Evaluación de la Homeostasis dopaminérgica en ratones por medio de análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento y absorción de la dopamina Synaptosomal

Kathrine L. Jensen; Annika H. Runegaard; Pia Weikop; Ulrik Gether; Mattias Rickhag

doi:10.3791/56093

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Artículo de método

Evaluación de la Homeostasis dopaminérgica en ratones por medio de análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento y absorción de la dopamina Synaptosomal

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DOI:

10.3791/56093

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21 de septiembre de 2017

Kathrine L. Jensen¹ , Annika H. Runegaard¹ , Pia Weikop² , Ulrik Gether¹ , Mattias Rickhag¹

¹Molecular Neuropharmacology and Genetics Laboratory, Lundbeck Foundation Center for Biomembranes in Nanomedicine, Department of Neuroscience and Pharmacology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ²Laboratory of Neuropsychiatry, Psychiatric Center Copenhagen and Department of Neuroscience and Pharmacology, University of Copenhagen

En este artículo

Resumen

Absorción de la dopamina Synaptosomal y cromatografía líquida de alto rendimiento representan experimental las herramientas de análisis para investigar la homeostasis de la dopamina en ratones mediante la evaluación de la función de transportador de la dopamina y los niveles de dopamina en el tejido estriado, respectivamente. Aquí presentamos los protocolos para medir contenido de tejido de dopamina y evaluar la funcionalidad del transportador de dopamina.

Resumen

Dopamina (DA) es un neurotransmisor modulador controla la actividad motora, los procesos de recompensa y la función cognitiva. Deterioro de la neurotransmisión dopaminérgica (DAergic) está fuertemente asociado con varias enfermedades asociadas del sistema nervioso central como la enfermedad de Parkinson, trastorno de hiperactividad de déficit de atención y adicción de drogas¹^,² ^,³^,⁴. Delinear los mecanismos de la enfermedad que implica desequilibrio DA es críticamente dependiente de modelos animales para imitar los aspectos de las enfermedades, y así protocolos que evalúan las partes específicas de la homeostasis de la DA son importantes para proporcionar nuevos conocimientos y posible terapéutica objetivos para estas enfermedades.

Aquí, presentamos dos protocolos experimentales útiles que al combinarse proporcionan datos funcionales sobre el sistema de DAergic en ratones. Parámetros bioquímicos y funcionales en la homeostasis de la DA se obtienen a través de la evaluación de los niveles de DA y dopamina transportador (DAT) funcionalidad⁵. El sistema DA la investigación, la capacidad para medir confiablemente los niveles endógenos de DA del cerebro adulto es esencial. Por lo tanto, presentamos cómo realizar la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) en tejido cerebral de los ratones para determinar niveles de DA. Realizamos el experimento en el tejido estriado dorsal (dStr) y Núcleo accumbens (NAc), pero el método es también adecuado para otras áreas del cerebro DA inervados.

DAT es esencial para la recaptación de DA en la terminal presináptica, así control de la actividad temporal y espacial de DA. liberado Conocer los niveles y funciones de DAT en el cuerpo estriado es de gran importancia cuando se evalúan DA homeostasis. Presentamos un protocolo que permite deducir simultáneamente información sobre niveles de superficie y la función usando un análisis de absorción de synaptosomal⁶ DA.

Los métodos actuales combinados con protocolos estándar immunoblotting proporcionan el investigador con las herramientas pertinentes para caracterizar el sistema de DAergic.

Introducción

Dopamina (DA) es un neurotransmisor modulador fundamental de comportamiento motor, recompensa y función cognitiva¹^,⁷^,⁸^,⁹. Los desequilibrios en la homeostasis de DA están implicados en varias enfermedades neuropsiquiátricas tales como trastorno por déficit de atención con hiperactividad, la adicción a las drogas, la depresión y la enfermedad de Parkinson¹. DA se libera desde la neurona presináptica a la hendidura sináptica, donde ata a y activa los receptores en la membrana pre y postsináptica, transmitir aún más la s....