Análisis de la película del rasgón citoquinas ayuda en el estudio de varias enfermedades oculares. Ensayos multiplexores grano base son sencillas y sensibles y permiten el análisis de múltiples objetivos en muestras con pequeños volúmenes. Aquí se describe un protocolo para rasgar película del cytokine perfilar un uso grano base ensayo múltiple.
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Artículo de método
Perla base ensayo Multiplex para el análisis de perfiles de Cytokine de lágrima
En este artículo
Resumen
Resumen
Película lagrimal es una mezcla compleja de lípidos, proteínas y minerales que cubre la superficie externa del ojo, proporcionando así lubricación, nutrición y protección a las células subyacentes. Análisis de las lágrimas es un área emergente para la identificación de biomarcadores para la predicción, diagnóstico y pronóstico de diversas enfermedades oculares. Lágrimas son fácilmente accesibles y su colección es no invasivo. Por lo tanto, avance de la tecnologías están ganando protagonismo para la identificación de múltiples analitos en lágrimas para estudiar cambios en la composición de la proteína o metabolito y su asociación con condiciones patológicas. Citoquinas de lágrima son biomarcadores ideal para el estudio de la salud de la superficie ocular y también ayudan en la comprensión de los mecanismos de diferentes desordenes superficiales oculares como enfermedad del ojo seco y conjuntivitis vernal. Ensayos multiplexores grano base tienen la capacidad de detectar múltiples analitos en una pequeña cantidad de muestra con una mayor sensibilidad. Aquí describimos un protocolo estandarizado de recolección de muestras de lágrima, extracción y análisis de citoquinas perfiles utilizando una tira basan ensayo multiplex.
Introducción
Lágrimas son producidas por la glándula lagrimal y glándulas accesorias y cubrir la superficie externa del ojo. Película lagrimal consta de una capa de lípidos externa y una capa acuosa interna que incluye proteínas solubles, mucinas y membrana limitada mucinas. Lágrimas prevenir invasión microbiana, suministrar nutrientes y proporcionan lubricación a la superficie ocular. Lágrimas actúan como una interfaz entre el aire y el tejido para el transporte de oxígeno a la córnea. 1 la película lagrimal se compone de proteínas, carbohidratos, lípidos y electrólitos. La asociación entre las proteínas de la lágrima con enfermedades oculares y sistémicas....
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Protocolo
los protocolos utilizados en este estudio fueron aprobados por la Junta de revisión institucional de Tan Tock Seng Hospital, Singapur.
1. análisis del Cytokine del rasgón
- colección de lágrimas:
- pedir el tema para sentarse cómodamente en una silla de examen y coloque su cabeza contra la cabecera.
- Pedir el tema para ver, cuidadosamente abrir las tiras de Schirmer (hechas de papel de filtro Whatman no. 41) y coloque el extremo redondeado de la tira en la bóveda inferior del ojo e instruir el tema cerrar los ojos durante 5 minutos. Mientras recogía las lágrimas toman gran cuidado para minimizar el....
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Resultados
Se recolectaron muestras de desgarro de 8 ojos de 4 sujetos sanos utilizando tiras de flujo lagrimal y niveles del cytokine fueron analizados utilizando el protocolo mencionado. Todos los sujetos eran varones y la edad de los cuatro temas fue de 36, 42, 44 y 52 años respectivamente. Salud de superficie ocular y ojo seco la enfermedad fue evaluada por ensayos clínicos (rotura de película lagrimal tiempo, Schirmer prueba, tinción corneal, tinción conjuntival, examen de la glándula meibomian.......
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Discusión
Las citoquinas son pequeñas proteínas de secreción celulares y potentes moduladores inmunes, regula las respuestas inmunitarias. 32 los perfiles de expresión de varias citoquinas en el desgarro las muestras están relacionadas con diversas condiciones patológicas del ojo y estudios sobre citocinas perfiles ayudan a comprender los mecanismos de patogénesis de la enfermedad, determinar el estado de salud ocular, severidad de la enfermedad, diagnóstico y evolución. 2 ,
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar. Ningún interés financiero o conflicto de intereses.
Agradecimientos
El trabajo de investigación fue apoyado por el centro de Tan Tock Seng Hospital personalizado semilla financiamiento programa 2015; Beca de piloto de Instituto de investigación de Singapur ojo y Tan Tock Seng Hospital echada para fondo de beca.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Milliplex MAP citoquina humana / panel de perlas magnéticas de quimiocina -1 kit | Merck, EE. UU. | HCYTOMAG-60K-41 | |
| Flexmap 3D instrumento luminex | Luminex Corp, Austin, TX, EE. UU. | ||
| software xPonent | Luminex Corp, Austin, TX, EE. UU. | ||
| RBXGenerador software | BIO-RAD, Francia | ||
| Bio-Plex Manager 6.1 | BIO-RAD, Francia | ||
| Agitador de placas | Corning, EE. UU. | ||
| Lavadora de microplacas TECAN | Tecan, Suiza | HydroSpeed | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries inc, EE. UU. | G560E | |
| Pipetas | Mettler Toledo, CA, EE. UU. | ||
| Tubo de microcentrífuga de 1,5 ml | Axygen, EE. UU. | MCT-150-C | |
| Tira de prueba de flujo lagrimal Schirmer | Eye Care and Cure, EE. UU. | 101657 | |
| Kit de calibración Flexmap 3D | Luminex Corp, Austin, TX, EE. UU. | 40-028 | |
| Kit de verificación Flexmap 3D Luminex | Corp, Austin, TX, EE. UU | . 40-029 | |
| Sillón |
Referencias
- Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. J Ophthalmol. 7542929, (2016).
- von Thun Und Hohenstein-Blaul, N., Funke, S., Grus, F. H. Tears as a source of biomarkers for ocular and systemic diseases. Exp Eye Res. , 126-137 (2013).
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Reimpresiones y permisos
