Summary
Этот документ дает пользователям в vivo сканеров Микро Компьютерная томография (µCT) как анестезировать, правильно позиционировать и сдерживать задние конечности крыса минимальные движения во время с высоким разрешением изображений большеберцовой кости. Результатом является высокое качество изображения, которые могут быть обработаны для точного количественного определения кости микро архитектуры.
Abstract
Использование в естественных условиях Микро Компьютерная томография (µCT) является мощным инструментом, который включает в себя Неразрушающий изображений внутренних структур при высоком разрешении в живых животных моделях. Это позволяет для повторных изображений со временем же грызунов. Эта функция не только уменьшает общее количество грызунов в экспериментальный дизайн и тем самым снижает между предметом различия, которые могут возникнуть, но также позволяет исследователям оценить продольной или пожизненной ответы на вмешательство. Получить высокое качество изображения, которые могут быть обработаны и проанализированы, чтобы более точно подсчитать результаты кости микро-архитектуры, пользователи в vivo µCT Сканеры должны правильно анестезировать крысы и позиции и сдерживать задних конечностей. Для этого крайне важно, что крыса быть под наркозом на уровень полной релаксации, и что педаль рефлексы будут потеряны. Эти руководящие принципы могут быть изменены для каждого индивидуального крысы, как скорость метаболизма изофлюрановая может варьироваться в зависимости от штамма и тела размер. Правильная техника для изображений в vivo µCT приобретения обеспечивает точное и последовательное измерение кости микро архитектуры в рамках исследований и.
Introduction
Использование в естественных условиях Микро Компьютерная томография (µCT) является мощным инструментом, который включает в себя Неразрушающий изображений внутренних структур в высоких разрешениях с использованием грызунов моделей. Неразрушающий характер в vivo µCT позволяет для многократного изображений же грызунов с течением времени. Эта функция не только уменьшает общее количество грызунов в экспериментальный дизайн и тем самым снижает между предметом различия, которые могут возникнуть, но также позволяет исследователям понять долгосрочные ответы на вмешательство. С использованием µCT неоднократно в естественных условиях эксперименты на мышах и крысах освещены развития изменения в костной ткани микро архитектуры и костной минеральной плотности (BMD) на протяжении периодов в жизни 1,2,3 ,4,5,6,7,8 , а также ответ здоровья костей на мероприятия, такие как диета 9,10, овариоэктомии 7,11 и фармакологических агентов 8,12,13. BMD и ориентировочного общего здоровья костей и риска сохранения перелом кости микро архитектуры в конкретных местах скелета, а именно проксимального отдела голени, бедра и поясничных позвонков, и поэтому основные меры при количественной оценке ответов на вмешательство.
В естественных условиях приобретения изображений µCT включает двухмерных рентгеновских прогнозы, приобретается на разных углов, как источник рентгеновского излучения и детектор вращаться вокруг животного под расследование 14,15. Качество конечного изображения зависит от многих факторов, включая, но не ограничиваясь: выбранные параметры приобретения (т.е., пространственное разрешение, рентген напряжения, тока, шаг вращения, прикладной фильтр, выдержка), ограничения µCT сканер (то есть, на основе сканера артефактов, таких как пыль или кольцо артефакты вызывающие полос или частичный объем эффекты) и правильного позиционирования и сдержанность животного. Первые два из этих факторов может быть манипулирован в некоторой степени пользователя, в зависимости от конкретных сканирование машины, цели исследования и исправления, которые необходимо оптимизировать функции сканера или обработки изображений. Последний из этих факторов, надлежащего позиционирования грызунов до начала сканирования, может быть достигнуто независимо от ограничений на основе сканера или приобретения параметры, которые выбраны для достижения цели, конкретные исследования. В то время как многие публикации, с участием в vivo изображений были опубликованы в литературе 14,,1516,17, стиль классический рукопись такова, что подробная «как» информация не могут быть включены. Таким образом цель этой статьи и видео руководство является заполнить этот пробел. Здесь мы стремимся проинструктировать пользователей в vivo µCT сканеров как анестезировать крыса и позиции и сдерживать задних конечностей для получения высокого качества изображений, которые могут быть проанализированы, чтобы более точно подсчитать результаты кости микро-архитектуры.
Предотвращая препятствия рентгеновского пучка через объекты, за исключением задних конечностей необходимы для количественной оценки наиболее точные BMD и микро архитектуры значения костей. Как рентгеновские лучи проходят через объекты и тканей различной толщины и плотности, некоторые из рентгеновских снимков, (т.е. ослабленный) поглощается материалы, они проходят через. Поскольку плотность измеренной массы образца зависит от его толщины и присутствие и толщины окружающих тканей, важно, что калибровка фантомы, используемый для определения БМД проверяются таким же образом. Таким образом если рентгеновского пучка пройти через объекты (то есть, хвост), до или после прохождения через области интереса, эти объекты будут поглощать некоторые из рентгеновского энергий и будет вмешиваться с изображением передачи приобретенных. Кроме того эти сканы будет очень трудно имитировать при сканировании призраки, которые должны напоминать образец сканирования. В результате эти затухания различия приводят к неточности в оценке измерений про кости. Таким образом для простоты и точности, лучше ограничить количество препятствий между источник рентгеновского излучения, региона интерес и рентгеновский детектор.
Продольная Оценка структуры кости от вмешательства в доклинических моделях связаны неоднократные наркоза животного, чтобы ограничить их передвижение при сканировании протоколы. Существует несколько методов общей анестезии для того, чтобы подавить животных, проходят проверку µCT, включая инъекционные и вдыхаемые анестезия 1,2,4,5,6, 12. в отличие от вдыхаемые анестетики, таких как изофлюрановая, неоднократные наркоз, используя инъекционные анестетики вызывают снижение веса тела, хирургические терпимости и значительные изменения в других физиологических параметров в грызунов, специально крысы и морских свинок, предлагая значительные противопоказания для повторил использования 18,19,20. В то время как изофлюрановая является крайне неустойчивым и позволяет для быстрой индукции и восстановления, инъекции анестетиков производят различные уровни анестезии и время под наркозом зависит от штамма, секс, состав тела, постился государства и суточного цикла животное. Инъекционные анестетики также создают дополнительные препятствия для их использования, как высоко они регулируются национальными руководящими органами. Ингаляционная анестезия однако, включает прямую поставку в дыхательной системы; Этот метод позволяет быстрее индукции и восстановления время и лучший контроль длины и глубины анестезии19,20. Ограничения для ингаляционной анестезии метод связано его требование для испарения специализированное оборудование и некоторые изменения частоты сердечных сокращений и артериального давления во время индукции, поддержания и восстановления 18,19.
Protocol
Это исследование был одобрен животное уход Комитета Брок университета и в соответствии с руководящими принципами, установленными Канадского совета по животных уход 21.
1. обезболивание с помощью изофлюрановая газ
- Предварительного заполнения палата инкубации из акрилового стекла с высокого качества O2 со скоростью непрерывный поток примерно 1-2 Л/мин от анестезии машины (дополнительный рис. 1).
- Сначала передать инкубации палата хвост крысы и закройте крышку камеры инкубации для создания герметичное уплотнение.
- Begin для заполнения палата инкубации с ветеринарно класса изофлюрановая в 3-4% v/v растворяют в2 O непрерывный поток скоростью 1-2 Л/мин (дополнительный рис. 1).
Предупреждение: Отходы анестезии газов может неблагоприятно повлиять на обработчики. Мусорщик системы (т.е., угольный фильтр или выхлопных газов непосредственно в Зонта) всегда должны быть на месте. - Когда крысы уже не мог стоять, передачи, крысы маску или носовой конус приема 1-3% изофлюрановая растворяют в2 O потока со скоростью 1-2 Л/мин крыс прежде всего дышать через нос и так, до тех пор, как нос покрыт маска или нос конус, будет достаточной анестезии доставки.
- Применить глазные смазки к тонкие мембраны глаза, чтобы защитить их от любой газ, бежал изофлюрановая.
Примечание: Убедитесь, что глазные смазки без антибиотиков, как это может повлиять на результаты от вмешательства. - Измерить глазной (мигает ответ к нежной стимуляции глазной открытия глаз) и педаль (Снятие задних конечностей в ответ на ущемление) рефлексы; с увеличением глубины анестезии, глазной рефлекс будет быть отсутствует перед педаль рефлексов (дополнительная цифра 2).
- Когда достигнут надлежащий уровень анестезии и крыса потерял глазной и педали рефлексы, поддерживать крысы на 0,5-2% изофлюрановая растворяют в2 O со скоростью потока 1-2 Л/мин.
- Постоянно контролировать частоту дыхания крысы на протяжении всей процедуры, сохраняя константа визуального на крыс, либо непосредственно с внутренней системой мониторинга, или через live видео корма (дополнительный рис. 3).
2. Позиционирование и сдержанность крыса задние конечности
- Положите крысу в лежачем положении на углерод волокна сканер кровать (дополнительное рисунок 4).
- Сдерживать правой ногой в податливый, пенные трубки, с пальцами, расширяя из конца трубы. Примените зубоврачебный воск держать ноги плотно внутри пены и ленты трубки плотно закрыты. Убедитесь, что диаметр трубки, держа ноги достаточно прочно вписываться в пластиковую трубку.
- Вставьте пластиковую трубку в рентгеновский сканер кровати (дополнительная цифра 5).
- Расширение крыса задних конечностей, до тех пор, пока это тугой. Не чрезмерно расширять ГЭН относительно причинить никакого вреда для крысы (дополнительная цифра 5), как это может вызвать непроизвольные движения в конечностях из-за затрудненное дыхание.
- Вытяните левую ногу (не проверенных задних конечностей) вместе с хвостом из сканирования поля зрения и сторону туловища, от расширенной ноги проверяемых.
- Закрепите левую ногу (не проверенных задних конечностей) и хвост в положении с помощью клейкой ленты. Не использовать что-нибудь более или менее липким (т.е., клейкая лента или лента художника), как эти материалы либо вред крыса, когда они удалены (клейкой лентой) или не обеспечивают достаточно сильной фиксации (ленту художника) (дополнительный рисунок 6).
- Закрепите корпус крыса в позицию на бедра, плечи и голова с липкой лентой. Закрепите маску или носовой конус для крыс (дополнительный рисунок 6).
Примечание: Пятно с клейкой клейкой ленты, чтобы удалить свою способность придерживаться крыса меха. Не пятно концы липкой лентой, так что он может быть прочно прикрепленной к сканирования кровати. - Оберните крыса в ПТО обертывание для ограничения потерь тепла (дополнительный рисунок 6).
Примечание: Когда под общим наркозом, крысы потерять тепла быстро из-за их большой поверхности тела вес коэффициент 19,20. - Постоянно контролировать частоту дыхания крысы на протяжении всей процедуры, сохраняя постоянный визуальный на крыса (либо непосредственно, либо через live видео корма).
Примечание: Здесь настройка занимает 5 минут, сканирования приобретение является приобретение параметр зависимой, и время восстановления составляет 60 минут. - Перейти к получить изображения µCT.
Примечание: Точные спецификации для приобретения сканирования являются специфическими для каждого сканера существует тип, системы программного обеспечения и конкретных исследований вопрос, однако, несколько методологических публикаций всей литературы 1,2 , 9.
3. восстановление от анестезии
- После завершения в vivo µCT сканирование остановить поток изофлюрановая для крыс, но поддерживать поток O21-2 Л/мин.
- Когда крыса восстанавливает управления двигателем (1-2 мин), удалите его из респиратором и позволить ему восстановить индивидуально в клетке, частично размещены на общего назначения грелку на слабом огне. Известно, что крысы уменьшить их температуры тела на 1 ° C при общей анестезии19. Не оставляйте крыса без присмотра, до тех пор, пока он сознание достаточно для поддержания грудной recumbency.
Примечание: Свидетельства из нашей исследовательской группы сообщает, что сразу же после восстановления от изофлюрановая анестезии, крыс и начинают есть, и поэтому важно иметь их питания и воды доступных для них во время восстановления. Хотя мы наблюдали это поведение, неоднократные наркоз не вызывает значительное увеличение в питание потребление или тела вес 1,9.
Representative Results
Этот метод анестезии для крыс и позиционирования и сдержанность задних конечностей для изображений в vivo µCT облегчает приобретение высококачественных изображений для анализа голени микро архитектуры. Правильное позиционирование крыса задних конечностей включает нога полностью расширяется и всей стопы и голеностопного сустава, сдержанный в пены (Рисунок 1A) приводит в отсканированном изображении достаточно высокого качества для анализа (микро архитектуры трабекулярной и корковые Рисунок 1B). Недостаточная размещения и сдержанность задних конечностей (рис. 1 c) может привести к изображения с артефакты движения (рис. 1 d), в то время как хвост, который не удаляется полностью из сканирования поля зрения (Рисунок 1E) будет вмешиваться с X-ray затухание, отсканированные образцы (Рисунок 1F) и изменить измерения BMD и ткани минеральной плотности (ТВД). Любой из этих ошибок размещения приведет к низкое качество сканирования, который не должен быть далее проанализирован. Достижении изображения низкого качества изменит количественная оценка тонкой трабекулярной сети и корковой структуры задних конечностей и будет производить неуместным или неопределенным результатом данных14.
Рисунок 1. Представитель изображения размещения Крыса задних конечностей и соответствующих полученных изображений проксимального отдела голени в поперечном сечении.
(A) правильного размещения Крыса задние конечности с лодыжки полностью сдержанный в пену, продлил ноги и хвост оторвался от голени обеспечивает достаточное качество изображения в (B) сечение голени и трабекулярной и корковые микро архитектуры. (C) неправильное размещение крыса задние конечности с ногой не полностью отведен и лодыжки, не полностью сдержанный в пена может привести к артефакты движения (D), рассматривается как мелирование в поперечном сечении. (E) объекты, вмешиваясь в поле зрения, такие как хвост не отстранилась от голени (F) вмешивается рентгеновского затухания от голени и может привести к изменены про и ПРО ТВД измерений, хотя визуально не видно. В нижнем левом углу панели F показывает часть хвоста в поле зрения, которая мешала рентгеновского луча, который впоследствии передается через голени. Красные пунктирные линии в левой панели указывают поперечного сечения, представлены на правой панели. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Дополнительная цифра 1. Цистит исполнимых изофлюрановая Изофлюрановая анестезии подразделение для оказания 3-4% изофлюрановая растворяют в2 O со скоростью непрерывного потока-1-2 Л/мин для индукции анестезии. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот показатель.
Дополнительная цифра 2. Обеспечение глубины анестезии. Мера педали рефлексов путем сжимать пальцы крыса, получения непрерывной вдыхании цистит через лицевую маску или носовой конус. Ответ боль становится более очевидной, когда нога слегка расширены. Очень сильный щепотки или использования щипцов или зажимы могут вызвать повреждение тканей и поэтому не должны использоваться. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот показатель.
Дополнительная цифра 3. Экран захвата физиологического мониторинга live канал камеры мнение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот показатель.
Дополнительный рисунок 4. Крыса, прокладки в лежачем положении на углерод волокна кровать сканера. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот показатель.
Дополнительная цифра 5. Правой ногой крысы сдержанными в ковкого пены трубка. Правой ногой крысы сдержан в ковкого пены трубка с пальцами, расширяя из трубки (здесь не показан). Пена трубка сдержан в пластиковый держатель (см Таблицу конкретных материалов/оборудования для получения более подробной информации). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот показатель.
Дополнительный рисунок 6. Крыса, закреплены в положении с правой ноги, расширенный прямо. Хвост и левая нога держалку от правой ноги (в сторону туловища), бедра являются безопасными и туловище крысы, завернутый в ПТО обертывание (синий) для ограничения потерь тепла. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот показатель.
Discussion
Этот протокол обеспечивает зрителей с первого подробные руководящие принципы для надлежащего анестезии, размещение и сдержанность крысы в vivo µCT сканирования задних конечностей. Эти руководящие принципы позволяют пользователям в vivo µCT сканирование системы получить высокое разрешение и высокое качество изображения голени, которые могут быть обработаны для количественной оценки 3-мерной кости микро архитектуры. Важнейшие шаги в протоколе, необходимых для обеспечения надлежащего позиционирования и сдержанность включать надлежащее анестезии крыс, а также расширение задние конечности от всех других важных структур до тех пор, пока это тугой, но не в неестественных позиции. Для оптимальной визуализации результатов важно, что крыса быть под наркозом на уровень полной релаксации, и что глазной и педали рефлексы будут потеряны. Кроме того сканирование ноги должны быть продлен и всей стопы и голеностопного сустава должны быть сдержанными в пену. Методы, описанные выше для достижения оптимального позиционирования сканирования ноги будут обеспечивать, чтобы: 1) задних конечностей крыс в рамках исследования последовательно ориентированы в одном направлении, таким образом позволяя рентгеновского пучка пройти через тот же район каждой ноги, как он вращается вокруг образца; 2) как добровольных, так и недобровольных движения задних конечностей не произойдет, что сводит к минимуму возможности для перемещения артефактов вмешиваться с качеством полученных изображений; 3) помех от объектов (то есть, хвост) блокируются, таким образом к минимуму потенциал для эффектов частичный объем произвести неточные БМД и TMD измерений. Эти руководящие принципы могут быть изменены для каждого индивидуального крысы, как скорость метаболизма изофлюрановая и позиционирования может варьироваться в зависимости от штамма и тела размер 22. Наиболее распространенными в vivo сканирование машины предназначены для небольших животных моделей (то есть, мышей, крыс, кроликов, морских свинок) и будет иметь взаимозаменяемые животных этапов разрешения сканирования различных животных размеров. Таким образом они могут разместиться широкий спектр веса тела.
Хотя в vivo сканирование µCT разрешений для крысы быть перемещены и перечитать если изображения, полученные из первоначального сканирования низкого качества, повторить сканирование будет подвергать крысы дополнительных доз радиации и изофлюрановая анестезии для длительного периода времени. Ежемесячные повторяющиеся облучения 600 МГР, сосредоточены на голени Крыса за четыре месяца не вызывать неблагоприятные последствия кости микро архитектуры по сравнению с контралатеральной задних конечностей 1, но это не установить безопасность двух сканирование повторяется в немедленное правопреемства. Дальнейшие ограничения метода, описанного включают в себя необходимость расширить тугой задние конечности с силами, применяется к нему, чтобы держать его до сих пор, которые может вызывать некоторые изменения в структуру костей. В то время как тяжесть сдержанность задние конечности во время сканирования будет зависеть от каждой цели исследования, предыдущие исследования от нашей лаборатории, с участием ежемесячно повторяющихся в vivo µCT изображений одной задние конечности привели к разница в кортикального слоя микро архитектурные параметр, эксцентриситет, по сравнению с контралатеральной задних конечностей, которые не проходят повторное расширение, стабилизации и сканирование 1. Эксцентриситет — это мера эллиптической формы кортикальной кости и изменения в ответ на изменения несущей. Таким образом при использовании этого метода позиционирования и запретительных задних конечностей для повторяется в vivo µCT изображений, рассмотрение следует учитывать при оценке и интерпретации изменяется на микро архитектуры параметры несущей.
Хотя указанные выше руководящие принципы были предоставлены для визуализации и анализа костной ткани, незначительные коррективы в протоколе необходимо при визуализации мягких тканей задних конечностей. В частности путь в котором задние конечности простиралась от туловища и сдержанной должны приниматься во внимание, как нынешняя процедура misshapes ориентации мягких тканей (мышцы, жировая ткань) в ненормальных позиционирования на время проверки. Поэтому когда Экстраполируя эту модель для использования в визуализации мягких тканей конечностей, Хинд, некоторые коррективы следует сдержанность способ уменьшить или устранить изменения в позиционировании в тканях по отношению друг к другу.
Кроме того, руководящие принципы были написаны специально основаны на опыте нашей исследовательской группы, однако, они могут быть изменены для размещения других коммерчески доступные в vivo µCT сканеров. Другие предлагаемые методы позиции и сдерживать задних конечностей могут быть доступны заводом-изготовителем в vivo µCT сканирование системы. Наиболее коммерчески доступных в vivo µCT единиц список полипропиленовые, расширенного пенополистирола, и пластиковые трубы с зубоврачебный воск провести выступающие ноги как приемлемых материалов и методов для усмирения сканирования ноги. Однако метод, представленный в настоящем Протоколе предоставляют более контролируемой и последовательного позиционирования и сдержанность отсканированных ноги и последовательно производит высокое качество изображения. Рекомендации, представленные в рамках нынешнего метода требуют специализированного оборудования, необходимого для анестезии крысы, как испаритель, трубки, маски, индукции камер и кислорода. Хотя оборудование связано с несколько более высокую стоимость, по сравнению с инъекционные анестетики, это позволяет исследователям возможность быстро и точно побудить анестезии на определенных глубинах сознания, которая обеспечивает преимущество над альтернативой методы.
С использованием руководящих принципов, изложенных в рамках нынешнего метода видео, исследователи, используя высокое разрешение в vivo µCT технологий, расследовать их вмешательство интерес будет иметь возможность надлежащим образом и последовательно ориентировать и сдерживать крыса задние конечности для высокой рентгенография качества. Это будет способствовать континуума в поле изображения в vivo µCT приобретения и служат в качестве шага в направлении оптимизации последовательности и точности в рамках исследований и включить сравнение различных исследований в литературе. Аналогичным образом эти протоколы и методы могут быть расширены для использования в других грызунов видов, в том числе мышей, хотя некоторые изменения будет необходимо 2,10. Например сдержанность ноги в пены трубка может включать щиколотку свести к минимуму возможность движения ноги во время сканирования. Кроме того полный ноги впишется в держателе пены. Таким образом пальцы не распространяется из конца держателя, как они делают, когда обеспечение подножия крысы. Кроме того тело мыши не требуют же сдержанность с лентой, как крыса. Меньшие носовой конус может использоваться для поддержания анестезии у мышей во время сканирования. Если меньший носовой конус не доступен, можно обеспечить нитриловая перчатка над доступных носовой конус и сделать небольшой надрез в перчатке, чтобы обеспечить пространство, что может поместиться нос мыши, чтобы обеспечить анестезии при сохранении печать вокруг носа.
В то время как проксимального отдела голени является основной сайт изучение изменений в костную микро структура в крыса, руководящие принципы для надлежащего и последовательного позиционирования других скелетных сайтов, таких как бедра и поясничных позвонков должны расследование и создана для последовательность в литературе. Однако при проведении будущих исследований с участием томография поясничного позвонка, соображения должны проводиться как томография позвоночника обеспечивает облучения для окружающих органах и тканях.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Авторы признают исследований финансирование от обнаружения Грант СЕНТИ (#05573) и Канадский фонд для инноваций (#222084) для финансирования в естественных условиях микро CT. W.E. Уорд — Канада исследований кафедры в кости и развития мышц.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Fresenius Kabi Animal Health | 108737 | |
| Vaporizer | Dispomed | 990-1091-3SINEWA | |
| Scavengers/Charcoal Filters | Dispomed | 985-1005-000 | |
| Micro-CT Scanner | Bruker microCT | SkyScan 1176 | |
| Dental wax | Kerr Dental Laboratory | 623 | |
| Foam (Backer Rod) | Rona | CF12086 | 1”x10’ |
| Plastic tube | Bruker microCT | SP-3010 | |
| Carbon-fiber bed | Bruker microCT | SP-3002 | |
| Vet Wrap/Bandage | Dura-Tech | 17473 | |
| Ophthalmic Gel | OptixCare | 006CLC-4256 | Antibiotic-free |
| Heating pad | Sunbeam | 000731-500-000 |
References
- Longo, A. B., Sacco, S. M., Salmon, P. L., Ward, W. E. Longitudinal use of micro-computed tomography does not alter microarchitecture of the proximal tibia in sham or ovariectomized sprague-dawley rats. Calcif Tissue Int. 98 (6), 631-641 (2016).
- Sacco, S. M., et al. Repeated irradiation from micro-computed tomography scanning at 2, 4 and 6 months of age does not induce damage to tibial bone microstructure in male and female CD-1 mice. Bonekey Rep. 6, 855 (2017).
- Waarsing, J. H., Day, J. S., Verhaar, J. A., Ederveen, A. G., Weinans, H. Bone loss dynamics result in trabecular alignment in aging and ovariectomized rats. J Orthop Res. 24 (5), 926-935 (2006).
- Klinck, R. J., Campbell, G. M., Boyd, S. K. Radiation effects on bone architecture in mice and rats resulting from in vivo micro-computed tomography scanning. Med Eng Phys. 30 (7), 888-895 (2008).
- Laperre, K., et al. Development of micro-CT protocols for in vivo follow-up of mouse bone architecture without major radiation side effects. Bone. 49 (4), 613-622 (2011).
- Brouwers, J. E., van Rietbergen, B., Huiskes, R. No effects of in vivo micro-CT radiation on structural parameters and bone marrow cells in proximal tibia of wistar rats detected after eight weekly scans. J Orthop Res. 25 (10), 1325-1332 (2007).
- Francisco, J. I., Yu, Y., Oliver, R. A., Walsh, W. R. Relationship between age, skeletal site, and time post-ovariectomy on bone mineral and trabecular microarchitecture in rats. J Orthop Res. 29 (2), 189-196 (2011).
- Altman, A. R., et al. Quantification of skeletal growth, modeling, and remodeling by in vivo micro computed tomography. Bone. 81, 370-379 (2015).
- Longo, A. B., et al. Lifelong intake of flaxseed or menhaden oil to provide varying n-6 to n-3 PUFA ratios modulate bone microarchitecture during growth, but not after OVX in Sprague-Dawley rats. Mol Nutr Food Res. 61 (8), (2017).
- Sacco, S. M., Saint, C., LeBlanc, P. J., Ward, W. E. Maternal consumption of hesperidin and naringin flavanones exerts transient effects to tibia bone structure in female CD-1 offspring. Nutrients. 9 (3), 250 (2017).
- Campbell, G. M., Buie, H. R., Boyd, S. K. Signs of irreversible architectural changes occur early in the development of experimental osteoporosis as assessed by in vivo micro-CT. Osteoporos Int. 19 (10), 1409-1419 (2008).
- De Schaepdrijver, L., Delille, P., Geys, H., Boehringer-Shahidi, C., Vanhove, C. In vivo longitudinal micro-CT study of bent long limb bones in rat offspring. Reprod Toxicol. 46, 91-97 (2014).
- Perilli, E., et al. Detecting early bone changes using in vivo micro-CT in ovariectomized, zoledronic acid-treated, and sham-operated rats. Osteoporos Int. 21 (8), 1371-1382 (2010).
- Bouxsein, M. L., et al. Guidelines for assessment of bone microstructure in rodents using micro-computed tomography. J Bone Miner Res. 25 (7), 1468-1486 (2010).
- Li, H., Zhang, H., Tang, Z., Hu, G. Micro-computed tomography for small animal imaging: Technological details. Progress in Natural Science. 18 (5), 513-521 (2008).
- Campbell, G. M., Sophocleous, A. Quantitative analysis of bone and soft tissue by micro-computed tomography: applications to ex vivo and in vivo studies. Bonekey Rep. 3, 564 (2014).
- Meganck, J. A., Kozloff, K. M., Thornton, M. M., Broski, S. M., Goldstein, S. A. Beam hardening artifacts in micro-computed tomography scanning can be reduced by X-ray beam filtration and the resulting images can be used to accurately measure BMD. Bone. 45 (6), 1104-1116 (2009).
- Vazquez, C. M., Molina, M. T., Ilundain, A. Role of rat large intestine in reducing diarrhea after 50% or 80% distal small bowel resection. Dig Dis Sci. 34 (11), 1713-1719 (1989).
- Albrecht, M., Henke, J., Tacke, S., Markert, M., Guth, B. Effects of isoflurane, ketamine-xylazine and a combination of medetomidine, midazolam and fentanyl on physiological variables continuously measured by telemetry in Wistar rats. BMC Vet Res. 10, 198 (2014).
- Schmitz, S., Tacke, S., Guth, B., Henke, J. Comparison of physiological parameters and anaesthesia specific observations during isoflurane, ketamine-xylazine or medetomidine-midazolam-fentanyl anaesthesia in male guinea pigs. PLoS One. 11 (9), e0161258 (2016).
- Canadian Council on Animal Care. Guide to the care and use of experimental animals. , Available from: http://www.ccac.ca/Documents/Standards/Guidelines/Experimental_Animals_Vol1.pdf (1993).
- Stevens, W. C., et al. Comparative toxicities of halothane, isoflurane, and diethyl ether at subanesthetic concentrations in laboratory animals. Anesthesiology. 42 (4), 408-419 (1975).
