Este artículo demuestra un modelo murino para el desarrollo de la hiperplasia myointimal (MH) después de lesión de globo.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Lesión basada en globo para inducir la hiperplasia Myointimal de la Aorta Abdominal de ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
El uso de modelos animales es esencial para una mejor comprensión de la MH, una de las principales causas de estenosis arterial. En este artículo, nos muestran un modelo de denudación murine del globo, que es comparable con modelos de lesión de buque establecido en grandes animales. El modelo de denudación de aorta con catéteres de balón imita el ajuste clínico y conduce a cambios fisiológicos y pathobiological comparables. Brevemente, después de realizar una incisión horizontal en la aorta abdominalis, un catéter con balón se introduce en el recipiente, inflado y se introdujo retrogradely. Inflación del balón dará lugar a lesiones de la íntima y overdistension del buque. Después de retirar el catéter, se cerrará la incisión aórtica con puntos de sutura únicas. El modelo mostrado en este artículo es reproducible, fácil de realizar y pueden establecerse de forma rápida y fiable. Es especialmente conveniente para la evaluación de agentes terapéuticos experimentales costosos, que pueden aplicarse de una manera económica. Mediante el uso de diferentes cepas de ratón knockout, podrá evaluarse el impacto de diferentes genes en el desarrollo de MH.
Introducción
Estenosis arterial en las arterias coronarias y periféricas tiene un gran efecto sobre la morbilidad y la mortalidad de pacientes1. Un mecanismo patológico subyacente es la hiperplasia myointima (MH), que se caracteriza por aumento de la proliferación, migración y síntesis de matriz extracelular proteínas del músculo liso vascular células (SMC)2. SMC se encuentran en la capa media del vaso y migrar sobre el estímulo a la superficie de la luz. Señales estimulantes incluyen factores de crecimiento, citoquinas, contacto célula-célula, lípidos, componentes de la matriz extracelular y esquileo mecánico y estiran las fuerzas
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Animales recibieron atención humanitaria conforme a la guía de principios de los animales de laboratorio, prepararon por el Instituto de recursos de animales laboratorio y publicaron por los institutos nacionales de salud. Animales todos los protocolos fueron aprobados por la autoridad local responsable ('' Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (Oficina de salud y protección del consumidor) Hamburgo '').
1. preparación de catéter
Nota: Consulte la Tabla de materiales para obtener información sobre el catéter.
- Tomar el catéter del soporte del catéter.
- Tire de la ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Denudación de globo es un modelo adecuado para estudiar el desarrollo de MH en ratones. Animales recuperan bien de la cirugía y mostrar después de la operación de una excelente condición física. Se estableció este modelo en 50 ratones con menos de 3% de mortalidad debido a la intervención quirúrgica. Figuras 1B -C muestra los principales pasos quirúrgicos. Después de una incisión en la piel a lo largo de la linea alba, identificar la.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Este artículo demuestra un modelo murino para el desarrollo de la hiperplasia myointimal y permite la exploración de los procesos patológicos subyacentes y la prueba de nuevos medicamentos o terapéuticas.
El paso más crítico en este protocolo es la denudación de la aorta. Debe prestarse especial cuidado durante este paso como denudación excesiva dará lugar a la formación de aneurismas y el fracaso del modelo. Por otro lado, si la denudación se realiza escaso, desarrollará myointima muy poco. P.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Christiane Pahrmann para su asistencia técnica.
D.W. fue apoyado por el Max Kade Foundation. T.D. recibidas becas de la Fundación de Kröner otro (2012_EKES.04) y la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. recibió becas de investigación de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 10-0 Sutura Ethilon | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Jeringa | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 sutura de prolene | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 Sutura de prolene | Ethicon | 8706H | |
| Ácido Fucsina | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Tinción tricrómica |
| Solución de recuperación de antígenos | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Tinción tricrómica |
| Bepanthen Pomada para ojos y nariz | Bayer | 1578675 | ungüento para los ojos |
| Betadine | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Número de inventario 000664 | |
| Aplicador de pinza | Fine Science Tools | 18056-14 | MANDÍBULA DIMS: 4 x 0,75 mm LONGITUD: 13 mm |
| Colágeno 3 | ABCAM | AB7778 | Anticuerpo |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Burro anti-Cabra IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Anticuerpo |
| secundario Burro anti-Conejo IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Anticuerpo |
| Secundario Burro anti-Conejo IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secundario anticuerpo |
| Burro anti-Conejo IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Anticuerpo secundario |
| Etanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Etanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Etanol absoluto | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | |
| Pinzas de anticuerpos finas | Herramientas | de ciencia fina11251-20 | |
| Pinzas estándar | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Ácido acético glacial | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Cortapelos | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparina | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| Kit de cauterización para alta temperatura | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Solución de bloqueo |
| Verde claro SF | Waldeck | 1B-211 | Tinción tricrómica |
| Pinza microquirúrgica | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4mm |
| MINI TREK Catéter de Dilatación Coronaria 1,20 mm x 6 mm / Intercambio Rápido | Abbott | 1012268-06U | |
| Hidrato de ácido molibdatofosfórico | Merck | 1.00532.0100 | Tinción tricrómica |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Nº de artículo: 3570160 | |
| Portaagujas | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizol |
| Naranja G | Waldeck | 1B-221 | Tinción tricrómica |
| Parafina | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Microscopía electrónica Ciencias | #157135S | |
| Solución de Ponceau S | Serva Electroforesis | 33427 | Tinción tricrómica |
| Diluyente de anticuerpos primarios | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Solución de montaje | Thermo Fischer | P36930 | Solución de montaje para portaobjetos teñidos con inmunofluorescencia |
| Reemplazable punta fina | Bovie | H101 | |
| Resorcina-Fucsina Weigert | Waldeck | 2E-30 | Tinción tricrómica |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofeno |
| Tijeras | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Tijeras Herramientas de | Fine Science estilo | Vannas15000-03 | |
| Diluyente de anticuerpos secundarios | Dako | S0809 | |
| Adhesivo de acción rápida MINIS 3x1g | UHU | 45370 | cianoacrilato |
| Ted Pella | 21057 | ||
| SM22 | abcam | ab10135 | Anticuerpo |
| SMA | abcam | ab21027 | |
| Placa de tinción de | Ted Pella | 21075 | |
| Microscopio quirúrgico | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrilar | Ethicon | 431962 | Hemostático absorbible |
| Transpore Cinta quirúrgica 3M | 1527-1 | ||
| U-100 Jeringa de insulina | BD Medical | 324825 | |
| Dilatador de vasos | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Kit de hematoxilina de hierro Weigerts Merck | 1.15973.0002 | Xileno tricrómico para tinción | |
| Th. Geyer | 3410 |
Referencias
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
