presente protocolos optimizados sobre cómo estimular la apoptosis inducida por potasio bajo, estrés oxidativo, excitotoxicidad inducida por NMDA y daño de la DNA después de la transducción de estas neuronas.

Introducción

Las neuronas cerebelosas del gránulo (CGNs) están bien caracterizadas en la cultura y han servido como un modelo eficaz para estudiar la muerte neuronal y desarrollo ¹^,²^,³^,⁴^,⁵^, ⁶. la temprana expresión de los receptores N-metil-D-Aspartato (NMDA) en culturas CGN en vitro hace un atractivo modelo para estudiar la señalización inducida por el NMDA. Activación de estos receptores con NMDA junto con despolarización de la membrana se utiliza para modelar la estimulació....