Inducción y Micro-CT en la proyección de imagen de malformaciones cavernosas cerebrales en modelo murino

Jaesung P. Choi; Xi Yang; Matthew Foley; Xian Wang; Xiangjian Zheng

doi:10.3791/56476

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Artículo de método

Inducción y Micro-CT en la proyección de imagen de malformaciones cavernosas cerebrales en modelo murino

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DOI:

10.3791/56476

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4 de septiembre de 2017

Jaesung P. Choi¹^,² , Xi Yang³ , Matthew Foley⁴ , Xian Wang¹ , Xiangjian Zheng¹^,²^,³

¹Lab of Cardiovascular Signaling, Centenary Institute, ²Faculty of Medicine, Sydney Medical School, University of Sydney, ³Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University, ⁴Australian Centre for Microscopy & Microanalysis, University of Sydney

En este artículo

Resumen

Este protocolo demuestra la inducción de la enfermedad de malformación cavernosa cerebral en un modelo de ratón y utiliza contraste realzado micro tomografía para medir la carga de lesión. Este método aumenta el valor de modelos de ratón establecido para estudiar la base molecular y terapias potenciales para la malformación cavernosa cerebral y otras enfermedades cerebrovasculares.

Resumen

Las mutaciones en el CCM1 (aka KRIT1), CCM2, o CCM3 (aka PDCD10) gene causar malformación cavernosa cerebral (CCM) en seres humanos. Se han establecido modelos de ratón de la enfermedad CCM por tamoxifeno inducido supresión de genes de Ccm en animales postnatales. Estos modelos de ratón proporcionan herramientas muy valiosas para investigar el mecanismo molecular y aproximaciones terapéuticas para la enfermedad CCM. Un método preciso y cuantitativo para evaluar la progresión y la carga de lesión es fundamental para aprovechar todo el valor de estos modelos animales. Aquí, demostramos la inducción de la enfermedad en un modelo murino de CCM y el uso del contraste mejorado método de (micro-CT) micro tomografía de rayos x a medida CCM lesión carga en cerebros de ratón. En el día postnatal 1 (P1), utilizamos 4-hydroxytamoxifen (4HT) para activar la actividad recombinase de Cre de transgén Cdh5 CreErt2 hender el alelo floxed del Ccm2. Se analizaron las lesiones CCM en cerebros de ratón en P8. Para micro-CT, solución de Lugol yodo basado fue utilizado para mejorar el contraste en el tejido cerebral. Hemos optimizado los parámetros de exploración y utiliza una dimensión del voxel de 9,5 μm, que conducen a un tamaño mínimo de la función de aproximadamente 25 μm. Esta resolución es suficiente para medir el número y volumen de la lesión CCM a nivel global y precisa y proporcionar cartografía 3D de alta calidad de lesiones CCM en cerebros de ratón. Este método aumenta el valor de los modelos de ratón establecido para estudiar la base molecular y terapias potenciales para CCM y otras enfermedades cerebrovasculares.

Introducción

CCM son de paredes delgadas, dilatados malformaciones vasculares en el cerebro con prevalencia de hasta el 0,5% en la población humana¹. CCM puede ser heredado como un desorden dominante debido a las mutaciones de pérdida de función en uno de tres genes: CCM1 (aka Krit1), CCM2y CCM3 (también llamado PDCD10)²^,³^,⁴ ^,⁵^,⁶. Estos genes están presentes en un solo complejo de señalización.

Varios modelos se han desarro....