Método optimizado de LC-MS/MS para el análisis de alto rendimiento de las muestras clínicas de Ivacaftor, sus principales metabolitos y Lumacaftor en fluidos biológicos de pacientes con Fibrosis quística

Resumen

Combinación de ivacaftor y ivacaftor lumacaftor son dos nuevos fármacos de CF. Sin embargo, todavía hay una carencia de entendimiento sobre su PK/PD y farmacología. Presentamos una técnica de HPLC-MS optimizada para el análisis simultáneo de ivacaftor y sus principales metabolitos y lumacaftor.

Resumen

Defectos en el regulador de conductancia trans membrana de fibrosis quística (CFTR) son la causa de la fibrosis quística (FQ), una enfermedad con manifestaciones pulmonares mortales. El ivacaftor (IVA) y combinación de ivacaftor-lumacaftor (LUMA) son dos nuevos medicamentos avance CF que modulan directamente la actividad y el tráfico de la proteína CFTR defectuosa. Sin embargo, todavía hay una falta de entendimiento en los parámetros farmacocinéticos/farmacodinámicos y la farmacología de ivacaftor y lumacaftor. La técnica de HPLC-MS para el análisis simultáneo de las concentraciones de ivacaftor, hidroximetil-ivacaftor, ivacaftor-carboxylate y lumacaftor en fluidos biológicos en pacientes que reciben la combinación estándar de ivacaftor o ivacaftor-lumacaftor la terapia ha sido desarrollada por nuestro grupo y validado parcialmente a las normas de la FDA. Sin embargo, para permitir el análisis de alto rendimiento de un mayor número de muestras de pacientes, nuestro grupo ha optimizado el método divulgado a través de una columna de cromatografía de fase inversa de tamaño de poro más pequeño (2.6 μm, C8 100 Å; 50 x 2,1 mm) y un sistema solvente degradado ( 0-1 min: 40% B; 1-2 min: 40-70% B; 2-2.7 min: en 70% B; 2.7-2,8 min: 70-90% de B; 2,8-4,0 min: 90% lavado de B; 4.0-4,1 min: 90-40% B; 4.1 6.0 min: en 40% B) en lugar de una elución isocrática. El objetivo de este estudio era reducir el tiempo de análisis HPLC-MS por muestra dramáticamente de ~ 15 minutos a sólo 6 minutos por muestra, que es esencial para el análisis de una gran cantidad de muestras de pacientes. Este método conviene será de gran utilidad para estudios en las relaciones exposición-respuesta de estas drogas de CF de avance.

Introducción

La fibrosis quística (FQ) es una enfermedad genética común que implica las glándulas exocrinas de la mucosa del pulmón, hígado, páncreas y los intestinos causando insuficiencia multiorgánica progresiva, como una disminución en la función pulmonar y la insuficiencia pancreática^{1, 2,3}. Ivacaftor (IVA) es el primer Food and Drug Administration (FDA-US) y Agencia Europea de medicamentos (EMA) aprobó fibrosis quística trans membrana conductancia regulador (CFTR) potenciador de drogas, con eficacia clínica se manifiesta produciendo un significativo mejora la función pulmonar en co....

Protocolo

aprobación de ética se obtuvo de Monash University humano investigación ética Comité (MUHREC).

1. aplicación de la prueba: toma de muestras de paciente

1. registrar el tiempo cuando el paciente toma la dosis estándar de 150 mg el ivacaftor o ivacaftor 125 mg /lumacaftor 200 mg.
2. Nota abajo el tiempo exacto cuando se recoge la muestra de sangre del paciente.
   Nota: Se recomienda recoger muestras de 4-5 en un transcurso de tiempo 24 h. Si la colección de solo muestra es posible, el momento indicado es 2.5-4 h post ivacaftor o ivacaftor-lumacaftor combinación de dosificación como C _máximo las concentraciones ....

Resultados

Recientemente hemos reportado un método, validado parcialmente a las normas de la FDA, en un triple cuadrupolo LC-MS y un sistema de detector HPLC, usando una columna C8 (5 μm, 3,9 x 50 mm diámetro interior) con la fase móvil que consiste en 100% ACN y 0.1% de ácido fórmico en agua (40: 60 v/v) con un caudal de 1 mL/min. Se observó una correlación linear de los picos sobre un rango de concentración de 0,01 a 10 μg/mL en plasma humano para todos los metabolitos, ivacaftor, Iva-M1, M6 Iva y lumacaftor¹⁴

Discusión

Como se informó anteriormente, nuestro grupo tiene por primera vez desarrollado y validado un método de HPLC y LC-MS para la detección y cuantificación de ivacaftor y sus principales metabolitos hidroximetil-IVA M1 (activo) y el IVA-carboxylate M6 (inactivos); y lumacaftor en el plasma y el esputo de pacientes de CF¹⁴. El análisis divulgado previamente por nuestro grupo fue utilizado con éxito para cuantificar la concentración de LUMA, IVA, IVA-M1 y M6 de IVA en el plasma y el esputo de pacientes .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
IVA (Cat#S114)	SelleckChem (Estados Unidos).
LUMA (Cat#S1565)	SelleckChem (Estados Unidos).
Carboxilato de IVA (Cat# 510242247CS)	Clearsynth (Canadá).
hidroximetil-IVA (Cat# 510240849CS)	Clearsynth (Canadá).
Metanol (MeOH, grado LC-MS),	Sigma-Aldrich
acetonitrilo (ACN, grado LC-MS)	Sigma-Aldrich
(FA)	Sigma-Aldrich
de triple cuadrupolo Shimadzu 8030 LC-MS
Phenomenex Kinetex (2.6 y micro; m C8 100 Å; 50 y veces; 2,1 mm)
(Filtro en línea KrudKatcher Ultrea HPLC, filtro de profundidad de 0,5 m x 0,004 pulgadas de diámetro interior).
Tubo de microcentrífuga de polipropileno (VWR) de 1,5 mL.
Centrífuga Eppendorf 5430
Filtro de jeringa de 13 mm (0,45 y micro; m nylon, GRACE, EE. UU.)
[Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 y micro; L, tabiques de PTFE/silicona].

Ácido fórmico