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todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por un Comité de ética de investigación clínica local en Hong Kong.
Nota: por simplicidad, los equipos enumerados en la Tabla de materiales se utilizan para ilustrar los procedimientos de la proyección de imagen retiniana y posterior análisis. Medición de parámetros vasculares retinianos se ilustra usando Singapur I buque evaluación programa (SIVA) 17 (versión 4.0, Universidad Nacional de Singapur). Sin embargo, cabe señalar que un conjunto diferente de equipo se puede adoptar como los principios subyacentes siguen siendo similares.
1. preparar los temas para la proyección de imagen retiniana
- dilatar los temas ’ alumnos utilizando un agente midriático. Espere al menos 15 minutos establecer la suficiente dilatación de la pupila.
2. Medir los parámetros vasculares retinianas de fondo fotografías utilizando un programa de análisis asistido por computadora
figura 1: Diagrama esquemático que muestra los procedimientos de medición de parámetros vasculares retinianos. (A) obtener fotografías de fondo centrado en el disco óptico con una cámara fotográfica de fundus. figura 1A y figura 2A son dos fotografías del fondo con una calidad óptima. (B) cargar las fotografías de fondo en el servidor en la nube y entrar en detalles de estudio pertinentes, incluyendo el factor de conversión de imagen (ICF). Otros programas de análisis asistido por ordenador pueden utilizar los métodos no basados en la nube para organizar y almacenar las imágenes. (C) abrir la foto de fondo en el programa de análisis asistido por computadora. (D) Marque la posición del centro del disco óptico y (E) pronto el software automáticamente detecta el borde del disco óptico y coloque una rejilla de medición. Construcción (F) trazos de buque basan en los caminos de la embarcación y coloque el recipiente cubre para calcular los diámetros de los vasos. (G) ajuste el trazos de recipiente incorrecto y un recipiente cubre manualmente. Medida (H) un espectro de parámetros vasculares retinianos, como buque calibres, tortuosidad, dimensión fractal y bifurcación. (D) paso a paso (F) y (H) se puede realizar automáticamente por algunos programas de análisis asistido por computadora. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- Capturar fotografías del fondo usando una cámara fotográfica de fundus.
Programa
- vuelta en la cámara fotográfica de fundus y puesta en marcha la captura de imágenes en el ordenador. Apoyar la barbilla del sujeto correctamente sobre la mentonera con el frente contra la cinta de la cabeza. Mueva la palanca de control para alinear el haz de luz adecuada para el tema ’ pupila s.
- Alinee los puntos de iluminación hasta tanto aparezcan más pequeñas en ambos lados en el visor. Mover el objetivo de la fijación externa para orientar el tema ’ s los ojos hasta que el disco óptico está en el centro del visor y las regiones de interés (ROI) dentro de los límites. Ajuste la perilla de enfoque para enfocar en la retina.
- Tener el tema bien mira el objetivo de la fijación externa y asegurar el tema ’ ojos de s no se llenaron de lágrimas.
- Oprima el botón de disparo del obturador para capturar una imagen ( figura 1A).
- Comprobar la calidad de la fotografía del fondo capturada, utilizando figura 2A como estándar. Deseche la imagen y repetir el proceso de adquisición de imagen (es decir, paso 2.1.1 a 2.1.4) si el alumno es poco dilatados ( figura 2B), el disco óptico no está en el centro de la imagen ( figura 2), o la imagen está fuera de foco ( Figura 2D).
- Guardar la imagen en formato TIFF con resolución gradable (es decir, aproximadamente 3.000 píxeles x 2,000 píxeles, en más de 150 dpi).
Nota: El protocolo puede ser una pausa aquí.
- Repetir pasos 2.1.1 a 2.1.6 para adquirir fotografías del fondo para otros temas.
- Seleccionar una muestra de 10% de imágenes al azar y medir la altura de discos ópticos en estas imágenes ( figura 3). Calcular el factor de conversión de imagen (ICF) mediante la fórmula:
ICF = μm 1.800 / (promedio de altura de píxel de discos ópticos de las imágenes muestreadas).
- Cargar las fotografías capturadas del fondo en el servidor en la nube e introduzca los datos de estudio pertinentes, incluyendo el factor de conversión de imagen (ICF) ( figura 1B).
Nota: El protocolo se puede detener aquí. Otros programas de análisis asistido por ordenador pueden utilizar otros métodos no basados en la nube para organizar las imágenes y grabar el ICF.
figura 2: fotografías del fondo de calidad óptimo y subóptima. La calidad de la imagen de una fotografía de fondo de ojo debe comprobarse inmediatamente después de la adquisición de la imagen, como la calidad de la imagen afecta directamente a la posterior medición de parámetros vasculares retinianos. La imagen debe ser descartada si se observa uno de estos artefactos. Estas imágenes fueron capturadas usando una cámara fotográfica de fundus 50°. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
figura 3: cálculo del factor de conversión de imagen (ICF). Para calcular el ICF, seleccionar al azar una muestra de 10% de las imágenes del estudio (paso 1). Luego, medir la altura de discos ópticos (en píxeles) de las imágenes de muestra (paso 2). Calcular el ICF utilizando la fórmula: ICF = 1800 μm / (promedio de altura de píxel de discos ópticos de las imágenes muestras), en 1800 μm es aproximadamente la altura de un disco óptico normal (paso 3). Resolución de imagen y efecto de aumento diferencia de cámara a cámara, es necesario calcular un ICF precisa para cada cámara. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- abre la foto de fondo en un programa de análisis asistido por computadora. Construir trazos del vaso y poner cubiertas de vasos de la vasculatura retiniana.
Nota: En esta sección, el programa de SIVA se utiliza para ilustrar los procedimientos. Sin embargo, el programa SIVA puede sustituirse por otros programas de análisis asistido por ordenador disponible. Además, 2.2.2 a 2.2.3 los pasos son realizados automáticamente por algunos análisis asistido por ordenador programas cuando una fotografía de fondo de ojo es abierto (es decir, paso 2.2.1).
- Abrir la fotografía del fondo con el programa de análisis asistido por ordenador ( figura 1).
- Marque la ubicación del centro de disco óptico ( figura 1).
- Haz clic en el “ centro OD ” el botón en el panel izquierdo de la función, el cursor del ratón se sustituirá por un círculo verde.
- Mueva el círculo verde hacia el centro del disco óptico (OD) y un clic izquierdo para fijar el círculo.
- Sugerirán el software automáticamente coloca una rejilla de medida, construir la y trazos de la embarcaciónrecipiente y cubre ( Figura 1E y 1F).
Nota: Cubiertas del buque son las líneas de medición que estiman el ancho aproximado de las luces internas de los vasos.
- Haz clic en el “ encontrar OD ” botón para solicitar el software para detectar el borde de OD y colocar cuatro círculos concéntricos como una red de medición, en función de la posición del centro OD.
- Haga clic en el “ proceso de ” el botón para iniciar el proceso de seguimiento automático de la nave.
- Trazos de recipiente incorrecto ajuste manualmente. Comenzar la inspección de la 12 o ’ reloj posición en forma derecha para asegurarse de que se verifican todos los trazos de buque.
- Compruebe que el disco óptico se puede detectar con precisión y la red de medición está correctamente colocada. Ajuste la rejilla de medición manualmente siguiendo los pasos de 2.2.2 a 2.2.3, si el círculo más interno no describen con precisión el borde del disco óptico ( Figura 4A).
- Haga clic para seleccionar tracing(s) de vasos etiquetados con el tipo de recipiente incorrecto (arteriolas y vénulas) y haga clic en el “ ype del buque (T) ” botón para cambiar el tipo de buque.
Nota: Las arteriolas son etiquetadas en rojo y vénulas son etiquetados en azul. Las arteriolas pueden distinguirse de vénulas partiendo de sus diferencias fisiológicas. Por ejemplo, vénulas son generalmente más oscuro en color y más ancha que las arteriolas. Los buques con el mismo tipo de recipiente generalmente no se cruzan entre sí.
- Extender vasos incompletos registros de encabezamientos secundarios siguiendo pasos 2.3.3.1 a 2.3.3.2 ( Figura 4B).
- Usar el cursor para hacer clic en el extremo distal de la localización de vasos incompletos. Izquierda haga clic en puntos a lo largo de la ruta de buque para ampliar el trazo de la embarcación.
- Para el proceso de seguimiento cuando se alcanza el extremo distal del vaso. Detener el trazo en el círculo blanco exterior si la parte distal del vaso cae fuera de la red de medición (ver Figura 4B).
- Ajustar trazos del buque si las trayectorias de la nave no se trazan correctamente en el sitio de cruce ( figura 4).
- Haga clic en el “ seleccionar ” el botón y luego haga clic en el punto incorrecto de la localización de la embarcación. Haga clic en el “ Seg Brea(k) ” botón para desconectar la localización del buque en el punto seleccionado. Seleccionar el segmento desconectado y haz clic en el “ Seg (Del) ” botón para eliminar lo
- Volver a construir un nuevo trazo de buque pasos 2.3.3.1 y 2.3.3.2.
figura 4: errores comunes de auto-tracing. El trazo de la nave automática no es completamente exacto y ajustes manuales se requieren para garantizar la exactitud de la medición. Esta figura muestra errores comunes de auto-tracing y demuestra resultados óptimos después de ajustes manuales. (A) el centro del disco óptico está incorrectamente marcada y esta desviación de la red de medición, que puede afectar las mediciones posteriores. Idealmente, el círculo más interno de la red de medición debe contornear el borde del disco óptico. (B) trazado de vasos incompletos podría conducir a la incorrecta medición de la dimensión fractal, tortuosidad, etc. que la ruta del buque debe seguirse hasta el final de la nave. Si la parte distal del vaso cae fuera de la red de medición, el trazo puede ser interrumpido en el círculo blanco exterior. (C) recipiente trazos en los sitios de cruce están sujetos a una mayor tendencia de error y por lo tanto requieren especial atención. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- Coloque cubiertas del buque en todos los segmentos de vasos y desactivar manualmente las cubiertas incorrectas.
- Haz clic en el “ encontrar cubre ” botón para cubiertas de buques en todos los segmentos del vaso automáticamente.
- Compruebe si todas las cubiertas de buques están correctamente colocadas. Botón izquierdo del ratón y arrastre el cursor para desactivar el recipiente cubre si las cubiertas no son colocadas perpendicularmente a las paredes del recipiente ( figura 5A), la ruta del buque es oscurecida por otra nave ( figura 5B), o la sobreestimar o subestimar el ancho del lumen del vaso ( figura 5).
figura 5: cubre vaso incorrecto. Esta figura muestra ejemplos de cubiertas de nave incorrecta que deben ser desactivadas y excluidos de la medición posterior. Cubiertas del buque deberían ser desactivadas si no son perpendiculares a los vasos (A). Además, cubiertas de la nave también se desactiva si el buque está rastreando se oculta en otro recipiente (B), o las cubiertas del buque no pueden representar el ancho aproximado del recipiente (C). haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- medir parámetros vasculares retinianos de los trazados del buque y las cubiertas del buque
Nota: paso 2.5 se realiza automáticamente por un programa de análisis asistido por computadora.
Diámetros - etiqueta del disco de área 0.5-1.0 de la margen del disco óptico como zona B y los diámetros de zona 0.5-2.0 disco lejos del margen del disco óptico como zona C 18 ( figura 6A), según la protocolo modificado de riesgo de aterosclerosis en comunidades (ARIC) estudio 19.
- Calibre vascular retiniano de la medida de zona B y zona C, utilizando un método ampliamente adoptado que es modificado a partir de la ARIC estudio 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 ( Figura 6B).
- Medir las longitudes de las cubiertas del buque en las seis mayores arteriolas y las vénulas más grande seis para calcular el calibre de los vasos retinianos.
- Resumir la retiniana arteriolar y venular calibres como arteria retiniana central equivalente (CRAE) y retiniana central de la vena respectivamente equivalente (CRVENI) 17, usando el Knudtson revisado – fórmula de Parr-Hubbard 18 , 19.
- identificar todos los buques en zona C con un anchura > 40 μm. calcular la tortuosidad arteriolar y venular retiniana de la integral de la curvatura total de cuadrado a lo largo de los trazados de buque y normalizar el valor con la longitud de arco total reverencia y puntos de inflexión 27 , 28.
- Calcular el total, arteriolar, y dimensiones fractales venular de la zona C, utilizando lo establecido “ método de box-counting ” 29 , 30 , 31.
- Dividir la imagen en una serie de igual tamaño cuadrados.
- Contar el número de cajas que contienen una sección de los trazados de buque.
- Repetir el proceso con una serie de cuadrados de igual tamaños con tamaños diferentes.
- Trazar el logaritmo del número de cajas que contenían los trazados del buque contra el logaritmo del tamaño de las cajas y calcular la pendiente de la recta resultante, esto es la dimensión fractal.
- Identificar los vasos con la primera bifurcación en la zona C y calcule los ángulos (θ) subtendidos entre el primer dos hija vasos 32 ( figura 6). Calcular el valor medio para obtener el ángulo de ramificación promedio.
- Calcular el coeficiente de ramificación de la zona C mediante la fórmula:
(d 1 2 + d 2 2) /d 0 2, donde d 0 es el calibre de tronco media y d 1 y d 2 son los calibres de rama media ( figura 6).
- Cerrar la ventana de calificacion. Haga clic en “ enviar ” en el cuadro de diálogo emergente para cargar la imagen graduada en el servidor basado en la nube y registrar los parámetros vasculares retinianos automáticamente medidos.
figura 6: cuantificación de la vasculatura retiniana. (A) zona B (definido como 0.5-1.0 disco diámetros de distancia del margen del disco) se utiliza para medir calibres de buque de la zona B de acuerdo con el riesgo de aterosclerosis en las comunidades de estudio. Zona C (definido como 0.5-2.0 disco diámetros de distancia del margen del disco) se utiliza para medir calibres de buque de la zona C y un espectro de los parámetros de la red vascular retiniana (por ejemplo, tortuosidad, dimensión fractal y bifurcación). (B) cubiertas de barco son líneas de medida utilizadas para calcular el calibre de los vasos retinianos (o diámetros). Cubiertas del recipiente incorrecto se deben excluir manualmente de la medición. (C) para todos los buques que tienen su primera bifurcación dentro de la zona C, el programa automáticamente medidas de los ángulos de ramificación (θ) de la primera bifurcación. Además, el coeficiente de ramificación también se calcula mediante la fórmula: coeficiente de ramificación = (d 1 2 d 2 2) /d 0 2, donde d 0 es el calibre del tronco y d 1 y d 2 son los calibres de rama. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
3. evaluar el espesor del GC-IPL y RNFL

figura 7: diagrama esquemático que muestra los procedimientos de medición de grosor RNFL y GC-IPL. Tomografía de coherencia óptica (OCT) puede utilizarse para medir espesores de la capa plexiforme del interior de la célula del ganglio (GC-IPL) y la capa de fibras nerviosas retinianas (RNFL). (A, B) Medir los espesores de GC-IPL y RNFL usando el built-in “ cubo macular ” y “ cubo de disco óptico ” escaneo protocolos respectivamente. (C, D) Comprobar la calidad de la imagen inmediatamente después de la adquisición de la imagen. Deseche la imagen y repetir el análisis si la señal es menor que 6, o artefactos de movimiento son detectados. (E, F) Entonces, sugerirán el el programa de análisis incorporada automáticamente analizar el resultado del análisis y generar un informe para la interpretación. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- Realizar la adquisición de imágenes mediante tomografía de coherencia óptica (OCT).
- Abra el programa de OCT y seleccione el “ cubo Macular ” análisis de protocolo para iniciar una nueva exploración macular ( Figura 7A).
- Ubique el alumno en la vista del iris mediante el ajuste de la mentonera. Disminuir la iluminación si el tamaño de la pupila es muy pequeño.
- Haga clic en el “ enfoque automático ” botón y entonces el “ optimizar ” botón para mejorar la calidad de la imagen.
- Mandar el tema a parpadear varias veces inmediatamente antes de iniciar la exploración de.
- Haga clic en el “ captura ” botón para iniciar la exploración cuando se convierte en la frontera que rodea el botón verde. Instruir el asunto para centrarse en el objetivo de la fijación visual durante la adquisición de imagen para evitar artefactos de movimiento.
- Revisar la calidad de la exploración usando 7 Figura como un estándar. Descartar el resultado de la exploración y repetir el análisis si la señal es menor que 6 ( figura 8A), o artefactos de movimiento son detectados (indicado por la discontinuidad de los vasos sanguíneos) ( figura 8B).
- Guardar el resultado de la exploración de.
- Repita los pasos 3.1.1 a 3.1.7 para otro ojo.
- Realizar una exploración de cabeza de nervio óptico con la “ cubo de disco óptico ” exploración siguiente protocolo pasos 3.1.2 a 3.1.9 ( figuras 7B y 7D).
figura 8: resultados subóptimos de tomografía de coherencia óptica. Común los óptimos resultados de la tomografía de coherencia óptica (OCT) incluyen (A) mala señal (valor de la fuerza < 6) y (B) artefactos de movimiento. La calidad de la exploración debe revisarse inmediatamente después de la adquisición de la imagen, y la exploración debe ser repetida si se encuentran estos artefactos. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- generar un listado de análisis del grosor macular de GC-IPL.
- Seleccione el “ cubo Macular ” analizar los registros de ambos ojos en la interfaz de análisis.
- Haga clic en el “ del ganglio célula OU análisis ” para iniciar el algoritmo de análisis automático para determinar el espesor de la GC-IPL de la exploración ( figura 7E).
Nota: Paso 3.2.2 es completado automáticamente por el algoritmo de análisis.
- Generar un 14,13 mm 2 centrado en la fóvea elíptica anillo que tiene horizontales radios internos y externos de 0,6 mm y 2,4 mm, respectivamente y radios interiores y exteriores vertical de 0,5 mm y 2,0 mm, respectivamente.
Nota: El tamaño y la forma del anillo elíptico se ajustan estrechamente a la anatomía macular y por lo tanto corresponden a la zona donde el RGCs son más gruesas en ojos normales 33 , 34. El área dentro del anillo interior del anillo no se mide, como el GC-IPL en esta área es muy delgada.
- Del segmento del límite exterior de la RNFL y el límite exterior de la capa plexiforme interna (IPL) para localizar el GC-IPL ( figura 9).
- Medir el promedio, mínimo y seis sectoriales (superotemporal, superior, superonasal, inferonasal, inferior, inferotemporal) espesores de GC-IPL macular en la fóvea-cenanillo elíptico Rada.
- Comparar los espesores medidos de GC-IPL al dispositivo ’ s pareados por edad normativa interna de bases de datos y generar un mapa de desviación y una significación
- Informe de resultados de la medición en una impresión de análisis.
- Guardar la impresión de análisis en el formato .pdf.

figura 9: capas retinianas, utilizadas para la evaluación de la estructura neuronal retiniana. La capa de fibras nerviosas retinianas (RNFL) se mide mediante el algoritmo de (HNO) cabeza del nervio óptico, mientras que la capa plexiforme del interior de la célula del ganglio se mide utilizando el algoritmo de análisis (GCA) de la célula del ganglio. El algoritmo de HNO segmentos del límite interno y externo de la RNFL para medir el grosor de la RNFL. El algoritmo de GCA detecta el límite exterior de la capa de fibras nerviosas retinianas (RNFL) y la capa plexiforme interna (IPL) para obtener el espesor combinado de la capa de células ganglionares (GCL) y la IPL. Los espesores de GCL y el IPL se miden juntos, como el límite entre GCL y IPL es anatómicamente indistinto. Sin embargo, el espesor combinado de GCL y (es decir, GC-IPL) IPL es todavía indicativo de la salud de RGCs. haga clic aquí para ver una versión más grande de este figura.
- generar la impresión de análisis del grosor RNFL ( figura 7F).
- Seleccionar la “ cubo de disco óptico ” analizar los registros de ambos ojos en la interfaz de análisis.
- Haga clic en el “ HNO y RNFL OU análisis ” para iniciar el algoritmo de análisis automático para evaluar el grosor de la RNFL de la exploración del.
Nota: Pasos 3.3.2.1 a 3.3.2.6 pueden completarse automáticamente por el algoritmo de análisis.
- Mida el grosor de la RNFL en cada punto de análisis y generar un mapa de grosor RNFL.
- Identificar el disco óptico mediante la detección de una mancha oscura cerca del centro de la exploración que tiene un tamaño y forma consistente con el rango de una óptica dto.
- Colocar una rejilla de medición de 3,46 mm de diámetro alrededor del disco óptico en el mapa de grosor RNFL.
- Medida y calcular los cuadrantes cuatro globales, (temporales superiores, nasal y inferior) y grosor RNFL doce hora de reloj parapapillary de la rejilla de medición.
- Comparar los espesores RNFL medidos con el dispositivo ’ s pareados por edad normativa interna de bases de datos y generar un mapa de desviación y un significado.
- Informe de resultados de la medición en una impresión de análisis.
- Guardar la impresión de análisis en el formato .pdf.